顺铂对视网膜母细胞瘤细胞B7-H1表达的影响

　　目的　观察顺铂对视网膜母细胞瘤（RB）细胞B7-H1表达的影响,并探讨其作用机制。方法　分别采用浓度为0.375、0.750、1.500、3.000、6.000 μg/ml顺铂处理人RB细胞HXO-Rb₄₄细胞,作为不同浓度实验组;以RPMI 1640细胞培养液处理HXO-Rb44细胞作为空白对照组。采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测HXO-Rb₄₄细胞B7-H1 mRNA的表达;免疫荧光染色和流式细胞术检测HXO-Rb₄₄细胞B7-H1蛋白表达。采用1.500 μg/ml顺铂处理HXO-Rb₄₄细胞0、15、30、60、120 min,蛋白免疫印迹（Western blot）检测细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）的磷酸化水平。结果　0.375、0.750、1.500、3.000、6.000 μg/ml组HXO-Rb₄₄细胞B7-H1 mRNA表达均较空白对照组高,差异有统计学意义（F=395.478,P=0.000）。0.375、0.750、1.500、3.000、6.000 μg/ml组HXO-Rb₄₄细胞B7-H1蛋白表达均较空白对照组高,差异有统计学意义（F=112.03,P=0.000）。 Western blot 检测显示,1.500 μg/ml顺铂激活HXO-Rb₄₄细胞ERK1/2蛋白的磷酸化水平;随时间延长,其磷酸化水平逐渐增高,至30 min达高峰,以后又逐步下降。结论　顺铂能促进RB细胞B7-H1 mRNA和蛋白的表达;ERK1/2信号通路可能参与了这一过程。      

上调 ECRG4表达对鼻咽癌 CNE1细胞增殖、克隆形成和侵袭的影响

目的：研究 ECRG4对鼻咽癌细胞生物学行为的影响。方法：构建稳定表达 ECRG4的鼻咽癌细胞株CNE1、ECRG4c1和 ECRG4c2。MTT 实验、克隆形成实验和侵袭实验分别测定 ECRG4高表达对鼻咽癌细胞增殖能力、克隆形成能力和侵袭能力的影响。结果：成功构建 ECRG4高表达的鼻咽癌细胞,和对照细胞相比, ECRG4的高表达可以抑制 CNE1细胞的增殖能力、克隆形成能力和侵袭转移能力。结论：ECRG4的高表达抑制 CNE1细胞的增殖、克隆形成和侵袭转移能力。在鼻咽癌细胞中发挥抑癌基因功能。     

MiR-145对视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨MicroRNA145（miR．145）对视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖和凋亡的影响。方法实验研究。将人视网膜母细胞瘤细胞株Y79分为四组：miR-145干预组、阴性miRNA对照组、空脂质体组、空白对照组。脂质体转染法将miR．145转入Y79细胞;荧光定量PCR检测转染后48h成熟miR．145的表达：CCK．8法检测转染48h后的细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞周期;AnnexinV／PI免疫荧光双染色和流式细胞术检测细胞凋亡。各组数据的比较采用单因素方差分析。结果采用脂质体转染方法．成功将miR．145转染至Y79细胞;荧光定量PCR显示：miR．145干预组成熟miR．145表达（79．06±3．45）明显增加,与阴性miRNA对照组（1．06±0．03）、空脂质体组（O．93±O．02）和空白组（1．00±0．02）比较,差异有统计学意义（F=229．853,P〈0．05）;miR-145干预组的增殖抑制率（21．64％）明显高于阴性miRNA对照组（2．57％）、空脂质体组（3．97％）（F=34．130,P〈0．05）;miR．145抑制Y79细胞周期于G1期：AnnexinV／PI免疫荧光双染色和流式细胞术显示miR．145干预组AnnexinV阳性和AnnexinV／PI双阳性细胞明显增多,阳性率明显高于其他三组,差异有统计学意义（F=35．434,P〈0．05）。结论miR-145可以抑制视网膜母细胞瘤细胞Y79的增殖,诱导细胞凋亡。     

