紫癜性肾炎患儿血清和尿液基质金属蛋白酶-9的水平及其临床意义

目的探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在儿童紫癜性肾炎（HSPN）中的作用及其与肾脏损害的关系,为防治HSPN提供理论依据。方法收集54例HSPN、54例过敏性紫癜（HSP）患儿以及30例健康对照组儿童的血清和尿液,用ELISA法检测血清、尿液MMP-9水平,以全自动生化分析仪检测HSPN组和HSP组患儿血清β2-MG,以双缩脲比色法检测24 h尿蛋白定量。结果（1）HSPN组血清MMP-9为（259.32±78.38）ng/ml,显著高于HSP组（134.09±49.93）ng/ml（P〈0.05）和对照组（46.25±12.87）ng/ml（P〈0.01）,HSPN组尿液MMP-9为（54.11±15.74）ng/ml显著高于HSP组（30.83±8.73）ng/ml（P〈0.05）和对照组（23.60±4.59）ng/ml（P〈0.01）;（2）根据24 h尿蛋白含量将HSPN组患儿分成三个亚组：A组（尿蛋白〈0.15 g/24 h）、B组（尿蛋白0.15-1.0 g/24 h）、C组（尿蛋白〉1.0 g/24 h）,C组患儿血清和尿液MMP-9含量显著高于A组（P〈0.01）和B组（P〈0.05）,A组与B组间差异无统计学意义（P〉0.05）;（3）HSPN组血清MMP-9与24 h尿蛋白定量、血β2-MG呈正相关（r=0.564,P=0.031;r=0.676,P=0.026）,尿液MMP-9与24 h尿蛋白定量、血β2-MG呈正相关（r=0.787,P=0.023;r=0.536,P=0.015）。结论HSPN患血清及尿液MMP-9增高,可能参与HSPN的发生发展过程。     

全反式维A酸对缺氧性肾小管上皮细胞Prohibitin1和Prohibitin2表达的影响

目的 探讨全反式维A酸(ATRA)对缺氧性肾小管上皮细胞(RTEC) Prohibitin1(PHB1)和Prohibitin2(PHB2)表达的影响.方法 购自上海生物细胞库的大鼠近端肾小管上皮细胞株NRK-52E,采用混有胎牛血清和双抗的培养基(100 mL培养基中加5 mL胎牛血清和1 mL双抗)在37℃、50 mL/L二氧化碳的培养箱中培养.传代3次后分为正常组、模型组和ATRA干预组.正常组细胞不做任何处理,模型组细胞置于真空罐中,负压吸引器吸尽残余空气,充人缺氧气体(950 mL/L氮气和50 mL/L二氧化碳)密封建立缺氧性RTEC损伤模型,ATRA干预组细胞中加入0.1 μmol/L ATRA后参照模型组的方法进行缺氧.于缺氧24 h、36 h采用实时荧光定量PCR法测定各组NRK-52E细胞PHB1、PHB2、转化生长因子-β1(TGF-β1)的mRNA表达,Western blot法检测各组NRK-52E细胞PHB1、PHB2、TGF-β1的蛋白表达.结果 1.与正常组比较,模型组和ATRA干预组2个时间点NRK-52E细胞的PHB1和PHB2的蛋白表达量及其mRNA表达量均显著下降(P均＜0.05),缺氧时间越长,表达量越低；与模型组比较,ATRA干预组2个时间点NRK-52E细胞的PHB1和PHB2的蛋白表达量及其mRNA表达量均显著上升(P均＜0.05).2.与正常组比较,模型组和ATRA干预组2个时间点NRK-52E细胞的TGF-β1的蛋白表达量及其mRNA表达量均显著上升(P均＜0.05),缺氧时间越长,表达量越高；与模型组比较,ATRA干预组2个时间点NRK-52E细胞的TGF-β1的蛋白表达量及其mRNA表达量均显著下降(P均＜0.05).结论 ATRA可显著增强缺氧性RTEC中PHB1和PHB2蛋白表达量及其mRNA表达量,可能对缺氧性RTEC有保护作用.     

肾病综合征合并心律失常患儿1例临床特点及基因变异分析

目的：总结分析1例激素耐药性肾病综合征（SRNS）合并心律失常（房室传导阻滞、室性早搏）患儿的临床特征和基因变异特点,提高临床医师对该病的认识。方法：收集1例临床确诊为SRNS、房室传导阻滞和室性早搏患儿的临床资料,复习相关文献,分析其基因变异与临床特征的联系。结果：女性患儿,8岁2个月,临床表现为大量蛋白尿、低蛋白血症、高胆固醇血症、肾小球源性血尿、高血压,肾脏病理为局灶节段性肾小球硬化（FSGS）,予泼尼松和他克莫司治疗无效,符合SRNS的诊断,同时合并房室传导阻滞、室性早搏等心律失常表现。高精度临床外显子检测发现,患儿Podocin编码基因（NPHS2）存在复合杂合突变c.412C>T(p.R138*)和c.8710T(p.R291W);Sanger测序验证提示c.8710T(p.R291W)来源于母亲（杂合状态）,c.412C>T(p.R138*)为新发变异（杂合状态）。检出心脏钠通道孔隙形成α亚基基因（SCN5A）存在杂合变异c.4018G>A(p.V1340I),Sanger测序验证提示该变异来源于父亲（杂合状态）。结论：NPHS2基因突变是导致本例患儿发...     

