γ-干扰素基因修饰人肝癌细胞的免疫原性研究

目的研究ＩＦＮ－γ基因修饰后人肝癌细胞的免疫原性。方法利用逆转录病毒载体ＬＸＳＮ分别建立了四种ＩＦＮ－γ基因修饰人肝癌细胞，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交进行鉴定分析，流式细胞仪（ＦＡＣＳ）分析细胞表面ＭＨＣ分子表达，灭活肿瘤细胞体外刺激诱导细胞毒Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）产生。结果Ｓｏｕｔｈｅｒｎ及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果表明，ＩＦＮ－γ基因在宿主细胞中获得了正确整合和表达。ＦＡＣＳ分析结果表明，ＩＦＮ－γ基因修饰后人肝癌细胞表面ＨＬＡⅠ类分子表达强度显著增强，Ⅱ类分子的表达阳性百分率有显著提高。一些ＩＦＮ－γ基因修饰人肝癌细胞在体外诱导细胞毒Ｔ淋巴细胞的能力有所提高。结论ＩＦＮ－γ基因修饰可增强人肝癌细胞的免疫原性，为基因工程瘤苗的临床应用提供了一定依据。     

中国胰岛素依赖性糖尿病病人（HLA－DR9）的HLA－DQB1基因顺序分析

用血清学方法研究显示中国人胰岛素依赖性糖尿病（ＩＤＤＭ）与ＨＬＡ－ＤＲ９相关。鉴于白种人中的研究显示ＩＤＤＭ与ＨＬＡ－ＤＱβ链第５７位氨基酸相关，Ａｓｐ－５７对ＩＤＤＭ呈抗性，ｎｏｎ－Ａｓｐ与ＩＤＤＭ易感性相关。我们用ＰＣＲ技术扩增了中国人中血清学ＤＲ９纯合的ＩＤＤＭ患者和正常对照的ＨＬＡ－ＤＱＢ１基因第二外显子并测定了核苷酸顺序，结果未发现ＩＤＤＭ特异ＨＬＡ－ＤＱＢ１等位基因，但发现ＩＤＤＭ病人ＨＬＡ－ＤＱＢ１５７位均为天冬氨酸。表明中国ＩＤＤＭ患者中的ＨＬＡ－ＤＱＢ１５７位天冬氨酸不一定具有保护个体抵抗ＩＤＤＭ的足够能力。ＩＤＤＭ易感性可能涉及多个基因位点的变化，另外还可能与其它遗传因素及环境因素有关。     

放射诱导经Egr-1启动子调控的腺病毒介导CDglyTK基因的肿瘤靶向表达

目的：构建由Egr-1基因启动子驱动CDglyTK基因表达的腺病毒载体,通过放射诱导调控CDglyTK基因的肿瘤靶向表达,用于肝癌的基因－放射治疗,方法：利用细菌内高效同源重组法,制备腺病毒载体AdEger-CD/TK.MM45T.Li肝癌细胞感染AdEger-CD/TK后,体外观察γ射线照射诱导CDglyTK基因表达及在前药5－FC、GCV存在的条件下钉对存活率的变化。利用荷瘤小鼠肝癌模型观察不同处理的抑瘤效应。结果：体外实验结果显示,γ射线照射可诱导CDglyTK基因在MM45T.Li肿瘤细胞内的表达,并呈剂量依赖性;显著增强细胞对前药5－FC、GCV的敏感性（P＜0．01）;当5－FC和GCV同时存在时具有明显的协同效应。体内抗肿瘤实验结果提示,与单纯肿瘤局部照射（TLI）、瘤内注射AdEger-CD/TK＋腹腔注射5－FC＋GCVD土产且相比,瘤内注射AdEger-CD/TK＋腹腔注射5－FC＋GCV合并TLI组的抗瘤效果最好（P＜0．01）,并可使30％的肿瘤完全消退,且未见全身毒性反应的增加,结论：利用放射调控CDglyTK基因的肿瘤靶向表达,是一种安全、有效的肿瘤基因治疗新策略。     