ECRG4增强鼻咽癌细胞对顺铂敏感性的初步研究

目的：研究 ECRG4在鼻咽癌细胞对顺铂反应性中的影响。方法：以不同浓度的顺铂分别处理ECRG4稳定转染的 CNE1细胞和对照细胞,MTT 实验检测 ECRG4高表达对鼻咽癌细胞对化疗敏感性的影响。流式细胞术、免疫荧光和 Western Blot 检测 ECRG4高表达对顺铂处理后的鼻咽癌细胞的细胞凋亡和细胞自噬的影响。用抑制细胞自噬的药物预先处理鼻咽癌细胞,观察该药物对 ECRG4高表达增强的鼻咽癌细胞化疗敏感性的影响。结果：和对照细胞相比,ECRG4的高表达显著增强鼻咽癌细胞对顺铂的敏感性。流式细胞术分析和细胞凋亡相关蛋白的 Western Blot 分析显示 ECRG4高表达对顺铂诱导的鼻咽癌细胞的细胞凋亡没有显著影响。免疫荧光和 Western Blot 分析显示 ECRG4的高表达上调自噬微管相关轻链蛋白3（LC3）的含量。同时抑制细胞自噬的药物可以降低 ECRG4高表达对 CNE1细胞对顺铂敏感性的促进作用。结论：ECRG4高表达促进鼻咽癌细胞对顺铂的敏感性,并且该作用是通过诱导细胞自噬的途径实现的。ECRG4有可能用于鼻咽癌个体化治疗方案的分子标记。     

B7-H1在直肠癌与镶嵌血管中的表达及意义

目的 探讨共刺激配体B7-H1在直肠癌和镶嵌血管中的表达及临床意义.方法 应用免疫组织化学方法 观察50例直肠癌患者癌组织和镶嵌血管中的B7-H1表达,探讨B7-H1表达和直肠癌的病理学特征及预后间的关系.结果 随访期13例患者死亡,37例存活患者的中位随访期为3.4年(0～5年);64%的标本显示蛋B7-H1阳性染色,中位染色评分为2.5(0～4);B7-H1阳性表达与临床和病理特征呈逆相关(P＜0.05).15例(30%)的肿瘤患者同时B7-H1和镶嵌血管表达阴性,3例(6%)B7-H1阴性而镶嵌血管阳性,13(26%)B7-H1阳性而镶嵌血管阴性,19例(38%)B7-H1和镶嵌血管同时阳性表达.B7-H1阳性的肿瘤患者较N7-H1阴性的患者更可能镶嵌血管表达阳性(59.3%比11.1%;P＜0.01).双阳性组的生存率明显低于阴性或单阳性组(P＜0.01).21例表达镶嵌血管的直肠癌标本中有8例显示镶嵌血管内的内皮细胞或肿瘤细胞存在B7-H1的表达.结论 在直肠癌及镶嵌血管中阳性表达的B7-H1可作为直肠癌患者的预后标志.B7-H1参与直肠癌及镶嵌血管的免疫逃逸.     

miR-145在结直肠癌组织的表达及临床意义

目的 探讨结直肠癌组织microRNA-145(miR-145)的表达与患者临床症状,尤其是肿瘤远处转移或浸润生长的关系.方法 收集88例手术切除的结直肠癌组织,42例远离癌组织的正常结直肠组织.提取这些标本的总RNA,在使用微小RNA的引物反转录后,用miR-145特异性引物做荧光定量聚合酶链反应(PCR).结果 荧光定量PCR显示:结直肠癌组织miR-145的表达量明显降低,癌组织和正常组织的miR-145相对水平分别为31.65±27.97和189.39±159.30,两者比较差异有统计学意义(P＜0.01).miR-145的低表达,与年龄,性别,肿瘤原发病灶的大小,有无淋巴转移明显相关(P＞0.05),但与细胞分化程度,远处转移或浸润其他器官是否发生密切相关.高分化(n=25)、中分化(n=34)和低分化(n=29)的癌组织miR-145均值分别为41.96±38.58、29.69±20.43和26.12±23.13,组间差异有统计学意义(P＜0.01).有远处转移或浸润其他器官的19个病例miR-145均值仅为14.45±9.98,远低于癌症患者的均值(P＜0.01).结论 结直肠癌组织中miR-145的表达低于正常组织,这与癌细胞的分化程度,远处转移或浸润生长密切相关.

