抗病毒药物研究新领域:病毒感染基因组学

由于病毒基因组编码基因数量少,从病毒中发现药物靶标受到一定限制.最近的研究表明,抑制宿主细胞中某些蛋白的功能可以阻断病毒感染.与病毒基因组相比,人类基因组序列中可能包括更多的与病毒繁殖有关的基因.用DNA微阵列技术系统分析宿主基因表达,是一种从宿主细胞角度发现潜在抗病毒靶标的有效方法.最近报道了有关病毒影响宿主细胞基因表达谱的研究战略,以及通过表达谱分析来发现与病毒复制有关的宿主细胞通路.因此,人类基因组学技术在发现新的抗病毒药物研究中具有重要作用.     

抗病毒天然免疫反应中RIG-Ⅰ样受体调控机制新进展

宿主免疫细胞和相关的组织细胞能够通过表达病原模式识别受体（pattern recognition receptor,PRR）即Toll样受体（Toll-like receptor,TLR）、核苷酸寡聚化域样受体（NOD-like receptor,NLR）、维A酸诱导基因Ⅰ样受体（RIG-Ⅰ-like receptor,RLR）检测病毒及其他病原微生物,并将感染信号级联放大,诱发抗病毒天然免疫反应。由于PRR成员识别病原的特异性和机制各具特色,使有关PRR的鉴定及其诱发天然免疫反应的分子机制研究更加具有挑战性,特别是细胞质病原识别受体——RLR引发的信号通路研究已经成为细胞生物学与免疫学领域的热点之一。最新研究发现,泛素化、去泛素化及干扰素刺激基因（interferon stimulating gene,ISG）化等翻译后修饰对RLR介导的抗病毒天然免疫反应具有重要调控作用,成为许多病毒逃逸机体防御系统的主要分子机制。并且最近研究发现了一个新的RLR信号通路中抗病毒免疫分子STING（也称为MITA/MPYS/ERIS）,为揭示复杂的抗病毒天然免疫反应提供了新思路。     

基因转染的pH敏感脂质体的最优处方和制备工艺的研究

目的　寻找用于基因转染的pH敏感脂质体的最佳处方和制备工艺。方法　采用正交设计法 ,考虑制备的pH值、组成摩尔比、制备方法三因素 ;即 1个四水平因素和 2个二水平因素混合状态。选用L16(4 1·2 12 )正交设计表安排试验 ,各水平组合条件下 ,通过基因转染实验 ,以基因转染荧光测定值作为观测指标 ,实验重复 4次。结果　在基因与脂质体重量比为 (1∶8)时 ,组成大豆磷脂与DC 胆固醇摩尔比为 (6∶4)和在超声法制备的特定条件下 ,pH5 .4与pH7.4基因转染荧光测定值之间差别非常显著 ;均值都较大 ,但是以 pH5 .4时基因转染荧光测定值均值最大。 结论　基因转染荧光测定值最高的脂质体为在 pH5 .4、组成大豆磷脂与DC 胆固醇摩尔比为 (6∶4)时采用超声法制备的脂质体。     

HCV脱氧核酶在表达荧光素酶HepG2细胞中的活性

目的　对丙型肝炎病毒 (HepatitisCvirus ,HCV) 5′ 非编码区 ( 5′ Noncodingregion ,5′ NCR)靶向性脱氧核酶 (De oxyribozymes ,DRz)在靶基因调控性荧光素酶表达HepG2细胞中的活性进行评价。方法　根据HCV 5′ NCR中符合 5′…Y↓R… 3′(Y =A/G ,R =U/C)特征的位点及 5′ NCR的二级结构选择靶位 ,采用 10 2 3DRz基序 ,设计并合成HCV靶向性脱氧核酶DRz 2 3 2、DRz 12 7、DRz 84、DRz1以及两端被硫代修饰的DRz(Phosphorothioatedeoxyribozymes ,TDRz)和活性中心区人工突变的硫代DRz(MutantphosphorothioateDRz ,MDRz)。直接将其加入体外培养的受HCV 5′ NCR调控的表达荧光素酶HepG2细胞 (HepG2 970 6细胞株 )中 ,或用脂质体转染法将其导入靶细胞。用化学发光法检测荧光素酶活性 ,计算抑制率。结果　转染终浓度为 0 5 μmol/L的药物 2 4h后 ,DRz 2 3 2 /TDRz 2 3 2、DRz 12 7/TDRz 12 7、DRz 84/TDRz 84和DRz1/TDRz1的抑制率分别约14 3 %/ 14 9%、5 3 2 %/ 5 0 6%、2 5 6%/ 2 3 8%和 44 7%/ 43 3 %,均高于对应的MRz ,其中DRz 12 7/TDRz 12 7与MRz 12 7( 4 1 2 %)相比抑制率有显著性差别 (P <0 0 5 )。直接将TDRz 12 7或MRz 12 7加入细胞培养体系中被动作用 5h和 2 4h ,抑制率无明显差别 ,     

