慢病毒介导靶向PRL-3 基因的siRNA 抑制肝癌细胞的侵袭性

 【目的】 探讨肝再生磷酸酶-3(PRL-3)的表达对肝癌细胞侵袭能力的影响&#65377;【方法】 设计&#65380;合成4对针对PRL-3 基因siRNA 的寡核苷酸序列,分别构建质粒,转染293T 细胞,据其对PRL-3 的抑制率,筛选最有效的PRL-3 基因RNAi 靶序列,设计并合成其siRNA 的双链DNA Oligo,与含绿色荧光蛋白(GFP)编码基因的pGCL-GFP 线性化载体连接产生重组慢病毒质粒LV-PRL3-SiRNA,并行PCR 和测序鉴定&#65377;将LV-PRL3-SiRNA,pHelper 1.0 和pHelper 2.0三种质粒DNA共转染293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平经孔稀释法测定病毒滴度&#65377;重组慢病毒感染肝癌SMCC7721 细胞,行real time-PCR和western-blot验证PRL-3基因的沉默效果&#65377;用Transwell侵袭试验检测SMCC7721细胞体外侵袭力的改变&#65377;【结果】 成功构建PRL-3 基因RNA干扰慢病毒载体并获得相应的慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为6 × 108 Tu/mL&#65377;和对照组相比,RNA 干扰组SMMC7721 细胞PRL-3 基因的mRNA 水平和蛋白水平的抑制率分别为75%和63%;其穿过人工基底膜的平均数(14.2 ± 0.8)明显少于空白对照组(33.0 ± 1.6)及非特异性siRNA感染组(31.2 ± 0.8),侵袭抑制率为58% (P < 0.01)&#65377;【结论】 降低PRL-3 的表达可抑制肝癌细胞的侵袭能力&#65377;     

PRL-3基因RNA干扰慢病毒载体的构建及稳定感染HepG2单克隆细胞株的建立

目的 构建PRL -3基因RNA干扰慢病毒载体并建立被稳定感染的HepG2单克隆细胞株.方法 设计PRL -3基因特异性RNAi靶序列,合成靶序列的DNA oligo,退火形成双链DNA,与含绿色荧光蛋白(GFP)编码基因的pGCL- GFP线性化载体连接,产生重组慢病毒质粒LV - PRL3 - siRNA,转化感受...     

肝移植术后人疱疹病毒6B型脑炎的多学科综合诊疗

目的 通过多学科综合诊疗(MDT)模式提高肝移植术后人疱疹病毒6B(HHV-6B)型脑炎诊治的效果.方法 对1例罕见的肝移植术后HHV-6B型脑炎的病人进行MDT讨论,以制定有效的个体化治疗方案.结果 肝移植术后第16日,病人出现头痛症状,第18日突然出现反应迟钝、神志不清、昏迷,伴不自主的四肢抽搐.血氨升高,头颅CT...