肾小球硬化大鼠血清和肾脏apoE水平及作用

载脂蛋白E(apolipoprotein,apoE)作为脂类代谢中一种重要配体,在肾脏中主要表达于肾小球系膜细胞和肾小管上皮细胞.肾脏疾病患者常出现继发性脂代谢紊乱和apoE水平升高.研究提示,apoE可能参与肾小球硬化(glomerulo-sclerosis,GS)复杂的病理过程[1].本研究通过建立GS大鼠模型,采用免疫组化法检测肾脏组织apoE、Ⅳ型胶原(collagenⅣ,Col-IV)和纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的表达,用双抗体夹心ELISA试剂盒检测血清中apoE蛋白表达,实时荧光定量PCR法检测肾脏组织apoE mRNA表达,初步探讨apoE在GS发病中的作用机制.     

29例儿童肾发育不良的临床特点及治疗预后分析

目的 分析儿童肾发育不良的临床特点、治疗方法及预后,为提高儿科医师诊治水平提供帮助.方法 回顾性分析2000年1月至2014年4月在广西医科大学第一附属医院儿科和小儿外科住院,临床病理诊断符合肾发育不良患儿的临床表现、治疗及预后情况.结果 本组病例共29例,男17例,女12例.单侧肾发育不良28例,双侧肾发育不良1例.临床表现为尿失禁6例,腹痛4例,尿频、尿急、尿痛4例,体重不增1例,双下肢疼痛及多饮多尿1例,发热1例,反复浮肿1例,头痛抽搐1例,呕吐、烦躁不安1例,无临床表现9例.辅助检查:29例均行超声检查,20例行泌尿系磁共振水成像(MRU)检查,12例行多层螺旋CT三维尿路成像(MSCTU)检查,20例行99mTc-DTPA(99 m锝-二乙烯三胺五乙酸)肾动态显像检查,5例静脉尿路造影(IVP)检查,均提示肾发育不良和功能完全丧失或肾功能严重受损.双肾发育不良,或合并肾小管酸中毒,无手术指征或家属不愿意手术治疗者均行保守治疗(共8例),单侧肾发育不良行全麻下肾切除术,其中腹腔镜手术11例,开放性手术10例.随访及预后:定期门诊随访3个月~3年,保守治疗患儿1例浮肿消退,但有反复,1例多饮多尿好转,3例肾功能不全,失访3例,生长发育均落后于同龄儿.手术患儿临床症状消失,尿常规及肾功能正常,生长发育正常.结论 儿童肾发育不良以单侧肾发育不良常见,临床表现无特异性;超声和泌尿系磁共振水成像是诊断本病的首选方法.手术切除发育不良肾是治疗的最佳方法.     

LMX1B基因突变检测对激素耐药型肾病综合征患儿的早期诊断价值

目的分析LMX1B基因突变检测对激素耐药型肾病综合征(SRNS)患儿的早期诊断价值。方法正常儿童(对照组)、激素敏感型肾病综合征患儿(SSNS组)、SRNS患儿(SRNS组)各100例,采用PCR法扩增LMX1B基因第4、5、6外显子,以琼脂糖凝胶电泳鉴定产物后,进行单链构象多态性分析,对迁移率或条带异常者进行DNA测序,比较3组LMX1B基因突变情况。结果第4、5、6外显子扩增产物符合LMX1B基因外显子片段进行纯化和测序标准。突变均位于第4外显子,第5、6外显子未发现明显突变。纯合错义突变c.745G>A(R246K)SRNS组5例,SSNS、对照组均0例,SRNS组与其他两组比较,P均<0.05;纯合错义突变c.731-733T>C、C>G、G>A(S242R)SRNS组23例、SSNS组9例、对照组2例,SRNS组与对照组比较,P<0.05;无义突变c.733-734ins T(K243*)SRNS组9例、SSNS组17例、对照组0例,SRNS、SSNS组与对照组比较,P均<0.05;同义突变c.733G>C(S242S)SRNS组2例、SSNS组11例、对照组3例,P均>0.05。结论 LMX1B基因纯合错义突变c.745G>A可能是原发性肾病综合征患儿产生激素耐药的原因,检测该指标对SRNS患儿早期诊断具有一定价值。     

原发性肾病综合征载脂蛋白B基因EcoR I位点遗传变异对血脂代谢影响的研究

高脂血症(HLP)是儿童原发性肾病综合征(PNS)常见的并发症,不仅会促进PNS进展,而且还可增加成年后罹患心血管疾病(CVD)的危险性.载脂蛋白B(ApoB)基因是CVD发病机制研究中重要的候选基因,已经有研究表明其EcoR I位点多态性与早发型冠心病及胆石症等疾病的发生密切相关,但与PNS血脂代谢紊乱的关系至今未见报道.     

