细胞外基质与造牙本质细胞分化

内釉上诱导牙乳头细胞分化为造牙本质细胞，基底膜起介导作用；在无内釉上皮或基底膜存在的条件下，牙本质基质仍可诱导造牙本质细胞的分化。近年研究表明某些胞外基质成分在造牙本质细胞分化过程中起关键性作用。     

强力霉素调控的真核表达体系ALC-pTet-on Advanced成釉细胞株的建立

目的:建立可受强力霉素调控的高表达外源基因的真核表达体系ALC-pTet-on Advanced细胞株,用于基因功能的研究。方法:将质粒pTet-on Advanced转染至成釉细胞系(ALC),用1 000μg/mL的G418筛选抗性克隆。用RT-PCR进行DNA的整合鉴定,并瞬时转染荧光素报告基因(pTRE-Tight-Luc)对pTet-on Advanced阳性克隆株的功能进行鉴定。结果:G418压力筛选后,获得了13个细胞克隆株,RT-PCR检测均表达反义四环素转录激活子(rtTA Advanced),PCR产物测序结果与pTet-on Advanced基因序列一致,表明pTet-on Advanced基因片段已整合进小鼠成釉细胞基因组DNA,荧光素报告基因功能鉴定获得l株诱导表达倍率为22.1的克隆株,且pTet-on Advanced基因阳性的成釉细胞株的形态和生长度与正常成釉细胞没有明显差异。结论:通过脂质体转染的方法成功地获得l株诱导表达倍率为22.1的高表达成釉细胞株,为进一步研究EMPs在成釉细胞中功能打下了基础。     

AP-2α对基质金属蛋白酶-20作用的研究

目的:通过研究AP-2α转录因子对基质金属蛋白酶-20(matrix metalloproteinase-20,MMP-20)基因表达的调控作用,进一步明确AP-2α的功能,为研究AP-2α在釉质形成中的作用奠定基础。方法:利用RT-PCR法、双荧光素酶报告基因检测系统、染色体免疫共沉淀技术等来分析AP-2α与MMP-20启动子区域的转录调控能力。结果:小鼠成釉细胞转染AP-2αsiRNA后,成釉细胞中MMP-20 mRNA的表达水平显著上调。染色体免疫共沉淀结果显示,AP-2α可能通过与MMP-20启动子特征性序列相互作用,从而调控MMP-20的表达。双荧光素酶报告基因检测显示预测结合位点突变后,AP-2α对MMP-20启动子的表达水平无显著影响。结论:AP-2α基因沉默可显著上调MMP-20的mRNA表达水平;而AP-2α过表达可显著抑制MMP-20活性。提示AP-2α转录因子与成釉细胞内MMP-20启动子的特征性序列相互作用,从而调控MMP-20的表达水平。     

釉成熟蛋白真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达

目的:构建釉成熟蛋白真核表达载体peDNA3.1-Amelotin,并观察其在293T细胞中的表达情况.方法:以出生后6d的昆明小鼠下颌磨牙中提取的总RNA为模板,设计合成特异性引物,通过RT-PCR法扩增小鼠的釉成熟蛋白[Amelotin(GenelD:71421)],包括编码区全长在内的部分cDNA序列,克隆到pMD18-T克隆载体,酶切鉴定正确;然后亚克隆至pcDNA3.1真核表达载体中,双酶切鉴定及测序正确.将构建的重组载体磷酸钙法转染293T细胞,检测Amelotin的表达情况.结果:成功克隆了Arnelotin基因编码区全长序列;构建出重组真核表达载体pcDNA3.1-Amelotin,磷酸钙法转染后可检测到Amelotin基因在293T细胞中的表达.结论:构建了重组pcDNA3.1-Amelotin真核表达载体,并成功表达,为进一步研究该蛋白的生物学活性奠定了基础.     

