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重组人和大鼠醇脱氢酶、醛-酮还原酶的克隆表达及应用 总被引:1,自引:0,他引:1
克隆、表达人和大鼠醇脱氢酶 (ADH)、醛-酮还原酶 (AKR) 基因全长cDNA, 研究扁桃酸 (MA) 代谢机制。设计引物, 利用RT-PCR克隆人和大鼠醇脱氢酶、醛-酮还原酶基因全长cDNA。测序正确的cDNA被克隆到表达载体pET-28a (+) 上并在大肠杆菌BL21 (DE3) 中稳定表达。利用亲和色谱纯化相应的酶, 通过检测其在340 nm吸收度值的变化进行酶活性测定。获得的醇脱氢酶与扁桃酸, 醛-酮还原酶与苯乙酮酸 (PGA) 共孵育, 采用HPLC分析其代谢和转化情况。通过测序, 目的蛋白的cDNA序列完全正确, 在宿主菌中获得良好的可溶性表达, 经Ni2+亲和柱纯化后目的蛋白达到了电泳纯, 具有较好的催化活性。人ADH2对扁桃酸的代谢具有立体选择性, 优先代谢S-MA, 对S-MA的代谢能力较强。大鼠ADH1对扁桃酸无代谢活性, 人和大鼠AKR对苯乙酮酸均无代谢。成功构建人和大鼠醇脱氢酶、醛-酮还原酶的表达质粒, 获得高活性的蛋白。这些重组酶模型可以用于由醇脱氢酶和醛-酮还原酶介导的药物代谢研究。 相似文献
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目的研究扁桃酸(MA)在大鼠、小鼠和兔组织中的立体选择性代谢,探讨MA代谢酶存在的部位、辅酶依赖性等性质以及可能的种属差异。方法MA对映体与大鼠、小鼠和兔的肝脏、肺、肾脏S9和微粒体共孵育,HPLC检测代谢并用柱前衍生化方法进行手性分析。同时考察辅酶NADH和NADPH及醇脱氢酶竞争性底物乙醇和抑制剂4-甲基吡唑对S-MA代谢的影响。结果S-MA在大鼠肝和肾S9中被代谢为PGA,而R-MA无代谢。两对映体在小鼠和兔组织中均不被代谢。乙醇和4-甲基吡唑不影响酶的活性,该代谢顺利进行的重要辅酶是NADPH而非NADH。结论大鼠中参与MA立体选择性代谢的酶是存在于胞浆或线粒体中的具有NADPH依赖性的非微粒体酶,而不是醇脱氢酶。MA的立体选择性代谢存在种属差异性。 相似文献
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目的 观察氟伐他汀联合天保宁对冠心病的治疗效果,关注其对血清中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和基质金属蛋白酶-14(MMP-14)的作用.方法 收集我院诊治的冠心病患者共138例,分为对照组和观察组各69例.对照组应用常规治疗,观察组在上述基础上加用氟伐他汀联合天保宁进行治疗.观察两组的疗效及治疗3个月后、6个月后对血清中MMP-2、MMP-9和MMP-14的影响.结果 观察组的显效率明显高于对照组,两组治疗3个月时血清中MMP-2、MMP-9和MMP-14的下调作用不明显,而治疗6个月后观察组血清中MMP-2、MMP-9和MMP-14下降更明显.结论 应用氟伐他汀联合天保宁治疗冠心病的疗效明显,于治疗6个月后对血清中MMP-2、MMP-9和MMP-14的表达有下调作用,临床治疗中可以积极应用. 相似文献
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科学家通过研究发现,经常吃南瓜叶、南瓜子、白洋葱、姜、西红柿等食物,再加上适当的体育锻炼及保持正常的体重,不抽烟和不过度饮酒等,将会有助于男性提高精子质量。精子质量低是男性不育的主要原因之一,但是这种状况有的是永久性的,有的则是暂时性的。造成暂时性精子质量不高的原因很多,包括性病、酗酒、抽烟、高温环境、内裤过紧、失眠,工作和情绪压力过大等。这类患者完全可以通过健康的生活方式来提高精子的质量。营养学家指出,很多植物和健康食品都有助于增加精子数量和提高精子质量。从南瓜叶中提取的新鲜深绿色汁液与同等量的鲜奶混… 相似文献
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目的 观察冠心病介入术后应用天保宁治疗患者的焦虑及睡眠质量情况,探讨其临床意义.方法 收集我院收治的186例冠心病介入术后应用天保宁的患者作为观察组,选取体检证实为正常的成年人186例作为对照组.应用焦虑自评量表评价患者焦虑程度,应用睡眠质量量表评价患者的睡眠质量,同时关注观察组患者血脂的表达情况.结果 观察组患者的焦虑评分明显高于对照组[(38.39±4.87)vs(32.40±1.97)],观察组患者睡眠质量的评分明显高于对照组[(6.30±1.05)vs(3.10±0.93)],观察组的血脂水平改善明显(P<0.05).结论 相对于正常人比较,冠心病介入术后应用天保宁治疗的患者常表现为一定程度的焦虑情绪,睡眠质量降低,但应用过程中可以更好地调节血脂.临床应积极进行患者术后针对焦虑情绪的干预,以改善负性情绪和睡眠质量,以更好地促进身心康复. 相似文献
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