去氢骆驼蓬碱及其衍生物DH-004暴露对小鼠神经系统毒性作用研究

目的:研究去氢骆驼蓬碱(harmine,HM)及其衍生物1-(4-甲氧基)苯基-9-丁基-β-咔啉(DH-004)对脑神经毒性的作用.方法:免疫吸附测定法(ELISA)测定小鼠脑组织中IL-1β,TNF-α,IL-12和IL-6含量;尼氏染色法检测小鼠大脑皮质神经细胞形态改变;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法(qRT-...     

细粒棘球绦虫Rad54基因的生物学分析及其在不同发育阶段表达检测北大核心CSCD

目的对EgRad54基因进行生物信息学分析,并对细粒棘球绦虫不同发育阶段的表达情况进行检测分析。方法克隆EgRad54基因并对编码产物的理化性质、二、三维结构进行预测和分析;采用MEGA5.0软件构建系统进化树并进行分析;采用qRT-PCR检测细粒棘球绦虫不同发育阶段的EgRad54 mRNA的表达水平。结果 EgRad54基因开放阅读框长度为1 714 bp,NCBI blast比对显示其序列与原始序列相似性为100%,DNAMAN比对相似性为95.40%;EgRad54蛋白含有581个氨基酸,相对分子质量为65.520 45×10^3,理论等电点为8.91;在EgRad54蛋白二级结构中,ɑ-螺旋占44.41%,β-折叠占13.25%,β-转角占6.37%,无规则卷曲占35.97%;三级结构选择123i.A模型,GMQE为0.78,QMEAN为-3.51,序列相似度为69.33%,覆盖率为85.20%;进化树显示EgRad54基因与多房棘球蚴亲缘关系较近;以未消化原头蚴组作为对照组,qRT-PCR检测胃蛋白酶消化原头蚴组和囊泡组Rad54基因相对表达量分别为1.126±0.068和1.111±0.073,差异无统计学意义(F=4.034,P>0.05)。结论成功克隆出细粒棘球绦虫原头蚴Rad54基因,其编码EgRad54蛋白二级结构主要为ɑ-螺旋。该基因在细粒棘球绦虫原头蚴及棘球蚴期不同发育阶段均有表达。     

去氢骆驼蓬碱致细粒棘球蚴DNA损伤修复相关基因表达量的检测

目的观察去氢骆驼蓬碱(HM)对细粒棘球蚴不同类型DNA损伤修复基因表达量的影响。方法以细粒棘球蚴为实验材料,以HM为药物,以虫体不同类型DNA损伤修复方式(同源重组修复、非同源末端连接修复、碱基切除修复)及核苷酸切除修复通路的关键修复基因为目的基因设计引物,筛选确定qRT-PCR反应体系,采用该体系检测基因的差异表达水平,分析HM对细粒棘球蚴不同类型DNA损伤修复相关基因的影响。结果筛选的细粒棘球蚴DNA损伤修复类型代表基因BRCA1引物F:5’-TGATTGCGACCTAAGAGAC-3’,R:5’-TTCCATACACAAGCCATCC-3’);KU70引物F:5’-TGATTGCGACCTAAGA GAC-3’,R:5’-GTCGCCATCTCAACTTCA-3’);OGG1引物5’-CGCTATGGTAAGAAGATGTG-3’,R:5’-CGTGAAGATGGATGGAGAA-3’);ERCC1引物F:5’-TCGTGCTCATTGTGTTAGT-3’,R:5’-CTCCTCTGGTGGCTTATTC-3’)。各基因扩增曲线Ct值可用,溶解曲线特异性良好。qRT-PCR检测各样品组BRCA1,KU70,OGG1基因表达均有不同程度上调,DOX组分别为26.05倍,323.44倍,29.63倍,HM组分别为7.24倍,55.65倍,3.22倍,以KU70和BRCA1基因上调尤为明显。ERCC1基因表达量DOX组显著上调(上调倍数25.24),HM组无显著变化。结论 HM对DNA双链断裂修复类型代表基因BRCA1,KU70,OGG1表达量有较大影响,而对ERCC1基因表达无显著影响。