调控基因-Noggin的研究进展

Noggin基因最早是由California大学的Harland和William Simth于1992年从非洲爪蟾的胚胎中分离得到的,由于将其mRNA注射入爪蟾的胚胎可使头部明显增大而命名该基因为Noggin(美国俚语中为"头,脑袋"的意思)[1].现在已克隆出人的Noggin基因定位于染色体17q22,大鼠与小鼠的Noggin基因则定位于染色体11[2].Noggin基因在种属间高度保守,其编码产物为26kD蛋白,具有疏水性氨基酸末端,是一种分泌蛋白.Noggin基因在体内对多个系统的发育和/或重塑起重要的调控作用,现就其表达和功能作一简要综述.     

二苯乙烯苷对D-半乳糖拟痴呆小鼠海马基因表达的影响

目的　应用cDNA芯片探索二苯乙烯苷(TSG)干预D 半乳糖皮下注射的拟痴呆 (AD)小鼠海马的靶基因。方法　D 半乳糖 (5 0mg·kg- 1·d- 1,6 0d)皮下注射为模型组 ,造模加TSG (0 .1g·kg- 1·d- 1)灌胃为TSG组 ,对照组只注射相同体积的生理盐水。每组 6只小鼠用Morris水迷宫测试学习记忆能力。取海马组织抽提RNA ,掺入荧光分子Cy3和Cy5逆转录合成cDNA探针。以模型比正常组和TSG比正常组为组合混合探针 ,与两张小鼠 4 0 0 0点cDNA芯片杂交 ,经荧光信号扫描及GenePixPro3.0分析TSG组AD疾病相关基因调控得到改善的基因。结果　TSG可缩短小鼠游至目标的距离和时间 ,说明改善了学习记忆能力。TSG组与模型组表达差异的基因有 2 9条上调 ,12条下调 ,其中与AD相关的有 11条。结论　基因表达结果说明 ,TSG可能使能量代谢与神经营养作用增强 ,炎性反应和转录整体水平下降。     

两种水迷宫实验对拟痴呆模型动物学习记忆功能测试的比较

目的采用两种水迷宫实验对拟痴呆动物学习记忆功能进行比较.方法将小鼠、大鼠各分为:正常对照组、模型组及给药组.用通道式及Morris水迷宫对两种动物模型分别进行测试.结果两组动物模型与给药组比较,在通道式水迷宫中游出时间均无明显差异(P>0.05),在Morris水迷宫测试中,两种动物模型[小鼠(99.319±38.10)s;大鼠(74.34±41.64)s]与双方特定的给药组[匹拉西坦组(63.58±48.26)s;多奈哌齐组(36.85±36.59)s]比较均出现显著差异(P＜0.05). 结论通道式水迷宫和Morris水迷宫测试方法均能反映动物学习和记忆功能,而后者对于动物来讲学习过程较为简单,能够敏感地反映出动物的学习记忆功能.两种水迷宫最好结合使用,以得到客观的结果.     

神经细胞黏附分子L1-Ig（1-4）的原核表达及其功能

目的：利用基因克隆、表达、纯化等分子生物学手段获取具有生物活性的神经细胞黏附分子L1（L1）的Ig（1-4）结构域融合蛋白。 方法：实验于2001-10／2004-12在解放军第二军医大学神经生物教研室完成。①从新生4d的SD大鼠的海马组织中提取总RNA，采用反转录-聚合酶链反应法获取L1-Ig（1-4）基因，进行序列分析后构建表达载体pET28a（＋）-LI-Ig（1-4）。②转染大肠杆菌BL21，用IPTG诱导L1-Ig（1-4）的表达。③利用Ni2＋-NTA柱纯化和复性。④用L1-Ig（1-4）融合蛋白观察培养脊髓原代神经元轴突生长情况及其活性，未加入融合蛋白的细胞做对照。 结果：①克隆出编码正确的大鼠L1-Ig（1-4）基因。②并在大肠杆菌中获得高效表达，表达产物占全菌总蛋白的28-3％。③Ni^2＋-NTA柱纯化后的纯度达90％以上。④加入融合蛋白后脊髓神经元突触的生长能力较未加入融合蛋白的细胞增强[（56&;#177;3．8），（43&;#177;2．7）μm，P〈0．01]。 结论：通过原核表达可大量获得L1-Ig（1-4）融合蛋白，该融合蛋白同样具有促神经生长的生物学活性。     

