抗人核内不均一核糖核蛋白A2/B1抗体可变区基因克隆、串联和表达

目的克隆抗人核内不均一核糖核蛋白A2/B1(heterogeneousnuclearribonucleoproteinA2/B1,HnRNPA2/B1)单克隆抗体的重链可变区(variableregionofheavychain,VH)和轻链可变区(variableregionoflightchain,VL)基因,构建抗HnRNPA2/B1单链抗体(singlechainFv,ScFv)基因,并在大肠杆菌表达。方法采用斑点ELISA、Western印迹和免疫组化检测抗HnRNPA2/B1单克隆抗体3E8的特异性,并通过逆转录-聚合酶链反应、重叠延伸PCR来克隆、串联VH和VL基因,构建抗HnRNPA2/B1ScFv基因pET28(a )表达载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳、竞争抑制ELISA检测表达产物。结果3E8抗体能特异性地与HnRNPA2/B1合成肽以及3株人肺癌细胞内HnRNPA2/B1结合;克隆的VH基因为345bp,VL基因为309bp,符合小鼠抗体可变区特性;抗HnRNPA2/B1ScFv蛋白以包涵体形式表达,分子量约28000,并具有与抗原结合活性。结论成功构建了抗HnRNPA2/B1ScFv基因克隆,并在大肠杆菌中获得了功能性表达,为阐明HnRNPA2/B1与肺癌相关性奠定了实验基础。     

肝脏内非胸腺来源的T细胞及其免疫学,生物学功能

小鼠肝窦内存在的一群特殊的非胸腺来源的Ｔ淋巴细胞，它们可能在肝脏内而非胸腺内分化成熟。这群细胞表面具有中等密度Ｔ细胞受体、静止状态下表达ＩＬ－２受体β链，且与自身免疫性疾病，细菌感染、恶性肿瘤的发生，防御等有密切关系。     

载~(131)I和阿霉素“双弹头”免疫毫微粒的抗癌作用

我们采用氯胺T法将放射性核素131I结合到载阿霉素(ADR)的人血清白蛋白免疫毫微粒(ADR—HSA—NP)上,构建了载131I和ADR“双弹头”免疫毫微粒(131I-HAb18-ADR-HSA-NP),并进行了体外培养细胞及荷瘤裸鼠体内抗人肝癌细胞株作用的观察。 一、材料和方法 1.主要材料:ADR-HSA-NP,本室自制;抗人肝癌单抗HAb18,第四军医大学     

免疫毫微粒的内化作用及其逆转人肝癌细胞多药耐药性的研究

目的：观察免疫毫微粒能否内化进入人肝癌细胞及其多药耐药性(MDR)细胞，研究免疫毫微粒能否逆转MDR。方法：将抗人肝癌阿霉素白蛋白免疫毫微粒(HAbl8-ADR-HSA-NP)与人肝癌株SMMC-7721细胞及其MDR细胞(SMMC-7721／MDR^ )共同孵育，采用扫描电镜，激光共聚焦显微镜，透射电镜技术观察免疫毫微粒与靶细胞的结合及免疫毫微粒的内化过程；采用MTT比色分析法测定免疫毫微粒对靶细胞的杀伤率。计算免疫毫微粒对靶细胞的IC50和MDR细胞的耐药倍数(RF)。结果：激光共聚焦显微镜观察，SMMC-7721细胞表面和胞浆中均有许多荧光毫微粒；透射电镜观察。免疫毫微粒与SMMC-7721细胞及其MDR细胞在37℃孵育后，胞浆中可见有免疫毫微粒，随时间的延长细胞变性损伤越严重；当SMMC-7721及其MDR细胞预先经HAbl8抗体处理，再与HAbl8-ADR-HSA-NP孵育，则胞浆中未见免疫毫微粒；扫描电镜显示，多个HAbl8-ADR-HSA-NP紧密结合在SMMC-7721／MDR^ 表面。MDR细胞对于免疫毫微粒的耐药倍数(2.1)较其对于游离ADR(4．4)明显降低。结论：人肝癌特异性阿霉素白蛋白免疫毫微粒通过抗体介导能特异性内化进入人肝癌SMMC-7721细胞及其MDR细胞；该免疫毫微粒能增强MDR细胞对阿霉素杀伤的敏感性。有一定程度逆转MDR作用。     