Abstract：

Objective To study the expression of microRNA-145 (miR-145) in colorectal cancer tissues and its relationship to tumor cell differentiation, tumor metastasis or invasion. Methods Colorectal cancer tissues were collected from 88 operated patients. Forty-two cases of normal colorectal samples served as controls. Total RNA was extracted from these tissues and reversely transcribed to cDNA by using microRNA specific primers. miR-145 levels were assayed by real-time polymerase chain reaction (PCR).Results miR-145 relative level in colorectal tumor and nomad colorectal tissues was 31.65 ± 27. 97 and 189. 39 ± 159.30 respectively, with the difference being statistically significant between them ( P ＜0. 01 ).There was no relationship between miR-145 level and patients' age and sex, size of the tumor, lymph node metastasis (P ＞ 0. 05 ). However, the low expression of miR-145 was related to the differentiation of tumor cells. In the cells with higher differentiation (n =25), moderate differentiation (n =34) and lower differentiation (n =29), miR-145 levels were 41.96 ± 38.58, 29. 69 ± 20. 4 and 26. 12 ± 23. 13 respectively (P ＜0. 01 ). miR-145 was even lower when the tumor had remote metastasis and invasion to neighborhood organs. In 19 patients with the situations, miR-145 levels were only 14. 45 ± 9. 98, significantly lower then the average level of cancer patients (P ＜ 0. 01 ). Conclusion The expression of miR-145 was reduced in colorectal cancer and related to tumor cell differentiation. In the patients with metastasis and invasion the miR-145 expression level was even lower.     

化疗药物在结肠癌细胞SW480对免疫共刺激分子B7-H1的诱导及其机制

常用化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)、紫杉醇可引起免疫共刺激分子B7-H1的表达,但机制不明[1].大量研究表明B7-H1的表达可引起免疫抑制和肿瘤细胞的抗凋亡,并与肿瘤的复发、转移、患者的预后密切相关[1],我们对化疗药物5-Fu、紫杉醇诱导B7-H1的现象在结肠癌细胞SW480进行了研究并探讨其机制.     

不同胃黏膜病变中iNOS表达与Hp的关系

目的:检测诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)在胃癌前病变及胃癌的表达,及其与幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染的相关性,探讨Hp感染与胃癌发生的关系。方法:收集慢性浅表性胃炎(chronic superficial gastritis,CSG),慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生(Intestinal metaplasia,IM),慢性萎缩性胃炎伴上皮内瘤变(Intraepithelial neoplasia,IN)各30例,胃癌(gastric cancer,GC)40例。采用SP免疫组化法检测iNOS蛋白的表达,warthin-starry银染法检测胃黏膜Hp感染。结果:CSG、IM、IN、GC组织中iN-OS表达呈逐渐增强趋势,差异具有显著性(P<0.05)。结论:CSG、IM、IN、GC组织中Hp感染的胃黏膜组织中,iNOS的表达高于无Hp感染的患者。     

重组CEA和IL-2抗肿瘤基因疫苗的构建及其抗肿瘤作用研究

目的成功构建重细CEA、CEA／IL-2抗肿瘤基因疫苗,并检测其激活的淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。方法将CEA、CEA／IL-2基因导入真核表达质粒pcDNA3．1,并转染入DC细胞,通过转染DC细胞活化淋巴细胞,将活化的淋巴细胞与人CEA＋肝癌细胞共培养,检测其对肿瘤细胞的杀伤作用。结果重组CEA、CEA／IL-2组均检测出较强的抗肿瘤效应,且重组CEA／IL-2组与重组CEA组差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论联合CEA／IL-2基因疫苗具有抗肿瘤作用,且其抗肿瘤作用明显优于单基因CEA基因疫苗,证实了重组肿瘤基因疫苗对肿瘤细胞的杀伤作用。     

辅助性T细胞17和实验性自身免疫性葡萄膜炎

辅助性T细胞17(T-helper type 17,Th17)是一种以分泌白介素-17(IL-17)为特征的辅助性T淋巴细胞亚型,在自身免疫性疾病巾的作用逐渐得到重视.葡萄膜炎是最常见的致盲眼病,一直是眼科研究的热点和难点.实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveoretinit...