新型冠状病毒核酸和抗体联合检测的应用价值

目的探讨新型冠状病毒核酸检测和血清抗体检测对新型冠状病毒肺炎诊断的临床应用价值。方法收集26例新型冠状病毒肺炎患者确诊后不同时间段(第4、7、15、30、45天)血液和咽拭子标本,采用实时荧光RT-PCR技术检测病毒核酸,胶体金免疫层析法检测血清抗体(IgM和IgG)。结果 26例确诊患者病毒核酸检测转阴时间为(16.3±11.6)d,转阴当日IgM和IgG检出率分别65.38%和53.85%,IgM抗体在确诊后15 d检出率达到65.38%,而IgG抗体为46.15%,IgM抗体最早可在确诊4 d内检出,并在15 d左右达到峰值,而IgG抗体需7 d左右才可检出,并随着时间延长检出率持续上升。确诊患者经过治疗,病毒ORF1ab基因和N基因表达量在一周内出现明显下降,至观察截止时间点(45 d)仍有1例ORF1ab基因阳性和5例N基因阳性。结论新型冠状病毒感染早期,核酸检测或联合IgM抗体检测检出率高,感染中后期IgM和IgG抗体检测联合核酸检测可区别既往感染和无症状感染者。     

不同方法处理核酸片段的对比研究

目的 探讨不同处理方法对核酸片段的清除效果,为核酸检测实验室尤其是基层实验室寻求简单方便又行之有效的实验室污染处理方法。方法 分别用75%乙醇、含氯消毒剂、紫外线处理2种不同长度(120 bp和1 600 bp)的高水平核酸片段,利用琼脂糖电泳技术及凝胶成像技术验证核酸片段的完整性,比较3种方法对核酸片段的清除效果。结果 75%乙醇、紫外线对核酸片段的清除无明显效果,含氯消毒剂在有效氯终水平≥2 500 mg/L时能有效清除核酸片段。结论 84消毒液是最常见的含氯消毒剂,配置适合水平的84消毒液能有效处理实验室的核酸污染,值得在基层实验室大力推广应用。     

宿主蛋白对丙型肝炎病毒复制的影响

慢性丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染是严重危害人类健康的疾病之一.了解HCV复制过程能有助于对HCV致病机制的研究.许多研究表明,HCV复制不仅需要自身编码蛋白,而且还依赖宿主蛋白的参与.此文就几种宿主蛋白对HCV复制的影响进行综述.     

丙型肝炎病毒5’端非编码区结构域Ⅰ、Ⅱ在其翻译启动活性中的作用具有细胞特异性

目的分析在不同宿主细胞的翻译体系下,缺失不同片段的HCV 5’UTR翻译启动活性的差异。方法以脂质体介导基因
转染技术,将截短型HCV 5’UTR调控Fluc的真核表达质粒与Rluc真核表达质粒pRL-TK共转染至不同的细胞中,转染后36 h：
①提取细胞RNA,半定量RT-PCR 检测目的质粒的转录水平;②用双荧光素酶报告基因检测系统检测Fluc 基因相对表达活
性,分析HCV 5’UTR缺失不同结构域后在不同翻译体系中翻译启动活性的差异。结果⑴缺失5’端44 个碱基的HCV 5’UTR
的翻译启动活性分别与缺失前相比：在HeLa细胞和C6细胞中无明显影响,在L-02细胞中活性下降为46%,而在293T细胞则为
缺失前的146%;⑵缺失5’端118个碱基后,HCV 5’UTR的活性分别与缺失前相比：在HeLa细胞中,缺失后活性仅为缺失前的
49%,而在L-02细胞、C6细胞和293T细胞中,活性分别为缺失前的140%、160%和235%。在本研究使用的四种细胞中,pCNl的
翻译启动活性的差异无统计学意义,pCNl-d2在293T细胞中活性最高,在L-02细胞中活性最低。pCNl-d3在293T、C6和L-2细
胞中活性相近,但在HeLa细胞中的活性明显比其他细胞低。结论HCV 5’UTR的DomainⅠ和DomainⅡ对其翻译启动活性的
影响与宿主细胞种类相关,具细胞特异性。