应用人胚肺成纤维细胞MRC-5培养分离寨卡病毒研究

目的 应用人胚肺成纤维细胞MRC-5培养并分离鉴定寨卡病毒。 方法 收集寨卡病毒病确诊病例的精液样本并在MRC-5细胞中进行培养,观察致细胞病变效应（CPE）。 采用实时荧光PCR（real-time PCR）方法鉴定培养,同时对培养物进行序列测定和比对分析。 结果 病例精液样本经MRC-5细胞盲传3代,未观察到明显的特异性致CPE,MRC-5细胞3代培养物寨卡病毒经real-time PCR检测结果呈阳性。 毒株命名为Henan/001/2016,GenBank编号为MF593625,属于亚洲基因簇系。Henan/001/2016与Natal RGN株的亲缘关系最为接近,在E基因区段的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为99.7%和100%。 结论 MRC-5细胞适用于寨卡病毒的分离、培养和鉴定。      

腺病毒7型河南分离株全基因序列测定及重组分析

目的了解腺病毒7型河南分离株（hAdV35/Henan/2010）全基因特征及与其他腺病毒之间的进化重组关系。方法设计39对全长引物,采用RT-PCR方法扩增河南分离株腺病毒全序列,用DNASTAR中的SeqMan拼接全序,运用BioEdit进行序列剪齐,运用Mega4.0分析基因组编码蛋白hexon、fiber、E4和penton区域氨基酸与核苷酸的同源性,并与其他腺病毒序列绘制进化树,运用Simplot软件进行序列重组分析。结果 hAdV35/Henan/2010基因组全长35 234bp,与其他腺病毒相比,基因组氨基酸和核苷酸同源性为68.0%-99.8%和46.5%-99.5%。不同编码区hexon、fiber、E4和penton的核苷酸同源性分别为72.4%-95.4%、74.1%-97.0%、55.7%-92.7%和69.9%-99.3%。进化树分析显示河南分离株与腺病毒7型疫苗株同属一支,与腺病毒3型进化分支最近,Bootsacn分析显示与B亚属腺病毒在多个区域发生重组,尤其与腺病毒3在hexon区域高度重组。结论 hAdV35/Henan/2010与B族腺病毒亲缘关系较近,与hAdV3在hexon区域存在重组。     

河南省20株布鲁氏菌鉴定与PFGE分子分型研究北大核心CSCD

目的 检测与分析河南省2010-2012年20株布氏菌型别及PFGE脉冲场凝胶电泳指纹图谱特征。方法 采集病人静脉血,分别以试管凝集试验（SAT）、双相血培养瓶分离培养、热裂解法制备DNA模板和AMOS-PCR鉴定4种布氏菌型别。采用脉冲场凝胶电泳技术（PFGE）对检出的布鲁氏菌进行分子分型鉴定。结果 分离培养的20株布鲁氏菌经鉴定,19株为羊种,1株为牛种;羊种布鲁氏菌经XbaI酶切与脉冲场凝胶电泳后,共获得了8种不同带型,带型相似度在80%~100%之间,牛种与羊种菌株在带型相似度上差异较大,具有较好的分辨能力。结论 河南省病人感染的布鲁氏菌以羊种为主要型别,AMOS-PCR与PFGE作为布鲁氏菌菌型鉴定与分子分型的技术手段,为布鲁氏菌病的病原学监测与应急检测提供依据。     

幽门螺杆菌Omp22-HpaA融合基因工程菌蛋白的表达

目的:优化幽门螺杆菌Omp22-HpaA基因工程菌pMAL-c2X-Omp22-HpaA-TB1的表达条件,并对其表达产物进行纯化和鉴定.方法:在不同诱导时机、不同诱导剂(IPTG)浓度和不同诱导时间条件下诱导pMAL-c2X-Omp22-HpaA-TB1的表达,测定目的蛋白的表达量.在优化条件下诱导工程菌表达,并应用SDS-PAGE方法对表达产物进行分析,采用Amyloss树脂预装柱对可溶性Omp22-HpaA蛋白进行分离、纯化,对纯化后的蛋白行Western blot分析.结果:工程菌培养2 h时加入IPTG(终浓度为0.4 mmol/L)诱导7 h,目的蛋白Omp22-HpaA表达量达到菌体总蛋白的20%以上.经纯化得到了较高纯度(＞90%)的目的蛋白,并具有良好的免疫原性.结论:建立了从pMAL-c2X-Omp22-HpaA-TB1可溶性表达产物中纯化较高纯度Omp22-HpaA融合蛋白的方法.     