小鼠γ-干扰素基因修饰瘤苗的抗肿瘤研究

本实验用RT-PCR方法得到小鼠γ-干扰素(mIFN-γ)全长cDNA,通过逆转录病毒载体将其导入小鼠肝癌细胞株,比较研究了该株细胞在mIFN-γ基因修饰前后致瘤性的变化,并制备了瘤苗,对其分泌干扰素的能力及对荷瘤小鼠的治疗作用作了进一步的研究,发现经过mIFN-γ基因修饰后,肿瘤细胞的致瘤性明显降低且瘤苗对荷瘤小鼠有明显的治疗作用,这为进一步开展细胞因子基因治疗工作打下一定基础。     

西拉普利和阿司匹林对实验性大鼠心肌梗死后心脏间质胶原代谢的影响

目的:观察西拉普利和阿司匹林对实验性大鼠心肌梗死(MI)后心脏间质胶原代谢的影响。方法:采用结扎冠状动脉(冠脉)左前降支的方法建立大鼠MI模型,设立假手术组、梗死组、西拉普利组、阿司匹林组、联合组。术后2周测定循环中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、6酮PGF1α(6ketoPGF1α)、内皮素1(ET1)水平和心脏梗死区、左室非梗死区及右室的间质胶原含量。结果:各实验组与假手术组比较,血循环中AngⅡ、ET1升高,6ketoPGF1α降低,左室非梗死区及右室的胶原含量明显升高。各实验组间梗死区的胶原含量相互比较差异无统计学意义。与梗死组比较,阿司匹林组血6ketoPGF1α显著降低,左室非梗死区及右室的胶原含量差异无统计学意义;西拉普利组、联合组血AngⅡ、ET1明显降低,6ketoPGF1α显著升高,左室非梗死区及右室的胶原含量明显降低。联合组与西拉普利组比较,6ketoPGF1α显著降低,而左室非梗死区及右室的胶原含量差异无统计学意义。结论:MI后神经内分泌系统过度激活,循环中AngⅡ、ET1明显升高并导致心脏间质胶原含量的升高。西拉普利通过抑制循环紧素血管紧张素醛固酮系统和内皮素系统,降低AngⅡ和ET1,并通过抑制缓激肽降解,抑制心脏非梗死区间质胶原的过度沉积。阿司匹林对MI后心脏间质胶原的沉积无明显影响。西拉普利与阿司匹林联合应用不影响西拉普利的抑制非梗死区心脏间质胶原过度沉积的作用。     

STUDIES OF HLA-D REGION DNA POLYMORPHISM IN INSULIN-DEPENDENT DIBETES MELLITUS

Restriction fragment length polymorphisms (RFLPs) of peripheral leucocyte DNA in insulin-dependent diabetes mellitus (IDDM) patients and in controls were studied with Southern blot analysis. IDDM has been reportedly associated positively with the HLA-DR3 and-DR4 in Caucasians, with the HLA-DR3 and-DR9 in Chinese, and negatively with the HLA-DR2 in both Caucasians and Chinese, Using an HLA-DQβcDNA probe, an EcoRI 2.2 kb fragment is found associated with DR2 controls (r = 0.78, P=1×10~(-6)), but not with DR2 IDDM patients, their respective frequencies being significantly different (P=0.02). The authors also report here their new findings that the frequencies of the EcoRI3.0 kb and BamHI3.3 kb fragments are both decreased in the patient group (P=0.0032 and P=0.0018 respectively). This suggested certain kinds of mutation such as partial deletion or others in the IDDM patients might have caused the RFLP pattern change as compared to the normal DNA. RFLPs may provide valuable information in searching for the genetic basis of IDDM.     

