基因工程菌发酵表达核苷磷酸化酶条件的优化

目的 优化苷磷酸化酶（包括嘌呤和嘧啶核苷磷酸化酶）基因工程菌的发酵表达条件。方法通过工程菌摇瓶培养,测定吸光度D值,考马斯亮蓝（Bradford）法测定蛋白,SDS—PAGE电泳和凝胶成像扫描分析表达量,优化表达条件;通过正交试验优化50L发酵罐发酵条件。结果摇瓶培养起始pH为7．0～7．2,于30℃培养4h,加入终浓度为0．4mmol／L的异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导8h后收获菌体,可得到较高的生物量和重组酶蛋白表达量。50L发酵罐的最佳条件为起始pH为7．0～7．2,于32oC培养4h,加入终浓度为0．4mm01／L的IPTG诱导9h后收获菌体,每升发酵液可得2g以上的酶蛋白。结论基因工程菌发酵表达核苷磷酸化酶产量较高,可工业化生产．为酶法合成核苷酸类似物的研究奠定了基础。     

离子色谱法测定丁二磺酸腺苷蛋氨酸中的丁二磺酸含量

目的建立丁二磺酸腺苷蛋氨酸产品中的丁二磺酸含量检测方法。方法离子色谱法电导检测器;阴离子色谱柱;碳酸盐溶液（含1mmol／LNa2CO3和4mmol／LNaHCO3）－丙酮（95：5）作为流动相;流速1．2ml／min;理论板数按丁二磺酸峰计算不低于3000。结果检验重复性好,在10~200mg／L的进样浓度范围内,丁二磺酸浓度与峰面积的线性关系良好,r=0．9996;平均回收率为98．53％。结论该检验方法简便、准确、专属性强。