蛋白激酶Cθ信号途径在结核分枝杆菌抗原激活人γδT细胞增殖和分化中的作用

目的 研究蛋白激酶Cθ(protein kinase Cθ,PKCθ)信号途径在结核分枝杆菌抗原(Mycobacterium tuberculosis antigen,Mtb-Ag)激活人γδT细胞增殖和分化中的作用.方法 健康人外周血单个核细胞(PBMC)用Mtb-Ag和IL-2优势刺激和扩增γδT细胞,或预先用5.0μmol/L Rottlerin(楸毒素)预处理,培养不同时间后,用流式细胞术(FCM)检测γδT细胞表面活化分子和细胞因子表达;同时采用活体染料羧基荧光素乙酰乙酸(CFSE)标记细胞,流式细胞术分析Mtb-Ag刺激γδT细胞后的增殖和各子代细胞百分率.结果 PBMC经Mtb-Ag刺激后3d,γδT细胞CD69和CD25表达分别为46.2%和45.6%,而Rotderin预处理显著地抑制了CD69和CD25表达(P＜0.01);PBMC经Mtb-Ag激活培养5、10和15d,培养扩增细胞中的γδT细胞比例分别为9.6%、54.6%和82.4%,其中第5天已有少部分γδT细胞发生增殖,第10天和第15天时几乎全部γδT细胞分裂都在6代以上,用Rottlerin预处理,显著抑制了γδT细胞增殖反应,但在培养第10天后仍有少部分γδT细胞发生增殖反应;同时在培养第7天、14天和21天,用PMA(佛波酯)+Ionomycin(离子霉素)再刺激后,产生IFN-γ的γδT细胞均在80%左右;培养21d时,有2.6%的γδT细胞表达IL-4.在Rottlerin预处理组产生TH1型细胞因子IFN-γ的γδT细胞均显著减少(P＜0.05),而γδT细胞表达TH2型细胞因子IL-4则几乎完全抑制(P＜0.01).结论 PKCθ信号途径在Mtb-Ag刺激γδT细胞的增殖和分化中均起重要作用.     

PKC途径和P13K在人γδT细胞分泌IL-2与IFN-γ中的作用

目的 研究信号转导中的蛋白激酶C(PKC)途径与磷酸肌醇3激酶(P13K)在人外周血γδT细胞分泌Th1型细胞因子IL-2与IFN-γ中的作用.方法 人PBMC先用P13K抑制剂Ly29400Z、PKC抑制剂Rottlerin或NT-κB抑制剂TPCK分别预处理1h,再加入结核杆菌低分子量多肽抗原(Mtb-Ag)和rhIL-2刺激3 d,最后用低浓度PMA Ionomycin短时再刺激后检测γδT细胞IL-2和IFN-T分泌;并同时检测,αβT细胞作为对照.结果 无抑制剂的对照组γδT和αβT细胞中分泌IL-2的比例分别为44.5%和15.2%,分泌IFN-γ的比例分别为51.1%和10.7%;Ly294002、Rottlerin、TPCK组分泌IL-2的γδT和αβT细胞均显著减少(P＜0.05或P＜0.01),后二组分泌IFN-γ的78T和αβT细胞亦显著减少(P＜0.05或P＜0.01);但Ly294002组分泌IFN-γ的γδT和αβT细胞反而上升至77.2%和22.3%(P＜0.01).结论 PKC途径活化促进人γδT细胞分泌IL-2与IFN-γ;PDK亦促进人γδT细胞分泌IL-2但在其分泌IFN-γ中起负向作用.     

抗心磷脂抗体及抗β2糖蛋白1抗体检测血脂正常脑梗死患者的临床意义

目的研究抗心磷脂抗体(ACA)及抗β2糖蛋白1抗体(anti-β2-GP1)在脑梗死患者中的表达及其临床意义。方法选取确诊的脑梗死患者211例,按照是否合并高脂血症,分为血脂正常脑梗死组(n=121)和高脂血症合并脑梗死组(n=90)。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)对两组患者血清IgA、IgG、IgM型ACA和anti-β2-GP1进行测定并比较两组阳性率的差异;同时比较不同年龄、性别、病灶数量的血脂正常脑梗死组患者ACA和anti-β2-GP1阳性率差异及脑梗死患者两类抗体之间的相关性。结果血脂正常脑梗死组和高脂血症合并脑梗死组的ACA阳性率分别为14.0%和4.4%(χ~2=4.295,P=0.038),anti-β2-GP1阳性率分别为17.4%和5.6%(χ~2=6.651,P=0.010)。血脂正常脑梗死组患者中,90例单发性脑梗死和31例多发性脑梗死患者的ACA阳性率分别为8.9%和29.0%(χ~2=7.748,P=0.005),anti-β2-GP1阳性率分别为10.0%和38.7%(χ~2=13.250,P=0.000);在血脂正常脑梗死组患者中,≤50岁67例,50岁54例,ACA阳性率分别为20.9%和5.6%(χ~2=4.626,P=0.031),anti-β2-GP1阳性率分别为25.4%和7.4%(χ~2=5.534,P=0.019);ACA和anti-β2-GP1阳性率在性别上差异无统计学意义(P0.05);一致性χ~2检验显示211例脑梗死患者ACA和anti-β2-GP1有相关性(P0.05)。结论 ACA及anti-β2-GP1可能是血脂正常中青年脑梗死患者的重要发病原因之一,临床应加强对这类人群ACA及anti-β2-GP1的联合检测。     

