长链非编码 RNA linc 00261通过竞争性结合微小 RNA-182调控 RND3基因参与卵巢癌癌细胞的生物学行为研究

目的 探讨长链非编码RNA linc 00261通过竞争性结合微小RNA-182(miR-182)调控RND3基因参与卵巢癌癌细胞生物学行为研究及其作用机制.方法 选取人卵巢表面上皮细胞系IOSE80和4株卵巢癌细胞系SKOV3、HO8910、A2780和OV-CAR.实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测linc 00261、miR-182和RND3 mRNA的表达;双荧光素酶实验验证linc 00261和miR-182结合,miR-182靶向调控RND3;RIP验证linc 00261和AGO2结合;RNA pull down结果证明linc 00261和miR-182结合;CCK8检测细胞的生长能力;Transwell实验检测细胞迁移侵袭能力;细胞流式术检测细胞凋亡率;蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)检测RND3和凋亡相关因子Bax和Bcl-2蛋白的表达.结果 与人卵巢表面上皮细胞株IOSE80(1.00±0.11)相比,4株卵巢癌细胞SKOV3(0.25±0.04)、HO8910(0.71±0.08)、A2780(0.53±0.07)和OVCAR(0.36±0.05)中linc 00261的表达显著降低(P<0.05),而miR-182的表达在SKOV3(3.46±0.42)、HO8910(2.07±0.21)、A2780(2.79±0.31)和OVCAR(2.98±0.32)中均显著增加(均P<0.05),其中SKOV3中linc 00261的表达最低.双荧光素酶实验验证linc 00261能与miR-182结合,RIP实验验证AGO2蛋白与linc 00261结合,RNA pull down实验证明linc 00261与miR-182特异性结合,且miR-182能够靶向调控RND3的表达.过表达linc 00261或沉默miR-182可以抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进其凋亡,凋亡相关因子Bax表达上调,而抗凋亡相关因子Bcl-2表达下降,而过表达miR-182或沉默RND3可以逆转linc 00261过表达对卵巢癌细胞生物学活性的抑制作用.结论 长链非编码RNA linc 00261通过竞争性结合miR-182,从而上调RND3基因,进而抑制卵巢癌癌细胞增殖、迁移和侵袭,并促进其凋亡.