心理咨询师广告伦理规范现状——基于来源于网络的心理咨询广告研究

目的：探索咨询师广告的伦理问题。方法：根据现有与心理咨询相关的法律法规编制咨询师广告编码表,分层抽样50个网络广告反映现状并完善编码。结果：编码表包括学历、专业资质、受训、流派、小时数等应有的规范披露,和来访者评论、费用、宣传语中的伦理风险。抽样结果显示,咨询师广告中注明学历、资质和长程培训的分别占56%、72%、32%;说明咨询、督导、个人体验小时数的分别占19%、8%、7%;广告中44%出现评论且好评居多;费用和广告语中存在伦理风险的占72%和54%。结论：当前国内咨询师网络广告应当披露的信息不足,且存在不符伦理法规的虚假和夸大等不实信息。     

新型冠状病毒肺炎病例血清中和抗体动态变化及影响因素

目的:了解新型冠状病毒肺炎(Coronavirus Disease 2019, COVID-19)确诊病例血清抗新型冠状病毒(2019 novel Coronavirus, 2019-nCoV)中和抗体动态变化规律及可能的影响因素。方法:采用微量中和试验检测COVID-19确诊病例血清中和抗体,采用Excel 2007...     

针刺督脉配合经皮电刺激在脑卒中偏瘫康复中的应用

目的：观察经皮电刺激治疗仪对针刺治疗脑卒中的辅助作用。方法：60例脑卒中以偏瘫为主要临床表现的患者,随机分为2组各30例。治疗组30例采用针刺加低频电刺激的方法,对照组30例单纯采用针刺治疗的方法,2组均以10次为1个疗程,2个疗程进行疗效评定。结果：治疗组在肢体运动功能和日常生活活动能力的改善方面均明显优于对照组（P值均〈0.05）。结论：针刺督脉配合经皮电刺激是治疗脑卒中偏瘫行之有效的方法。     

刺络拔罐加灸治疗带状疱疹后遗神经痛疗效观察

目的:观察针灸治疗带状疱疹后遗神经痛的疗效。方法:36例病人随机分成2组,治疗组成20例采用梅花针叩刺疼痛部位、拔罐,并加用艾盒灸,每次治疗30~40m in,10次为1个疗程,2个疗程后评定疗效。对照组16例仅采用刺络拔罐而不加艾炙,方法、疗程同治疗组。结果:2组治愈率比较有显著性差异(P<0.05),治疗组明显优于对照组。结论:刺络拔罐基础上配合艾灸可以提高痛阈,具有较长的镇痛后效应。     

基于高通量测序技术的发热伴血小板减少综合征病毒全基因组多重PCR测序方法的建立与评价

目的基于二代测序(next generation sequencing, NGS)技术建立一种发热伴血小板减少综合征病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome virus, SFTSV)基因组的测序方法。方法提取SFTSV阳性血清样本病毒核酸, 利用Primer5.0软件设计SFTSV特异性引物, 构建多重PCR方法对病毒核苷酸序列进行特异性扩增, 利用二代测序仪进行全基因组测序。结果 28份SFTSV阳性血清样本均能进行特异性扩增并获得全序, 覆盖度均超过94%, A型病毒株最多(20株)、其次为B型(4株)、E型(3株)。结论本研究基于多重PCR建立了针对SFTSV的特异性强、质量好的高通量测序方法, 提高了测序效率。     

新型冠状病毒中和抗体检测方法的建立与应用

目的 建立基于微量细胞中和试验（MRNT）的血清抗新型冠状病毒（SARS-CoV-2）中和抗体的检测方法,并应用于检测新型冠状病毒肺炎（COVID-19）病例的血清抗SARS-CoV-2中和抗体水平。方法 用Vero细胞和已知滴度的SARS-CoV-2毒株对待测血清进行基于MRNT的中和抗体检测,对中和反应作用时间、Vero细胞代次等影响试验的关键因素进行验证,并用建立的方法重复4次检测8份血清样品的中和抗体效价,计算变异系数（CV）,验证方法的重复性;用建立的方法检测165份COVID-19病例血清样本的中和抗体水平并进行分析;采用磁微粒化学发光免疫分析法（CMIA）检测其中55份感染3～4周的血清样本,并与建立方法的结果比对,分析两者的分布情况及相关性。结果不同中和反应作用时间（1.0 h、1.5 h、2.0 h）及不同代次（5代、10代、15代）Vero细胞测得血清样本的中和抗体效价相同;8份血清样本重复检测4次结果的CV为0.0%～14.2%,差异无统计学意义（F=0.508,P>0.05）,表明重复性良好;建立的方法测得165份血清阳性率98.18%,中和抗体效价分布范...