案例教学法在口腔正畸学教学中的应用效果

目的：探讨案例教学法在口腔正畸学教学中的应用效果。方法：将113名口腔本科学生分为实验组（55名）和对照组（58名）。对照组采用传统教学法,实验组采用案例教学法,课程结束后评价教学效果。结果：实验组学生考核成绩优于对照组（P〈0.05）。结论：采用案例教学法进行口腔正畸学教学有利于学生沟通能力、临床实际应对能力的培养,并解决了教学与临床实际脱节的问题。     

口腔正畸学实验课教学方法初探

为提高学生学习效率和学习兴趣，培养学生的动手能力和操作技能，推动学生学习的自主性，潍坊医学院口腔学院在口腔正畸学实验教学中引入PBL教学法并获得了较好的教学效果，对PBL教学法应用于口腔正畸学实验教学领域的优势及所面临的问题进行了分析和探讨。     

Tet—onAdvanced调控Amelotin基因表达成釉细胞系的建立

目的应用Tet-OnAdvanced。基因表达系统构建由强力霉素（D0x）诱导Amelotin基因表达的成釉细胞系,为进一步研究Amelotin基因的生物学功能奠定基础。。方法通过fIT—PCT法从出生后7d的小鼠牙胚中克隆得到Amelotin的全长基因,测序正确后将其亚克隆入pTRE-Tight裁体中,利用Tet—onAdvanced基因表达系统先后将调控质粒pTet—OnAdvanced和反应质粒pTRE-Tight-Amelotin转入成釉细胞,分别用G418和潮霉素进行筛选．克隆扩增得到可诱导表达Amelotin基因的成釉细胞系j用RT-PCR法检测不同Dox浓度下转染成釉细胞中Amelotin基因的表达。结果连续两个回合的转染及筛选后获得了引入pTet-onAdvanced系统的细胞系,能够高诱导低背景表达Amelotin,在强力霉素诱导48h可从使Amelotin的表达显著增加,强力霉素在一定浓度范围内可以诱导Amelotin的表达呈剂量依赖性增加。结论成功构建了受强力霉素调控的双重稳定表达Amelotin．成釉细胞系,为进一步研究Amelotin与釉质矿化之间的关系奠定了基础。     

口腔修复中的医技关系探讨

随着社会的进步和人民生活水平的不断提高,人们对口腔修复的要求越来越高,医院里口腔修复中的医技关系越来越不适应社会发展的需要,商业性的义齿加工公司(中心)应运而生.本文通过多年的临床实践和口腔修复社会调查,并根据<中华人民共和国执业医师法>等一系列法律法规的规定,就修复过程中医技关系遇到的问题、矛盾甚至冲突作一归纳、分析,并提出解决对策.     

Runx2在牙釉质形成中的作用研究

目的:研究小鼠成釉细胞中Runx2对釉成熟蛋白(Amelotin,AMTN)、成釉蛋白(Ameloblas-tin,AMBN)、牙成釉细胞相关蛋白(odontogenic ameloblast-asssociated protein,ODAM)基因表达的调控作用,为研究Runx 2在牙釉质形成中的作用奠定基础.方法:通...     

骨涎蛋白、骨桥蛋白在小鼠骨组织和牙胚组织发育中的表达

目的:探讨骨涎蛋(bone sialoprotein,BSP)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在小鼠骨组织和牙胚组织发育过程中的分布特点及两者在骨组织形成和牙矿化过程中的作用.方法:取E16d胎鼠及出生后第10、30天的BALB/c小鼠共9只,拉颈处死,分离解剖下颌骨及其他骨组织,新鲜配制4%多聚甲醛固定过夜,常规石蜡包埋,近、远中向5μm连续切片,采用免疫组化法检测E16d胎鼠不同骨组织及10d、30d小鼠牙胚组织中BSP、OPN的表达及分布情况.结果:BSP、OPN在牙胚及骨组织发育中的分布模式存在差异.BSP在已经矿化成熟的矿化组织基质中呈阳性表达,而OPN主要在矿化的前沿及矿化活性强的矿化组织中强阳性表达.结论:BSP、OPN参与骨组织的发育和牙胚组织的矿化成熟,并在小鼠牙及骨组织的形成和矿化中具有重要作用.