重组人肿瘤坏死因子-β(rhTNF-β)的细胞毒效应

应用本室纯化的重组人肿瘤坏死因子-β(rhTNF-β)对悬浮的人白血病细胞HL-60和K562小鼠骨髓瘤细胞NS-1以及贴壁的小鼠纤维母细胞L929和人肝癌细胞SMMC7721进行了微量细胞毒试验,其中悬浮细胞采用~3H-TdR掺入法;贴壁细胞采用结晶紫染色法分别检测.实验表明,此rhTNF-β对HL-60有很强的杀伤作用;NS-1为相对敏感细胞株;而对SMMC7721及K562的杀伤率很低,具有一定抗性.与此同时,作者还应用FDA-PI荧光染色,用荧光显微镜,扫描电镜及透射电镜观察,DNA电泳以及流式细胞仪对细胞周期和凋亡百分率的检测等实验,进一步研究了rhTNF-β对L929和     

人His6-IFNγ/TNFβ(His6γ-TNFNβ)融合蛋白(包涵体)的分离、纯化与复性研究

应用pET28(含T_7lac启动子和His6-tag)质粒,将人γTNFβ融合基因与之组建成pETγLT表达质粒,并转化于E.coliBL21(DE3).本文对pETγLT/ BL21(DE3)工程菌的His6-γTNFβ重组产物进行了诱导表达,分离纯化的研究.结果表明,该工程菌用LB培养基在37℃扩增至OD_(590)为0.5左右,加IPTG(终浓度为1mmol/L)诱导5小时,此时His6-γTNFβ的表达量可占菌体总蛋白的45%.重组产物绝大多数以IBs形式存在于菌体中.工程菌经反复超声破碎、高速离心,得IBs粗制品后,再经含2mol/L脲的缓冲液洗涤可得到相对纯净的IBs.然后用7mol/L脲变性溶解IBs,离心取上清,进行Ni~(2 )-Sepharose 6B柱一步法亲和层析,可得到电泳纯度为95%的His6-γTNFβ,经稀释复性和用凝血酶切去His6-tag的产物,其细胞毒活性为(1.2～2.0)×10~7U/mgp,抗病毒活性为(6.0～6.6)×10~6U/map.     

银夹术加强法行输卵管结扎223例

银夹术加强法行输卵管结扎２２３例马志章浙江省上虞市计划生育技术指导站３１２３００我站自１９９３年６月～１９９５年１２月对２２３例妇女采用银夹术加强法进行输卵管结扎。本组妇女年龄为２０～４０岁，平均３２岁。生育２胎２０９例，１胎１４例。２２３例中分娩后...     

IFNγ-LTα与LTα诱导L929细胞凋亡信号转导的初步研究

目的：研究融合蛋白IFNγ-LTα诱导L929细胞凋亡的信号转导机制，并与LTα相比较。方法：用结晶紫染色法观察细胞毒效应；用检测试剂盒检测caspase 8和3活性的变化；观察3种信号转导分子的抑制剂对IFNγ-LTα和LTα诱导的细胞毒效应的影响。结果：IFNγ-LTα能诱导L929细胞凋亡及胞内caspase 8和3的活变化，但两种caspase产生的时间和幅度有所不同。PKC的抑制剂可促进IFNγ-LTα和LTα对L929细胞的杀伤；而PLA2及Ca^2 通道的抑制剂对杀伤则有明显的阻断作用，但对LTα的阻断强于对IFNγ-LTα的阻断。结论：IFNγ-LTα融合蛋白的抗肿瘤活性强于LTα，其信号转导特征有别于LTα。信号分子caspase与PKC、PLA2、Ca^2 之间可能存在关联。     

肿瘤坏死因子β诱导淋巴细胞化学发光及其增殖的研究

目的：探讨活性氧参与ｒｈＴＮＦβ诱导淋巴细胞活化作用的机理。方法：采用化学发光（ＣＬ）和顺磁共振法（ＥＳＲ）研究ｒｈＴＮＦＢ诱导人外周血淋巴细胞产生活性氧（ＯＲ）的动态变化及其增殖作用。结果：①用１０－２０００Ｕ／ｍｌ的ｒｈＴＮＦβ处理１×１０６ｍｌ－１淋巴细胞均可诱发Ｌｙ－ＣＬ,其中以１００Ｕ／ｍｌ　ｒｈＴＮＦβ处理１８～２０ｍｉｎ的ＣＬ峰值（ＲＬＩ）为最高,所诱发的ＯＲ主要为ＯＨ·;②以１５～６２Ｕ／ｍｌ的ｒｈＴＮＦβ处理淋巴细胞７２ｈ,可明显地产生活化效应,这与ＴＮＦＢ诱发淋巴细胞早期产生Ｌｙ－ＣＬ的强度相一致。结论：适当剂量的ｒｈＴＮＦβ可诱导人外周血淋巴细胞产生ＯＲ并促进其增殖。     

重组人肿瘤坏死因子β(HuTNFβ)的纯化及抗肿瘤效应的初步研究

本文利用能表达HuTNFβ的工程菌株(P20KLT)按常规培养及扩增．即采用LB培养液(内含Amp100．μg／ml Tet 5μg／ml)；1：40扩增．当A550达0．1时，加入IAA(20μg／ml)，当A550为1．0时，中止培养，离心(5000rpm，4℃)收集菌体。在菌体中按1：5加入缓冲液，冰浴中超声破碎，13，000rpm高速离心20分钟，     

人γ干扰素/β肿瘤坏死因子融合蛋白原核高效表达质粒的构建与表达

将人γ干扰素/β肿瘤坏死因子融合蛋白(hIFN-γ/TNF-β,rhTNF-β)是一种颇具理论研究价值和临床应用前景的新型细胞因子.鉴于现有的rhTNF-β表达质粒的表达水平较低(1%左右),不能满足研究工作的需要.本工作在过去构建rhTNF-β表达质粒的基础上,采用分步构建的方式,首先构建了该融合蛋白基因5’端部分的人γ干扰素突变体(hIFN-γ134-X13)编码序列的表达质粒,在获得高效表达以后,再在其3’端连接上5’端缺失23个氨基酸残基(aa)的人β肿瘤坏死因子(hTNF-β148)的核酸序列,进行整个融合蛋白基因的表达研究.实验结果表明,新构建的rhTNF-β表达质粒经转化大肠杆菌BL21(DE3),在λP_RP_L启动子的控制下,温敏诱导表     

重组细胞因子融合蛋白的研究进展

应用基因工程实验技术,将细胞因子蛋白分子重组成一种融合蛋白分子.这种新型的融合蛋白分子,可发挥超越其单因子的生物学活性和/或具有便于分离纯化、检测等特性.因此它不仅在理论上有着崭新的内涵值得深入探讨,而且在应用上也具有潜在的广阔前景.本文对此领域的研究进展作一综述.     

淋巴细胞活化辅助分子与信号转导

淋巴细胞活化辅助分子与信号转导马志章，周晴，丁仁瑞（杭州大学生命科学学院，杭州３１００２８）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎｔｏｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎｏｆａｎａｎｔｉｇｅｎｔｈｒｏｕｇｈａｎｔｉｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，ｌ...