总攻疗法治疗泌尿系结石临床观察

我们自1991年～1993年用总攻疗法治疗泌尿系结石30例,取得了满意疗效,报道如下:1 资料与方法 一般资料:60例泌尿系结石患者均有腰痛或下腹痛。其中腰痛20例,下腰痛40例。肉眼血尿22例,镜下血尿28例。所有患者都是B超多次复查、静脉肾盂造影后确诊。均为住院病人。并随机分为两组。治疗组30例,年龄12～60岁,平均30±12岁,男:女为8     

处理气管外伤1例报告

我院1987年11月收治1例气管刀刺伤患者,疗效好,报告如下。患者男,21岁。以前上胸部、左上臂刀刺伤伴气急半小时急诊入院。X 线检查:右侧气胸,肺压缩90％。即行清创缝合及右侧胸腔闭式引流术。术中见胸骨柄左上方胸锁关节下方皮肤伤口约2cm 少量渗血,气体溢出,左上臂内侧皮肤伤口约1.5cm,深达3cm,向腋窝达肌层,少量渗血。术后气急症状缓     

原发性肝细胞癌的HLA-Ⅰ类抗原表达

目的　确定体内原发性肝细胞癌细胞的 HL A - 类抗原表达情况。方法　采用免疫组织化学L SAB法对 6例原发性肝细胞癌冰冻组织进行研究。结果　 6例标本的肝癌细胞都有较强的 HL A- 类抗原表达。结论　从 HL A- 类抗原表达角度看 ,研制肝癌 CTL疫苗是可行的     

TNF-αRⅠ、Ⅱ的mRNA在正常及病理肝组织中表达的研究

本研究运用RT-PCR的方法在5例正常人肝组织、5例肝癌组织、5例肝癌癌旁组织以及5例重症肝炎穿刺肝组织标本中扩增出了TNFRⅠ、TNFRⅡ基因转录产物Cdna的特异性片段,并初步分析了TNFRⅠ、TNFRⅡ在各组标本中的表达情况,结果显示正常人肝组织中有TNFRⅠ、TNFRⅡ的低水平表达,而在病理状态下,TNFRs的表达有明显的上调,这种上调作用可能对TNF-α介导的肝损伤有重要作用.     

阿霉素人血清白蛋白微球的制备及其性质的初步研究

目的 制备载阿霉索人血清白蛋白微球(ADR-HSA-MS)，并研究其药剂学性质和体外对肿瘤细胞的细胞毒作用。方法 以阿霉索(ADR)、人血清白蛋白(HSA)为材料，采用乳化高温固化法制备ADR-HSA-MS；采用光镜、电镜技术观察ADR-HSA-MS的形态；采用胃蛋白酶消化法、动态透析法分别测定ADR-HSA-MS的载药量，体外释药性质；采用MTT比色分析法测定ADR-HSA-MS对人肝癌株SMMC-7721细胞的细胞毒作用。结 ADR-HSA-MS圆球状，表面较光滑，平均粒径为1．2μm，外观为红色；ADR-HSA-MS表观载药量为2．73％，有效载药量为1．69％，释药呈持续缓慢状态，至5d时，其累积释药分数达50％，最大累积释药分数为65％；ADR-HSA-MS与SMMC-7721人肝癌细胞孵育4d后，对SMMC-7721细胞具明显杀伤作用，在0．3～2．5μg／ml ADR质量浓度范围内呈一定剂量依赖性，其杀伤曲线与游离ADR接近。结论 采用乳化高温固化法能制备出具缓释性质的载阿霉素人血清白蛋白微球。     

白僵菌的急性毒性及致敏实验观察

目的　对生物农药白僵菌原药进行急性经口、经皮、吸入毒性试验 ,眼刺激试验和致敏 (皮肤变态反应 )试验。方法　按照《农药登记毒理学试验方法》(GB1 5 6 70— 1 995 )进行操作。结果　该受试物对雄、雌性大鼠急性经口LD50 >5 0 0 0mg kg ;对雄、雌性大鼠急性经皮LD50 (4h) >2 1 5 0mg kg ;对雄、雌性大鼠急性吸入LC50 (2h) >5 0 0 0mg m3;对实验兔急性眼刺激的平均指数为 0 ;对豚鼠致敏 (皮肤变态反应 )试验 ,致敏率为 1 6 7%。结论　该受试物急性经口属微毒性、急性经皮属低毒性、急性吸入属微毒性 ,眼刺激试验为无刺激性 ,致敏 (皮肤变态反应 )试验属Ⅱ级轻度致敏物