社区绝经后妇女骨质疏松症的健康教育

目的 普及和加强社区内绝经后妇女对骨质疏松的认知和预防.方法 我科于2015年6月至2016年5月对来自广东省深圳市罗湖区社区的802名绝经骨质疏松妇女进行社区教育,年龄为52~69岁,平均为(60.0±8.9)岁.教育内容包括:①骨质疏松症的知识;②合理饮食和营养;③加强身体锻炼;④保持规律生活和健康习惯;⑤防治剧烈的肢体冲击和配备拐杖.结果 802名绝经骨质疏松妇女在经过关于骨质疏松的普及教育后,情况均有所好转:①骨质疏松诊断标准认知率由11.97%提高到69.82%(P<0.05);②预防认知率从14.96%提升到87.78%(P<0.05);③治疗方法认知率由4.98%提高到60.84%(P<0.05);④对危险因素的意识由9.97%提高到78.80%(P<0.05);⑤社区妇女在饮食营养、锻炼、规律服药和自我保护(配拐杖)等认知均有显著变化(P<0.05).结论 本研究的社区教育取得了较好的效果.今后应加强社区教育,科学的认知、预防和治疗骨质疏松,提高骨质疏松绝经后妇女的生存质量.     

细胞因子基因转导入肿瘤细胞的方法及鉴定

含细胞因子cDNA的缺陷型逆转录病毒载体质粒分别经大肠杆菌扩增、CsCl超离心法大量抽提纯化后,采用磷酸钙共沉淀法转染逆转录病毒包装细胞系PA317。分别收集到含IFN-γ、TNF-α和IL-2基因的缺陷型逆转录病毒上清及只具空白载体质粒pLXSN的病毒上清,这四种病毒颗粒用于转导人肝癌、胃癌细胞,由此建立了感染人肝癌、胃癌细胞株的转基因方法,该方法简便有效,可获得单克隆化的细胞因子基因修饰株,基因修饰株细胞抽提的DNA经PCR扩增后确证其含有细胞因子基因的逆转录病毒基因组存在,SacI酶切后用相应细胞因子探针作Southern杂交证明其未发生重排,抽提的mRNA经逆转录PCR及Northern杂交证明有相应细胞因子及筛选标记基因的表达,生物活性分析也证实各基因修饰细胞培养上清液中有一定活性的相应细胞因子,     

肿瘤坏死因子基因转导肿瘤浸润淋巴细胞的初步研究及应用

用单纯疤疹病毒(HSV)的缺陷株作为载体,感染肿瘤细胞治疗脑瘤的研究已取得了不少进展.本文报道将HSV—tk基因转移联合抗瘤药物GCV可使荷脑瘤大鼠长期存活.9L神经纤维肉瘤细胞用HSV载体hrR3转染,hrR3缺乏RNA还原酶,只能在肿瘤细胞中复制而不能在神经细胞中复制存活,同时还携带病毒胸苷激酶(tk)基因,RH105无tk基因,转染hrR3的9L细胞体外培养,加入GCV1μg/ml共孵育,结果发现9L细胞被杀死的数目比单纯感染hrR3的细胞死亡数目增加23%.GCV加到不表达tk基因的RH105载体转染的9L细胞体系中没有杀伤作用.将神经纤维肉瘤9L细胞4×10~4接种到Fischer 344CD大鼠脑前叶,5天后将hrR3载体2×10~7PFU/10μl直接定位注射至脑瘤部位.结果发现hrR3载体治疗可使20%的大鼠存活时间超过5个月,而生理盐水组全部死亡.接种病毒后同时用GCV7.5mg/kg治疗7天,可使48%的荷9T肿瘤细胞的大鼠存活时间超过5个月PH105感染的治疗组大鼠全部死亡,组织化学检查证明外源性的tk基因在肿瘤细     

PA317产生高滴度带有人TNF-α基因逆转录病毒的研究

逆转录病毒介导的基因转移技术要过渡到临床应用，主要解决如何使病毒载体具有高滴度而不具有复制活性．本文旨在探索建立一种合适的方法，能产生高滴度而且是安全的逆转录病毒载体。采用带有人肿瘤坏死因子基因的LXSN载体转染PA317包装细胞，建立产病毒的包装细胞株，结果表明：病毒载体滴度受包装培养液体积和胎牛血清浓度影响：包装细胞在32℃产生的病毒滴度比37℃高，而且比较稳定。产病毒包装细胞和被感染的靶细胞经PCR分析显示．被转染和被转导的细胞都有病毒基因的整合．而且包装细胞不会产生具有复制活性的逆转录病毒，因此能进一步用于临床研究．