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1.
目的 通过观察短双链RNA(Short interfering RNA,siRNA)体外转染HeLa细胞评价siRNA抗CVB3病毒感染的可行性和抑制作用机制.方法 通过细胞病变作用保护实验,选择合适的siRNA剂量.Western Blot、RT-PCR等方法在体外检测siRNA抗CVB3病毒复制作用及作用途径.结果siRNA-3753通过脂质体转染试剂能高效转入HeLa细胞,转染效率可达98.77%,在细胞内可稳定长达48 h.siRNA-3753的浓度为0.6 μmol/L对病毒抑制率高同时对细胞不会产生毒性作用,该浓度作为本次研究的实验剂量.siRNA-3753抗CVB3病毒感染作用是通过siRNA直接降解病毒基因得到的,而不是通过激活PKR或干扰素等其他未知因素起效的.结论 siRNA可以高效、较长时间的转染入HeLa细胞内,在低剂量时即产生较好的抗病毒感染作用,通过直接降解病毒基因组的途径特异性抑制CVB3病毒的复制及感染. 相似文献
2.
目的 研究在病毒性心肌炎小鼠模型上敲减Itk蛋白的表达对小鼠炎症反应的影响.方法 BALB/c小鼠尾静脉注射表达Itk-shRNA的质粒后感染CVB3,第4天后观察Itk基因的抑制情况、小鼠存活率,PBMC增殖率及部分炎症性细胞因子的分泌水平.结果 Itk-shRNA转染至小鼠体内后脾细胞中Itk基因的mRNA水平与空白对照组及转染shRNAnon的对照组相比,敲减率约40%(P<0.05).与转染shRNAnon组相比,Itk-shRNA组中Itk基因表达的抑制导致小鼠PBMC增殖活性降低约41%,小鼠的存活率提高(P<0.05).Itk-shRNA组血清中细胞因子水平降低.结论 抑制Itk表达能有效降低小鼠PBMC的增殖,同时减少炎症相关细胞因子的分泌,提高小鼠的存活率. 相似文献
3.
目的 应用RNA干扰技术特异性抑制Itk基因的表达,观察Itk蛋白在淋巴细胞增殖和相应免疫因子合成分泌中的作用,进行Itk作为药物靶标的确认.方法 设计合成针对Itk基因的siRNA,将siRNA电转染至小鼠脾淋巴细胞,Western Blot检测Itk蛋白的表达、MTS方法检测细胞增殖率、ELISA方法检测细胞因子的含量.结果 实验组hk-siRNA在细胞水平上有效抑制了Itk蛋白的表达;Itk受抑制后细胞增殖率与对照组相比明显降低,差异有统计学意义,P<0.05;细胞因子IL-2,IL-4,IL-5,IFN-γ的分泌水平下降,P<0.05.结论 Itk表达受抑制后有效降低脾淋巴细胞的增殖率及细胞因子分泌的减少,研究验证了Itk在细胞增殖和炎性细胞因子分泌方面的重要免疫调节作用,为将其作为药物的靶基因提供实验依据. 相似文献
4.
利用RNA干扰的方法抑制人外周血单个核细胞(PBMC)中Itk基因的表达,探讨其抑制Itk后对人PBMC增殖和炎症性相关细胞因子产生的影响。设计针对Itk基因的siRNA序列,与外源表达Itk的pEGFP-C1-hItk质粒共转染至HeLa细胞,筛选出有效的干扰序列;利用电转染的方法将有抑制Itk作用的siRNA转染至人PBMC,检测Itk抑制状态,同时观察细胞增殖率及炎症性细胞因子产生水平的变化。实验表明,Itk-siRNA有效地抑制了Itk蛋白的表达;Itk受到抑制后细胞增殖率明显低于对照组(P0.05);几种重要炎性细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-5、IL-10和IL-4产生水平下降。实验验证了Itk蛋白在人PBMC增殖和炎性细胞因子产生方面的重要作用。 相似文献
5.
目的调查分析航天在职职工的心理健康状况,并提出相应的干预建议及思考。方法采用抑郁和焦虑量表对航天在职员工的心理健康状况进行调查,并就结果进行统计分析。结果 26.7%的职工存在不同程度的心理问题,其中有抑郁倾向的占24.7%。结论航天在职职工的抑郁心理倾向较重,低学历和工人的抑郁倾向较多。 相似文献
6.
目的调查分析航天在职职工的心理健康状况,并提出相应的干预建议及思考。方法采用抑郁和焦虑量表对航天在职员工的心理健康状况进行调查,并就结果进行统计分析。结果 26.7%的职工存在不同程度的心理问题,其中有抑郁倾向的占24.7%。结论航天在职职工的抑郁心理倾向较重,低学历和工人的抑郁倾向较多。 相似文献
7.