一株识别CD83单克隆抗体的研制及其生物学特性鉴定

目的:鼠抗人CD83功能性单克隆抗体(mAb)的研制及其生物学特性的鉴定.方法:以人CD83转基因细胞L929/CD83为免疫原,常规免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠;采用B淋巴细胞融合技术,将免疫小鼠脾脏细胞与Sp2/0融合,以L929/CD83、293/CD83转基因细胞为抗体筛选阳性细胞,经免疫荧光标记分析对杂交瘤进行反复筛选和多次的克隆化培养;采用Ig类和亚类快速定性试纸法、染色体核型分析、竞争结合抑制试验、间接免疫荧光法、Western blot对mAb的生物学特性进行鉴定.结果:获得1株稳定分泌鼠抗人CD83mAb的杂交瘤细胞株(命名为9D8),该mAb能特异性地识别成熟的DC、活化的T细胞及肿瘤细胞株Daudi、8226表达的CD83分子,该mAb识别的位点不同于商品化抗人CD83mAb(HB15e).结论:成功地研制1株鼠抗人CD83mAb,识别位点与HB15e不同,为更好地研究该分子的功能提供良好的物质基础.     

血清ALP和Lp(a)对预测高血压患者发生脑梗死的临床价值

目的 分析血清碱性磷酸酶(ALP)联合脂蛋白a[Lp(a)]在预测高血压患者发生脑梗死的临床价值。方法 选取2020年10月-2022年6月安徽医科大学第二附属医院收治的76例高血压合并脑梗死患者和同期入院的40例高血压非脑梗死患者作为研究对象,分别纳入高血压脑梗死组和高血压组。收集两组病例的临床资料包括性别、年龄、糖尿病史、心脏病史、吸烟史、饮酒史等,检测ALP和Lp(a)水平并进行比较分析。根据美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)评分,将高血压脑梗死组分为轻度神经缺损组(n=36)和中重度神经缺损组(n=40),比较两组ALP和Lp(a)水平差异;Pearson相关性分析高血压脑梗死组ALP和Lp(a)水平与NIHSS评分的相关性;二分类logistic回归分析高血压患者发生脑梗死的危险因素;构建受试者工作特征(ROC)曲线评估血清ALP、Lp(a)联合对高血压患者发生脑梗死的预测价值。结果 高血压脑梗死组血清ALP[90.00(77.00,102.00)U/L vs. 75.00(69.00,82.50)U/L]、Lp(a)[350.00(213.50,537.50)mg/L v...     

PKC途径和PI3K在人γδT细胞分泌IL-2与IFN-γ中的作用

目的研究信号转导中的蛋白激酶C(PKC)途径与磷酸肌醇3激酶(PI3K)在人外周血γδT细胞分泌Th1型细胞因子IL-2与IFN-γ中的作用。方法人PBMC先用PI3K抑制剂Ly294002、PKC抑制剂Rottlerin或NF-κB抑制剂TPCK分别预处理1h,再加入结核杆菌低分子量多肽抗原(Mtb-Ag)和rhIL-2刺激3 d,最后用低浓度PMA+Ionomycin短时再刺激后检测γδT细胞IL-2和IFN-γ分泌;并同时检测αβT细胞作为对照。结果无抑制剂的对照组γδT和αβT细胞中分泌IL-2的比例分别为44.5%和15.2%,分泌IFN-γ的比例分别为51.1%和10.7%;Ly294002、Rottlerin、TPCK组分泌IL-2的γδT和αβT细胞均显著减少(P<0.05或P<0.01),后二组分泌IFN-γ的γδT和αβT细胞亦显著减少(P<0.05或P<0.01);但Ly294002组分泌IFN-γ的γδT和αβT细胞反而上升至77.2%和22.3%(P<0.01)。结论PKC途径活化促进人γδT细胞分泌IL-2与IFN-γ;PI3K亦促进人γδT细胞分泌IL-2但在其分泌IFN-γ中起负向作用。     

