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目的 筛选、鉴定与ubiquilin 4相互作用的蛋白,探讨ubiquilin 4在肿瘤发生、发展中的作用机制.方法 利用细胞免疫荧光技术,确定外源及内源ubiquilin 4在MKN45细胞中的定位;构建含有UBQLN4和GST标签的原核表达载体pGEX-UBQLN4,将其转化至大肠杆菌中,6 h后收集蛋白.运用标签纯化ubiquilin 4,利用GST-pull down技术寻找差异条带,再进一步应用蛋白质谱技术鉴定蛋白,并通过免疫共沉淀法进行验证.结果免疫荧光显微镜显示,外源及内源ubiquilin 4均主要定位于细胞核和细胞质.通过纯化及蛋白质谱分析技术鉴定发现,MYH9蛋白与ubiquilin 4存在相互作用.结论 MYH9蛋白与ubiquilin 4存在相互作用,可能为阐明ubiquilin 4在肿瘤发生、发展中的作用机制提供重要的依据. 相似文献
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摘 要:[目的] 探讨组织蛋白酶D(CTSD)能否增强胃癌细胞对顺铂的敏感性及其机理,从而为临床胃癌的化疗开辟一条新路径。[方法] 通过慢病毒将CTSD及其酶活性失活突变体231N稳定整合到胃癌细胞株MKN45中,运用MTT法、流式细胞术、Western blot等技术,观察转染前后各组肿瘤细胞的存活率、凋亡、凋亡蛋白表达的改变。[结果] 与相同浓度作用下的对照组相比,CTSD、231N联合顺铂对细胞存活率的抑制更明显;与对照组相比,CTSD、231N联合顺铂诱导细胞凋亡能力明显增加;Western blot结果显示,CTSD、231N联合顺铂组cleaved caspase 3、cleaved caspase 9表达增加,而代表死亡受体途径的procaspase 8无变化。[结论] 与单一顺铂作用相比,CTSD、231N联合顺铂抑制MKN45细胞存活率、诱导细胞凋亡能力更强,这一作用是通过线粒体途径发挥作用的。 相似文献
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目的 探讨老年胃癌患者血清长基因间非蛋白编码RNA(LINC)00511和LINC01133的表达及与临床特征的关系,分析二者单项及与糖类抗原(CA)72-4联合检测对老年人胃癌的临床诊断价值。方法 选取老年胃癌患者100例作为实验组,再选取同期老年健康体检者76例作为对照组,通过定量逆转录聚合酶链反应检测血清LINC00511和LINC01133的表达,分析二者血清表达水平的相关性及与肿瘤临床特征的关系;采用受试者工作特征(ROC)曲线评估其对胃癌的临床诊断效能;通过计算ROC曲线下面积(AUC)、敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值,评估单项及联合检测的临床应用价值。结果 实验组LINC00511和LINC01133表达量显著高于对照组(均P<0.01),实验组二者表达水平呈显著正相关(r=0.304,P<0.01)。LINC01133血清水平与性别、TNM临床分期和淋巴结转移均无统计学差异(P>0.05),但与肿瘤合并远处转移呈正相关(P<0.01)。LINC00511、LINC01133及CA72-4诊断胃癌的AUC分别为0.659、0.807和0.7... 相似文献
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目的 检测微小RNA-4491(miR-4491)在胃癌患者血清中的表达水平,分析其与胃癌临床病理特征的相关性,探讨其单独检测及其与CA72-4联合检测在胃癌诊断中的临床价值。方法 实时荧光定量聚合酶链反应检测胃癌患者和健康受试者血清中miR-4491的表达水平,通过受试者工作特征(ROC)曲线、曲线下面积(AUC)、危险分数分析法评估miR-4491对胃癌的诊断效能,计算灵敏度、特异度、阳性预测值(PPV)和阴性预测值(NPV),探讨miR-4491独立及与CA72-4联合检测在胃癌诊断中的应用价值。结果 胃癌组和健康对照组血清miR-4491的相对表达水平分别为3.65±4.04和1.29±1.21,二者比较,差异有统计学意义(P<0.01),miR-4491的表达量与胃癌临床分期、淋巴结及远处转移均不相关(P>0.05),但与其病理分化程度呈负相关(P<0.05)。miR-4491独立检测诊断胃癌的AUC为0.78,敏感度、特异度、PPV、NPV分别为84.5%,59.4%,74.0%和72.9%,而CA72-4诊断胃癌的AUC为0.71,敏感度、特异度、PPV... 相似文献
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