D二聚体和纤维蛋白原在口腔颌面部间隙感染中的表达及意义

目的：分析血浆D二聚体（DD）和纤维蛋白原（FIB）在口腔颌面部间隙感染患者中的表达水平和诊断效能。方法：选择浙江大学医学院附属第二医院2019年1月—2019年9月住院治疗的口腔颌面部间隙感染（oral and maxillofacial space infection, OMSI）患者72例为病例组,同期选取无炎症的腮腺良性肿物患者77例为对照组,检测所有患者治疗前血浆DD、FIB、C-反应蛋白（CRP）和白细胞计数（WBC）,分析DD、FIB与临床特征的关系。采用SPSS 20.0软件包对数据进行统计学分析。结果：OMSI患者血浆DD和FIB较非间隙感染患者显著增高（P<0.01）;血浆DD和FIB升高与OMSI患者的住院时间显著延长（t=4.104,P=0.002;t=2.825,P=0.006）和术后需要ICU监护有显著相关性（t=2.305,P=0.024;t=5.675,P=0.000）。Logistic回归分析显示,两者升高均是导致OMSI患者住院时间显著延长（P=0.006,P=0.015）和ICU监护的危险因素（P=0.002,P=0.000）;血浆DD和FIB可以联合CRP和WBC作为OMSI的诊断指标（DD：AUC=0.929;FIB：AUC=0.999）。结论：血浆DD和FIB可联合CRP和WBC高效准确地诊断OMSI,高水平DD和FIB是OMSI患者住院时间延长和术后需要ICU监护的重要参考指标。     

兔关节盘、髁突及软骨下骨的年龄相关性改变组织学研究

目的:探究不同年龄段兔颞下颌关节(TMJ)关节盘、髁突和软骨下骨的生理特征的变化。方法 :选取1、4、12和32周龄健康雌性新西兰大白兔各3只,取材TMJ,经脱钙处理后进行5μm连续切片,苏木精-伊红染色。分别对关节盘大小、髁突前后径,以及关节盘所对应软骨下骨的形态结构和骨密度进行测量分析。采用SPSS19.0软件包对数据进行统计学分析。结果:关节盘大小比较,4周组明显大于1周组(P=0.039),12周组明显大于4周组(P=0.007);髁突前后径在4周和12周组间(P=0.003)显著增加;软骨下骨的形态结构和骨密度在4~32周内(P<0.05)显著改变。结论:兔颞下颌关节关节盘和髁突在青春期前生长发育明显;髁突软骨下骨的形态结构和骨密度在4周时开始出现明显改变。虽然青少年期和成年期兔髁突大小没有统计学差异,但是两者软骨下骨的骨质密度差异明显。     

Ihh-PTHrP信号轴介导髁突软骨细胞对压力微环境改变的调控研究

目的 探究Ihh-PTHrP负反馈信号通路与静压力下髁突软骨细胞生物学响应的关系。方法 体外分离培养4周龄健康雌性新西兰大白兔髁突软骨细胞,100 kPa静压力条件下,分别对P2代髁突软骨细胞进行0、1、2、3、4 h的加压处理;采用Western印迹的方法比较分析髁突软骨细胞COL2A1、Ihh和PTHrP的蛋白表达变化;通过RT-qPCR检测分析静压力对Ihh和PTHrP基因水平表达的影响;选取0 h和3 h组,使用扫描电子显微镜扫描分析静压力对髁突软骨细胞形态的影响;采用SPSS 19.0软件包对数据进行统计学分析。结果 Western印迹实验发现：压力加载3 h后,COL2A1出现明显高表达;Ihh蛋白表达在0～2 h内逐渐升高,在2～4 h内却逐渐降低;PTHrP在0～2 h内蛋白表达逐渐升高,并在2～4 h内维持着一个较高水平的表达。RT-qPCR检测发现Ihh在压力加载1 h时出现明显高表达,而PTHrP则在2 h时出现明显高表达。100 kPa静压力加载3 h后,髁突软骨细胞突起增多、变长。结论 兔髁突软骨细胞对压力微环境的改变具有一定的适应能力;适宜的静压力可以提高髁突软骨细胞的成软骨能力;Ihh-PTHrP负反馈信号通路参与髁突软骨细胞对压力微环境改变的适应性改建过程。     