抗心磷脂和β2糖蛋白I抗体在结缔组织病中的表达特点

摘要：目的 探讨IgA/IgG/IgM型抗心磷脂抗体（aCL）和抗β2糖蛋白1抗体（anti-β2-GP1 ）在结缔组织病（CTD）中的表达特点。方法 酶联免疫吸附法检测9类共546例CTD患者血清IgA/IgG/IgM型aCL和anti-β2-GP1水平,分析比较这6个指标在9类CTD中的分布差异。结果。在9类CTD之间aCL-IgA、aCL-IgG、anti-β2-GP1-IgA和anti-β2-GP1-IgG的浓度和阳性率均存在显著差异（浓度P=0.002, P=0.000, P=0.004, P=0.013;阳性率P=0.031, P=0.000, P=0.016, P=0.002）,但aCL-IgM和anti-β2-GP1-IgM的浓度和阳性率在9类CTD间无显著性差异（浓度P=0.282, P=0.095;阳性率P=0.342, P=0.324）。与之形成鲜明对比的是,aCL-IgA与anti-β2-GP1-IgA之间以及aCL-IgG与anti-β2-GP1-IgG之间阳性率无显著差异（P=0.21; P=0.163）;而aCL-IgM与anti-β2-GP1-IgM之间阳性率存在显著差异（P=0.000）。进一步分析表明aCL的IgA与IgG之间以及IgA与IgM之间阳性率存在显著差异（P=0.042; P=0.011）,而anti-β2-GP1中阳性率的显著差异存在于IgG与IgM之间和IgA与IgM之间（P=0.000; P=0.000）。总体aCL和anti-β2-GP1之间具有显著相关性（?2=74.198, P=0.000）。结论IgA/IgG型aCL和anti-β2-GP1在CTD之间分布存在显著差异,IgM型抗体分布差异存在于aCL和anti-β2-GP1之间;aCL中IgG与IgM表达占优势,而anti-β2-GP1的优势表达抗体为IgM。联合检测aCL和aβ2-GP1对CTD具有重要的临床价值。     

结缔组织病中抗心磷脂抗体和抗β_2-糖蛋白Ⅰ抗体的表达特点

目的探讨IgA/IgG/IgM类抗心磷脂抗体(a CL)和抗β_2-糖蛋白Ⅰ抗体(anti-β_2-GPⅠ)在结缔组织病(CTD)中的表达特点。方法酶联免疫吸附法检测9类共546例CTD患者血清IgA/IgG/IgM类a CL和anti-β_2-GPⅠ水平,分析比较这6个指标在9类CTD中的分布差异。结果在9类CTD之间a CL-IgA、a CL-IgG、anti-β_2-GPⅠ-IgA和anti-β_2-GPⅠ-IgG的浓度和阳性率差异均有统计学意义(浓度:P=0.002,0.000,0.004,0.013;阳性率:P=0.031,0.000,0.016,0.002),但a CL-IgM和anti-β_2-GPⅠ-IgM的浓度和阳性率在9类CTD间差异无统计学意义(浓度:P=0.282,0.095;阳性率:P=0.342,0.324)。546例CTD患者a CL-IgA、a CL-IgG、a CL-IgM、anti-β_2-GPⅠ-IgA、anti-β_2-GPⅠ-IgG和anti-β_2-GPⅠ-IgM等6种抗体的阳性率分别为5.3%、8.4%、9.3%、7.1%、6.2%和18.1%。其中a CL-IgA与anti-β_2-GPⅠ-IgA阳性率以及a CL-IgG与anti-β_2-GPⅠ-IgG阳性率差异无统计学意义(P=0.21,0.163),但a CL-IgM和anti-β_2-GPⅠ-IgM阳性率差异有统计学意义(P=0.000)。进一步分析表明a CL的IgA与IgG之间以及IgA与IgM之间阳性率差异有统计学意义(P=0.042,0.011),而anti-β_2-GPⅠ中阳性率的显著差异存在于IgG与IgM之间和IgA与IgM之间(P=0.000,0.000)。结论 9类CTD之间IgA/IgG类、以及9类CTD总体IgM类a CL和anti-β_2-GPⅠ阳性率存在差异;a CL中IgG与IgM表达占优势,而anti-β_2-GPⅠ的优势表达抗体为IgM。