全反式维甲酸对大鼠肾脏MMPs/TIMPs影响

目的 观察全反式维甲酸(ATRA)对肾小球硬化(GS)大鼠肾脏基质金属蛋白酶及其组织抑制因子的影响,并探讨其作用机制.方法 80只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、苯那普利组和ATRA组,每组20只.用单侧肾切除加尾静脉注射阿霉素建立GS模型,造模后12周末处死.肾脏病理切片行苏木素-伊红(HE)染色,计算肾小球硬化指数(GSI);免疫组化法检测肾组织Ⅵ型胶原(Col-Ⅳ)、纤维连接蛋白(FN)的蛋白表达;实时定量反转录-聚合酶链反应(Realtime RT-PCR)法检测肾组织基质金属蛋白酶-2、9(MMP-2、9)及其组织抑制因子-1(TIMP-1)mRNA的表达.结果 与模型组比较,ATRA组与苯那普利组大鼠GSI均显著降低(均P＜0.01),Col-Ⅳ和FN的蛋白表达均显著减少(均P＜0.05),TIMP-1 mRNA表达显著下调(P＜0.05),MMP-2和MMP-9的mRNA表达均显著上调(均P＜0.05),但2组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 ATRA可能通过下调GS大鼠肾组织TIMP-1的表达,上调MMP-2和MMP-9的表达,促使肾小球细胞外基质(ECM)的降解增加,减少ECM积聚等机制,起到减轻GS的作用.     

肾小球硬化大鼠肾脏组织载脂蛋白E的表达及作用

摘要：目的 探讨载脂蛋白E（apoE）在肾小球硬化(GS)大鼠肾脏组织中的表达及作用。方法 80只雄性8周龄Wistar大鼠随机分组为假手术组和模型组,每组40只。采用左侧肾切除加1周后尾静脉注射阿霉素(5mg/kg)的方案建立大鼠GS模型。于造模后第9周末和第13周末,每组各处死20只大鼠,取右侧肾组织作肾脏病理学检查并计算肾小球硬化指数（GSI）,免疫组织化学法检测肾组织IV型胶原（Col-IV）、纤维连接蛋白（FN）和apoE蛋白表达,用RT-PCR检测肾脏组织apoE mRNA表达。结果　（1）与假手术组比较,模型组大鼠各时间点：①病理学检查显示：GSI指数显著增高（P<0.01）,病程越长,GSI越高。②肾脏组织Col-IV和FN蛋白表达均显著增高（P<0.01）,病程越长,表达越高。③肾脏组织apoE蛋白及其mRNA表达显著增加（P<0.01）,病程越长,表达越高;（2）相关性分析：模型组大鼠肾脏组织apoE蛋白表达与GSI、Col-IV和FN蛋白表达均呈显著正相关（r=0.911,0.935,0.906;P均<0.01）。     

转化生长因子-β1/Smad3信号通路在肾间质纤维化大鼠肾脏组织中的表达和作用

目的 通过检测单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾脏组织转化生长因子-β1(TGF-β1)和Smad3的表达,探讨TGF-β1/Smad3信号通路在肾间质纤维化(RIF)中的作用.方法 雄性6周龄Wistar大鼠48只随机分为假手术组和UUO组,每组24只.UUO组大鼠麻醉后,背侧切口行左侧输尿管结扎术,假手术组大鼠在同样条件下仅探及肾包膜.分别于造模第7、14、21、28天每组各处死6只大鼠,取其左侧肾脏.HE染色和Masson染色行肾脏病理学检查,并计算RIF指数,应用Western blot法和实时荧光定量-PCR检测肾脏组织Smad3蛋白及其mRNA表达;免疫组织化学法检测肾脏组织TGF-β1、Ⅳ型胶原蛋白(Col-Ⅳ)和纤维连接蛋白(FN)的蛋白表达.结果 1.与假手术组大鼠比较,UUO组大鼠各时间点:(1)病理学检查显示,肾小管上皮细胞萎缩,胶原纤维化形成,弥散性单核细胞、淋巴细胞浸润,RIF指数显著增高(P<0.01),梗阻时间越长,RIF指数越高;(2)肾脏组织Smad3蛋白及其mRNA表达均增高(Pa<0.05),梗阻时间越长,表达水平越高;(3)肾脏组织TGF-β1、Col-Ⅳ和FN的蛋白表达均增高(Pa<0.05),梗阻时间越长,表达水平越高.2.相关性分析:(1)UUO组大鼠肾脏组织Smad3、TGF-β1蛋白表达与RIF指数均呈显著正相关(r=0.520、0.727,Pa< 0.01);(2)Col-Ⅳ和FN的蛋白表达与RIF指数均呈显著正相关(r= 0.794、0.786,Pa<0.01);(3) Smad3的蛋白表达与TGF-β1、Col-Ⅳ和FN的蛋白表达均呈显著正相关(r= 0.592、0.672、0.508,Pa<0.01).结论 UUO所致RIF大鼠肾脏组织TGF-β1及Smad3表达均显著升高,梗阻时间越长,表达水平越高,RIF程度越重.TGF-β1/Smad3信号通路可能参与了RIF的发生发展.