甲氨蝶呤与重组人肿瘤坏死因子对软骨肉瘤的作用机制

目的 探讨甲氨蝶呤(MTX)、重组人肿瘤坏死因子(rhTNF)对软骨肉瘤的抑制作用及机制.方法 采用裸鼠软骨肉瘤细胞株皮下接种模型,将实验动物随机分为四组:rhTNF组(n=8),rhTNF+MTX组(n=8),MTX组(n=8),空白对照组(n=6),分别注射rhTNF和(或)MTX.观察肿瘤的形成,记录肿瘤体积、瘤重,计算抑瘤率,通过HE染色观察肿瘤的组织学变化,应用免疫组织化学法检测瘤组织中bcl-2、bax、血管内皮生长因子(VEGF)等的表达及细胞凋亡情况.结果 rhTNF、rhTNF+MTX组肿瘤重量和体积小于MTX组、空白对照组(P＜0.05),MTX组肿瘤重量与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05);rhTNF、rhTNF+MTX、MTX三组肿瘤中bcl-2表达低于空白对照组、bax表达高于空白对照组(P＜0.05);rhTNF、rhTNF+MTX组中VEGF的表达低于MTX、空白对照组(P＜0.05),上述指标在rhTNF、rhTNF+MTX组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 rhTNF能显著抑制荷瘤小鼠体内软骨肉瘤的生长,MTX对体内软骨肉瘤的抑制作用不明显,联合应用可增强rhTNF的抑瘤效应,其机制可能与下调bcl-2及VEGF、上调bax的表达水半有关.     

单宁酸对糖尿病大鼠抗氧化能力及体外蛋白质非酶糖基化作用的影响

目的观察单宁酸（tannic acid,TA）对糖尿病（DM）大鼠抗氧化能力及体外蛋白质非酶糖基化作用的影响。方法 70只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、氨基胍（AG）组和TA低高剂量组,给药10周后处死大鼠。化学比色法检测各组大鼠血清及肾皮质MDA含量及GSH-Px、SOD、CAT活性。将单宁酸加入到体外建立的非酶糖基化体系,孵育2个月,荧光法进行AGEs测定并计算蛋白质糖基化抑制率。结果单宁酸可降低DM大鼠血清及肾皮质MDA含量,提高GSH-Px、SOD、CAT活性并呈浓度依赖性抑制体外蛋白质非酶糖基化反应。结论单宁酸可提升糖尿病大鼠的抗氧化能力,并具有抑制体外蛋白质非酶糖基化的作用。     

参乌胶囊对糖尿病复合脑缺血模型大鼠血糖和学习记忆功能的影响

目的:探讨糖尿病性脑病病变机制,观察参乌胶囊对糖尿病复合脑缺血模型大鼠学习记忆功能的影响。方法:采用在大鼠腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)(60mg/kg)引起糖尿病的基础上,再行双侧颈动脉缺血再灌手术建立糖尿病脑病动物模型。经参乌胶囊小剂量犤0.45g/(kg·d)犦、中剂量犤0.9g/(kg·d)犦和大剂量犤1.8g/(kg·d)犦灌胃治疗30d后,用Morris水迷宫实验对动物行为学进行评价。结果:糖尿病复合脑缺血模型大鼠到达站台游动时间比正常对照组增长63.4%;而参乌胶囊小剂量组较模型组动物缩短61.3%,参乌胶囊中剂量组较模型组动物缩短75.3%,差异均有显著性意义(F=3.71,P<0.01);参乌胶囊小剂量和中剂量组在明显改善认知功能和降低体内血糖水平的同时,也使其体质量明显降低,血糖分别降低为19.2%和15.1%,差异均有显著性意义(t=2.13,2.14,P<0.05)。结论:糖尿病复合脑缺血模型大鼠存在认知功能障碍;糖尿病脑病发生机制与体内血糖水平有关;参乌胶囊有改善糖尿病复合脑缺血模型大鼠的学习记忆功能和降低体内血糖水平的功能。     