生长期兔髁突软骨细胞体外培养方法及其生物学特性研究

目的 建立髁突软骨细胞体外培养模型,研究其生物学特性。 方法 分离4周龄健康新西兰大白兔双侧髁突软骨,采用胰酶和胶原酶联合消化方法收集4 h和12 h 2个时间点的髁突软骨细胞,连续体外培养并传代至P10。使用倒置显微镜观察细胞形态;采用甲苯胺蓝、阿利新蓝和免疫细胞化学染色对髁突软骨细胞进行鉴定;利用细胞计数绘制细胞生长曲线;通过Western 免疫印迹分析细胞Ⅱ型胶原、Ⅹ型胶原和SOX9在蛋白水平的表达情况。采用SPSS13.0软件包对Western 印迹条带灰度值进行统计学分析。 结果 兔髁突软骨细胞体积较大,呈纺锤形或多角形,铺路石样排列,细胞爬片染色结果为阳性。随着细胞传代“成纤维样”细胞比例逐渐加重,P2代之前的细胞形态差异较小。细胞生长曲线显示,兔髁突软骨细胞的体外培养符合经典的S形生长曲线。Western 印迹结果表明,4h和12 h所收髁突软骨细胞Ⅱ型胶原、Ⅹ型胶原和SOX9表达无显著差异。 结论 使用本方法培养兔髁突软骨细胞简单有效。髁突软骨细胞体外培养存在去分化现象,但P2代以内的髁突软骨细胞生物学特性相对稳定,适合用于后期实验研究,P3代以后的髁突软骨细胞逐渐丧失原有细胞的特性。     

生长期兔髁突纤维软骨细胞和骨骺透明软骨细胞生物学特性的比较研究

目的 建立软骨细胞体外培养模型,研究纤维软骨和透明软骨的生物学差异。 方法 分离4周龄雌性兔双侧髁突软骨和膝关节骨骺软骨,采用胰酶和胶原酶联合消化的方法收集软骨细胞,分别进行体外培养并连续传代至P10。使用倒置显微镜观察细胞形态;采用阿利新蓝和Ⅱ型胶原免疫组化染色的方法分别对髁突纤维软骨细胞和骨骺透明软骨细胞进行鉴定;用细胞计数的方法绘制生长曲线;运用荧光定量PCR和Western印迹技术对软骨特异性指标Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、Ⅹ型胶原、SOX9和Aggrecan进行检测,并使用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析。 结果 倒置显微镜观察示,髁突纤维软骨细胞和骨骺透明软骨细胞形态均会随细胞传代而发生改变,且P2代以后改变明显;基因和蛋白水平的检测均证实P2代后软骨细胞去分化明显。阿利新蓝和Ⅱ型胶原免疫组化染色鉴定结果均为阳性,对照组为阴性。实时定量荧光PCR和Western印迹结果证明：在纤维软骨中,Ⅰ型胶原的表达量高于透明软骨;而Ⅱ型胶原、Ⅹ型胶原、SOX9和Aggrecan的表达量却明显低于透明软骨。 结论 使用本方法培养软骨细胞简单有效;髁突纤维软骨细胞和骨骺透明软骨细胞体外培养均存在去分化现象,且两者Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、Ⅹ型胶原、SOX9和Aggrecan的表达存在显著差异,生物学特性并不相同。     

体外培养的兔下颌骨髁突对机械压力的反应和变化

目的: 探索体外培养的下颌骨髁突组织块对机械压力的反应和变化。方法: 兔下颌骨髁突组织块分别在0（对照）、15和75 kPa机械压力下体外培养3 d,观察髁突的大体形态、组织切片,进行micro-CT扫描,分别采用RT-PCR和Western免疫印迹检测Ⅱ型胶原蛋白(COL2)、X型胶原蛋白 (COL10)、SOX9和MMP13的mRNA及蛋白表达。采用SPSS 16.0 软件包对数据进行统计学分析。结果: 15 kPa组,髁突关节面光滑,软骨呈白色,关节面中心受压后变平,但软骨仍完整。75 kPa组,髁突关节面变粗糙,颜色变黄、暗淡,关节面中央受压变平的面积更大,中心区域软骨破裂。镜下可见,15 kPa组的软骨层变薄,软骨细胞排列比对照组更紧密。75 kPa 组中,整个软骨层被破坏并与中心区域的软骨下骨分离。COL2和SOX9的表达在15 kPa压力下显著增加（P<0.01）,在75 kPa压力下显著下降。COL10和MMP13的表达在75 kPa压力下显著增加（P<0.01）。Micro-CT扫描结果显示,压力组的骨密度（BMD）、骨体积/总体积比值（BV/TV）和 骨小梁厚度（Tb.Th）显著增加（P<0.01）。结论: 体外培养的髁突组织块在15 kPa机械压力下保持完整性和功能,并发生适应性改建。75 kPa的压力对软骨产生破坏,软骨层受损、破裂并从软骨下骨处剥离,可能进一步导致骨关节炎的发生。     

