天然抗菌肽分离纯化方法的建立

目的寻找高效、广谱的新型天然抗菌肽，建立稳定、有效的分离纯化方法。方法家蝇免疫诱导后制成组织匀浆，经超速离心、分子筛过滤、SephadexG50层析、反相高效液相色谱法（RP-HPLC）、透析浓缩等技术进行分离纯化，用K-B法鉴定抗菌活性。结果组织提取液经超速离心后，用pH6．8Tris-HCI尿素缓冲液作流动相，SephadexG50层析，收集到有明显抗菌活性的成分。再用pH6．8磷酸盐缓冲液作流动相，经RP-HPLC半制备柱进一步纯化，各成分分离效果良好，保留时间为18．008min处的谱峰，有明显的抗菌活性。用RP-HPLC分析柱显示其为单一成分，达到了色谱纯。该抗菌肽对大肠埃希菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC27853和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistantS．aureus，MRSA）均有抗菌活性。结论建立了有效的家蝇抗菌肽分离纯化方法，纯化的家蝇抗菌肽有广谱抗菌活性。     

家蝇抗菌肽分子结构及抗菌谱研究

目的研究家蝇抗菌肽的分子结构和抗菌谱,寻找广谱高效天然抗菌肽。方法家蝇被损伤感染诱导免疫后制成组织匀浆,用蛋白质纯化技术分离纯化抗菌肽,测定抗菌活性及抗菌谱,纳升电喷雾飞行时间质谱测定氨基酸序列。结果家蝇组织提取液经蛋白质纯化,得到一纯化的抗菌活性成份,纳升电喷雾飞行时间质谱测序,得到两个肽段的氨基酸序列:肽段1.QPNLYYNK和肽段2.PNNVYYTK。通过NCBInr蛋白质数据库检索,未发现有与之序列相匹配的蛋白质。该抗菌肽对11种临床标本分离菌株铜绿色假单胞菌、大肠埃希菌、伤寒沙门菌、普通变形菌、异形柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、福氏痢疾杆菌、表葡菌、耐甲氧西林金葡菌(MRSA)和白念珠菌的MIC分别为:3.89、2.22、4.44、6.67、3.33、6.67、5.0、6.67、4.44、4.44和13.33μmol/L。结论本文得到的抗菌肽是一个新型抗菌肽,有广谱抗菌活性,对革兰阴性菌和革兰阳性菌均有一定的抑制作用。