嗅觉脑功能磁共振成像中提高磁敏感性脑区信噪比的参数优化研究

目的探讨人脑嗅觉fMRI实验中改变和优化层厚及回波时间(TE)参数对降低磁敏感性伪影和提高信噪比(SNR)的价值。方法10例健康志愿者,使用GESigna1.5TMR成像仪,标准正交头线圈。采用GRE-EPI序列分别对不同层厚(2、3、4、5、6mm)和固定层厚为6mm与2mm,同时改变不同回波时间(20、25、30、35、40、45、50、55、60ms)而进行脑功能成像扫描,以观察扫描参数的变化对图像信噪比(SNR)的影响。数据处理应用MATLAB5.3与AFNI软件。在额叶底部、右侧海马区及左枕叶划定感兴趣区(后者为对照),SNR值=兴趣区信号强度(SI)/颅外空间噪声标准差(SD)。结果①改变扫描层厚时,磁敏感性脑区额叶底部及海马区SNR值随层厚的增加呈明显下降趋势(r1=-0.994,P<0.01,r2=-0.999,P<0.01),而非磁敏感性脑区左枕叶区SNR值呈轻度上升趋势(无统计学意义)。②改变回波时间时,绝大多数被试磁敏感区(额叶底部与海马区)的SNR值在层厚为6mm时较层厚为2mm时明显下降;同时,当层厚为2mm时,SNR值随TE时间的延长呈轻度升高或无明显变化;当层厚为6mm时,SNR值随TE时间的延长而下降。结论在嗅觉fMRI实验中,可通过优化改变层厚与TE来降低磁敏感性伪影和提高SNR;层厚及TE对SNR的影响是相互影响、相互制约的,选择2mm层厚和TE30~40ms可获得理想的功能图像质量。     

PPAR-γ激活对糖基化终末产物引起的大鼠肾系膜细胞TGF-β及CTGF mRNA表达的影响

目的 观察过氧化物酶体增殖体激活受体-γ(PPAR-γ)激活对糖基化终末产物(AGEs)引起的大鼠肾系膜细胞TGF-β及CTGF mRNA表达的影响.方法 体外培养正常大鼠肾系膜细胞,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测不同浓度AGEs(0～400 μg/ml-1)及不同浓度PPAP-γ)激活剂(罗格列酮)和PPAR-γ阻断剂(GW9662)对AGEs(100 μg/ml-1)引起的TGF-β及CTGF mRNA表达的影响.结果 给予PPAR-γ激活剂可明显减轻AGEs引起的大鼠系膜细胞TGF-β、CTGF mRNA的表达.结论 PPAR-γ激活剂可以明显减轻AGEs对系膜细胞TGF-β、CTGF mRNA的表达影响,从而改善肾小球细胞外基质积聚,在糖尿病时起到肾脏保护作用.     

开郁胶囊对抑郁动物模型的影响

目的:开郁胶囊是本室自行研制的由8种传统中药组成的中药新复方制剂,本研究观察开郁胶囊对数种抑郁动物模型的影响。方法:采用ICR小鼠随机分为对照组、开郁胶囊低、中、高剂量组(按生药量计为6.6,13.2,26.4 g.kg-1)及阳性对照药帕罗西汀组。连续ig 14 d,于末次给药1.5 h后采用小鼠悬尾、强迫游泳、5-羟色胺酸(5-HTP)诱导甩头及利血平拮抗实验动物模型,评价开郁胶囊的抗抑郁作用。结果:与对照组相比,开郁胶囊中、高剂量组能显著缩短小鼠悬尾不动时间(P<0.05);开郁胶囊高剂量组显著增加5-HTP诱导的小鼠甩头次数(P<0.01),缩短甩头潜伏期(P<0.05)。注射利血平后动物出现利血平化,即眼睑下垂、体温下降及活动抑制;开郁胶囊中、高剂量ig 14 d,可改善利血平化小鼠的眼睑下垂及活动抑制(P<0.01),对体温下降亦有显著的拮抗作用(P<0.01)。结论:开郁胶囊对拟抑郁症小鼠模型具有明显的拮抗作用,其作用机制可能与增强5-羟色胺能和去甲肾上腺素能神经功能有关。