目的探讨河豚毒素与阿斯匹林联合应用是否具有协同镇痛效应。方法采用醋酸扭体实验和福尔马林致痛实验,小鼠分别肌肉注射河豚毒素、阿斯匹林及两者的混合物(0.39μg·kg-1,0.79μg·kg-1加不同浓度的阿斯匹林),观察联合用药是否具有协同镇痛作用。结果在两种镇痛实验中,河豚毒素和阿斯匹林单独应用,均具有一定的镇痛效应。在醋酸扭体实验中,两药的ID50s分别为2.1μg·kg-1和64mg·kg-1;在福尔马林致痛实验中,两药能明显缩短皮下注射甲醛后第2时相小鼠舔脚时间,ID50s分别为2.3μg·kg-1和74.2mg·kg-1。河豚毒素与阿斯匹林联合应用具有协同镇痛作用:(1)与单独应用阿斯匹林相比,河豚毒素0.39μg·kg-1(150LD50)、0.79μg·kg-1(125LD50)与阿斯匹林联合应用,分别使阿斯匹林的镇痛ID50从64.0mg·kg-1下降到12.6mg·kg-1和5.8mg·kg-1(醋酸扭体实验);从74.2mg·kg-1下降到13.0mg·kg-1和7.4mg·kg-1(福尔马林致痛实验)。(2)协同效应图分析显示两者具有明显协同作用。结论河豚毒素与阿斯匹林联合应用具有协同镇痛效应,本研究对于开发新型镇痛药具有一定的指导意义。 相似文献
8.
INTRODUCTIONTelomerasemaycontributetocellreplicationbymaintainingthelengthofcellulartelomeres.Normaltelomeraseactivityisrequiredtomaintainprolifera-tionofgermlineandstemcells,lackingofwhichisimportanttothesenescenceandagingofmostsomat-iccells.Reactivationoftelomeraseisessentialforcelltransformation.Telomeraseactivityhasbeende-tectedinmosthumancancers,whileinhibitionoftelomeraseactivityincancercellsleadstocancersuppression(1,2).Consequentlytelomerasemaybeanewdiagnosticmarkeroftumorsandtarg… 相似文献
9.
抑制Itk表达对Jurkat细胞分泌细胞因子的影响 总被引:2,自引:1,他引:1
目的 研究在Jurkat细胞上敲减Itk蛋白的表达对细胞增殖及炎症相关的细胞因子产生的影响,为Itk作为小分子药物靶标提供可行性实验依据.方法 针对Itk基因设计合成三个shRNAs,通过与pEGFP-C1-hItk质粒共转染,观察其抑制Itk-GFP融合蛋白的表达情况,筛选有效序列包装成慢病毒颗粒.将慢病毒颗粒感染Jurkat细胞,观测Itk蛋白的表达水平、细胞增殖情况及细胞因子的变化.结果 Itk-shRNA1感染Jurkat细胞后Itk基因的mRNA水平与细胞对照组及感染shRNAnon的对照组相比,敲减率约55%,差异有统计学意义P<0.05.Itk蛋白的敲减导致Jurkat细胞在受刺激时增殖降低,以未感染病毒的Jurkat细胞受刺激后酶标仪检测的A值为1,Itk-shRNA1感染组平均比值为0.54,shRNAnon对照组平均比值为0.83,两组差异有统计学意义,P<0.05.Itk-shRNA1感染组中IL-2、IL-5、IL-10及IFN-γ等细胞因子水平均较shRNAnon对照组低,差异有统计学意义,提示Itk蛋白的表达减少导致Jurkat细胞产生细胞因子减少.结论 抑制Itk表达能有效降低淋巴细胞的增殖,同时减少与炎症相关细胞因子分泌. 相似文献
10.
目的利用RNA干扰技术,在细胞、蛋白和基因水平上观察短双链RNA对柯萨奇病毒体外感染Hela细胞的增殖抑制作用、对病毒RNA复制和蛋白合成的影响。方法应用病毒致细胞病变作用保护实验、空斑形成减少实验、Western Blot、RT-PCR等方法,在体外检测其抗CVB3病毒作用。结果设计、合成的8条SiRNA中,针对基因组2B、VP4、2A、3C区的SiRNA-2、SiRNA-3、SiRNA-6、SiRNA-7具有不同程度的抑制病毒作用。其中,病毒基因组2B的SiRN.2作用效果最好,对Hela细胞CVB3感染72h后致细胞病变和空斑形成的抑制率为95%,抑制病毒蛋白的合成,病毒基因的复制水平也显著降低,在病毒0.1、0.01、0.001、0.0001 MOI感染水平上对CVB3致细胞病变作用的抑制率分别为30%、70%、88%和99%(48h)。结论针对CVB3基因组2B的SiRNA-2具有较强的抑制柯萨奇B3型病毒感染的作用。 相似文献