549例头颈部多间隙感染严重并发症分析

目的 ：探讨头颈部多间隙感染严重并发症的种类、发生率及其预后。方法 ：回顾分析2006年2月—2014年7月间就诊的549例头颈部多间隙感染患者,对其病因、易感因素、伴随系统性疾病、治疗方法、严重并发症、治疗结果等进行总结。使用SPSS 19.0软件包对数据进行统计学分析。结果 ：549例头颈部多间隙感染患者中,66例出现严重并发症,发生率为12.20%。其中,下行性纵隔炎最多 (37例,56.06%),其次为呼吸道梗阻 (27例,40.91%)、肺炎 (12例,18.18%)、 心包炎 (6例,9.09%)、眶内感染 (2例,3.03%)、多器官衰竭 (2例,3.03%)、颅内感染 (2例,3.03%),以及心源性猝死 (1例,占1.52%)。所有合并严重并发症的患者均接受全身抗感染治疗和头颈部切开引流术。其中33例下行性纵隔炎患者接受纵隔切开引流,27例呼吸道梗阻的患者接受气管切开或气管内插管。12例患者在治疗过程中死亡。高龄和有全身系统性疾病的患者更易发生严重并发症。结论 ：下行性纵隔炎是头颈部间隙感染最常见的并发症,而呼吸道梗阻最易导致死亡。及时广泛切开引流及全身抗感染治疗是目前治疗头颈部多间隙感染的有效方法,尤其对减少严重并发症的发生意义重大。     

头颈部多间隙感染严重并发症危险因素的回顾分析

目的 通过大样本数据分析头颈部多间隙感染严重并发症的危险因素。方法 回顾分析2006年2月—2014年7月549例头颈部多间隙感染患者的临床资料。将患者分为糖尿病组和非糖尿病组,统计分析头颈部多间隙感染严重并发症的高危因素。采用SPSS 19.0 软件包对数据进行统计学分析。结果 60~69岁患者头颈部多间隙感染的严重并发症发病率最高,为18.8%;与20~59岁年龄组差异有统计学意义（P=0.027）。多因素方差分析发现,糖尿病组严重并发症发生率是非糖尿病组的2.404倍（P=0.008）。结论 高龄和糖尿病是头颈部多间隙感染严重并发症的高危因素,建议在头颈部多间隙感染的诊治过程中,高度关注高龄（60岁以上）和糖尿病患者。     

兔下颌骨髁突软骨年龄相关性改变的组织学研究

目的 探讨不同年龄段兔下颌骨髁突软骨的生理特征变化。方法 选取1、4、12和32周龄健康雌性新西兰大白兔各3只,脱钙处理后进行5 μm 连续切片,苏木精-伊红染色。分别对关节盘所覆盖的髁突表面纤维软骨区域软骨各层厚度进行测量分析。采用SPSS19.0软件包对数据进行统计学处理。结果 髁突软骨全层（P=0.008）、成熟层（P=0.008）和肥大层（P=0.007）在1周和4周组间厚度显著下降,在4~32周内厚度变化不明显。连续各组之间纤维层和增殖层厚度无显著改变;32周组纤维层厚度显著高于1周组（P=0.024）。结论 兔髁突软骨全层、成熟层和肥大层在1~4周内明显变薄,成骨活性大于成软骨活性,为下颌骨生长发育的重要阶段;在4~32周内各层厚度改变不明显,成骨和成软骨活性相对平衡。成年期髁突适应和耐受关节腔微环境变化的能力可能较强。     

Ihh-PTHrP信号轴调控髁突软骨内成骨相关机制的研究进展

Ihh-PTHrP信号轴调控软骨内成骨过程。近年来,国内外学者对Ihh-PTHrP信号通路的调控机制给予了广泛的关注,相关的调控机制屡见报道,对髁突软骨内成骨机制研究的需求日趋迫切。国内外许多文献报道了相关因子在Ihh-PTHrP信号轴中的重要角色,发现了一些具有指导意义的成果。本文通过对近几年国内外相关文献的总结归纳,对该信号轴调控髁突软骨内成骨的相关机制研究做一综述。