人IL-24基因在CHO细胞中的表达及其抗肿瘤效应

目的构建人IL-24基因真核表达载体,在CHO细胞中进行稳定表达,并检测重组表达蛋白rhIL-24的抗肿瘤活性。方法将测序验证的人IL-24基因亚克隆至真核表达载体pcDNA3,构建重组真核表达载体pcDNA3-hIL-24,转染CHO细胞进行稳定表达,经RT-PCR鉴定后用MTT法、Ho-echst染色和流式细胞术检测CHO细胞表达的rhIL-24诱导A549人肺腺癌细胞凋亡的抗肿瘤效应,用ELISA检测其刺激免疫细胞分泌IL-6和IFN-γ的功能。结果经双酶切和PCR鉴定,重组真核表达载体构建正确,人IL-24在CHO细胞中获得稳定表达,且所表达的人IL-24具有较强的诱导A549人肺腺癌细胞凋亡及上调免疫细胞表达IL-6和IFN-γ的免疫刺激活性。结论人IL-24基因的稳定表达和抗肿瘤效应的实验研究,为进一步研究人IL-24抗肿瘤的分子机制及潜在的应用奠定了基础。     

人IL-24基因的克隆及在COS-7细胞中的表达

目的：克隆人IL-24基因，构建真核表达载体，在COS-7细胞中进行表达，并检测重组表达蛋白hIL-24的抗肿瘤活性。方法：分离人外周血单个核细胞，提取细胞总RNA，采用RT-PCR技术克隆人IL-24基因，将其重组于pUC19，双脱氧末端终止法测定其核苷酸序列，构建真核重组表达载体pcDNA3-hIL-24，进行双酶切和PCR鉴定，以质粒pcDNA3-hIL-24转染COS-7细胞进行瞬时表达，用RT-PCR检测mRNA表达，并用MTT法、TUNEL法和流式细胞术检测其诱导肿瘤细胞凋亡的活性。结果：成功获得621bp的人IL-24基因，测序正确，经双酶切和PCR鉴定真核表达质粒构建正确，以脂质体转染COS-7细胞后，用RT-PCR法、MTT法、TUNEL法和流式细胞术检测表明COS-7细胞可表达hIL-24，且所表达的人IL-24具有较强的诱导A549肺腺癌细胞凋亡的作用。结论：人IL-24基因的瞬时表达和凋亡效应的初步研究已获成功，为研究人IL-24抗肿瘤的分子机制和临床应用提供了实验依据．     

hIFN-λ1（hIL-29）基因及在COS-7细胞中瞬时表达和抗病毒效应

目的：克隆hIFN-λ1基因，构建pcDNA．3．IA-IFN—λ1表达质粒，并在真核细胞中获得表达，以进一步研究rhIFN-λ1的生物学特性。方法：采用RT-PCR法从病毒诱导的A549细胞mRNA中克隆hIFN-λ1基因，并重组于pcDNA3．1A真核表达载体上。结果：经双酶切和PCR鉴定及DNA序列分析，发现所克隆的基因与GenBank公布的序列一致，并在COS-7细胞中获得了有效瞬时表达。结论：成功克隆了hIFN-λ1基因，并成功地获得了瞬时表达，其rhIFN-λ1表达产物具有抗病毒活性。     

人IL-24基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

IL-24既能抑制肿瘤细胞生长和血管形成并诱导肿瘤细胞凋亡，又能诱导免疫细胞分泌IL-6、TNF-α、IFN-γ等多种细胞因子。在对乳腺癌、肠癌、肺癌及胶质瘤等肿瘤基因治疗中有显著的抗肿瘤效果。目前有关建立IL-24基因表达系统，开展rhIL-24蛋白生物学特性研究及产品研制，国内外鲜见报道。本文为本项研究的起步。     

rhIL-24刺激PBMC产生IFN-γ、IL-6的初步研究

目的 研究重组人白细胞介素24(rhlL-24)对外周血单个核细胞产生γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素6(IL-6)的刺激效应。方法 正常人的外周血单个核细胞(PBMC)经含有rhlL-24的CHO细胞表达上清刺激48 h、72 h,取其刺激PBMC培养上清液用酶联免疫吸附试验((ELISA)法测定IFN-γ和IL-6含量。结果 加含rhlL-24的CHO细胞表达上清的实验组上清中IFN-γ和IL-6含量明显高于对照组(P<0.01)。结论 rhlL-24对外周血单个核细胞分泌IFN-γ和IL-6具有刺激效应,说明rhlL-24具有明显的免疫调节功能。导师。     

人白细胞介素-24基因的克隆及序列测定

目的克隆人白细胞介素-24(hIL-24)基因，以供重组表达。方法利用自行设计合成的一对引物，采用RT-PCR技术从LPS活化的人外周血单个核细胞的总RNA中分离hIL-24cDNA并重组到pUCl9载体上，进行酶切鉴定和DNA序列测定。结果PCR及酶切产物电泳结果均证明所克隆的基因为621bp。经序列测定证实所克隆的hIL-24与GenBank报道的结果完全一致。结论该基因系国内首次获得并经序列测定证实的hIL-24cDNA基因。这为进一步在真核或大肠杆菌中高效表达有活性的重组hIL-24，更深入地研究其作用机制以及临床应用奠定了坚实的基础。     

白细胞介素24的研究进展

IL 2 4是一种分子量为 2 3.8kD的细胞因子 ,系IL 10家族成员。人IL 2 4基因位于染色体 1q32 .2 q4 1,编码产物为 2 0 6个氨基酸的蛋白质。IL 2 4主要表达于外周血单个核细胞、胸腺及脾脏等免疫器官。在信号转导方面 ,IL 2 4介导STAT1和STAT3的激活。研究表明 ,IL 2 4基因是一个既抑制肿瘤生长 ,又表达刺激免疫系统的蛋白的基因 ,对此基因的研究具有非常重要的理论和临床意义。     

hIEN-λ1(hIL-29)基因及在COS-7细胞中瞬时表达和抗病毒效应

目的克隆hIFN-λ1基因,构建pcDNA3.1 A-IFN-λ1表达质粒,并在真核细胞中获得表达,以进一步研究rhIFN-λ1的生物学特性.方法采用RT-PCR法从病毒诱导的A549细胞mRNA中克隆hIFN-λ1基因,并重组于pcDNA3.1A真核表达载体上.结果经双酶切和PCR鉴定及DNA序列分析,发现所克隆的基因与GenBank公布的序列一致,并在COS-7细胞中获得了有效瞬时表达.结论成功克隆了hIFN-λ1基因,并成功地获得了瞬时表达,其rhIFN-λ1表达产物具有抗病毒活性.