抗病毒药物研究新领域：病毒感染基因组学

由于病毒基因组编码基因数量少，从病毒中发现药物靶标受到一定限制。最后的研究表明，抑制宿主细胞中某些蛋白的功能可以阻断病毒感染。与病毒基因组相比，人类基因组序列中可能包括更多的病毒繁殖有关的基因。用DNA微阵列技术分析宿主基因表达，是一种从宿主细胞角度发现潜在抗病毒靶标的有效方法。最近报道了有关病毒影响宿主细胞基因表达谱的研究战略，以及通过表达谱分析来发现与病毒复制有关的宿主细胞通路。因此，人类基因组学技术在发现新的抗病毒药物研究中具有重要作用。     

HCV脱氧核酶在荧光素酶表达细胞中活性的初步观察

脱氧核酶 (ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｚｙｍｅ ,ＤＲｚ)是具有生物催化活性的小分子酶性ＤＮＡ(ｃａｔａｌｙｔｉｃＤＮＡ) ,能定点剪切ＲＮＡ分子 ,其活性中心系所谓 10～ 2 3基序 (ｍｏｔｉｆ)。本研究对丙型肝炎病毒 (ＨＣＶ)靶向性ＤＲｚ、硫代修饰的ＤＲｚ (ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅｄｅｏｘｙｒｉｂｏｚｙｍｅｓ,ＴＤＲｚ)和突变硫代ＤＲｚ(ｍｕｔａｎｔｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅＤＲｚ,ＭＤＲｚ)在靶基因调控性荧光素酶表达细胞中的活性进行了初步观察。ＤＲｚ、ＴＤＲｚ、ＭＤＲｚ由上海Ｓａｎｇｏｎ公司合成。ＨｅｐＧ2…     

浅谈急性百草枯中毒时院前干预措施对患者预后的影响分析

目的：探讨急性百草枯中毒时院前干预措施对患者预后的影响分析方法：分析30例急性百草枯中毒患者的资料,分析百草枯中毒时各种院前干预措施对其预后的影响。结果：存活组与死亡组在百草枯的服用量、血浆中百草枯浓度、是否进行院前干预措施（催吐、吸附剂）、呕吐时间、呕吐次数及是否配合治疗等方面具有统计学意义（p<0.05）。结论：院前干预措施（催吐或吸附剂）对提高急性百草枯中毒患者的生存率有重要作用。     

荧光定量PCR技术及其应用

PCR技术是一种体外核酸扩增技术。1986年第1台PCR热循环仪的问世使PCR技术实现了操作自动化。通过PCR技术可对特定基因进行扩增,其主要应用领域是基因检测和临床基因诊断。但是,PCR技术应用于基因诊断还存在许多局限性,主要表现在不能准确定量和易产生假阳性和交叉污染等。由于传统的PCR技术只能进行定性检测,PCR技术已从传统的定性检测发展为新型的定量分析。定量PCR技术(QPCR)是PCR技术的革命性进展,它可以定量分析DNA或RNA样本的拷贝数,准确检测出样品中的基因数目,在临床实践中有着重要的意义和应用前景。通过定量PER技术能定量分析病原微生物感染的严重程度和评价药物疗效,对传染病诊断,选择药物、确定药量和疗程等有着重要指导作用。     

抗流感病毒药物的研究进展

流感是严重危害人类健康的急性病毒性呼吸道传染病。由于流感病毒抗原变异，常规疫苗目前尚不能有效预防流感暴发与流行，因此抗流感病毒药物研究在流感治疗中具有重要意义。已应用和正在研究的抗流感病毒药物有金刚烷胺类药物、流感病毒神经氨酸苷酶抑制剂、流感病毒受体阻断剂和抗流感病毒反义寡核苷酸等。金刚烷胺和金刚乙胺是常用临床治疗药物，但对Ｂ型流感无效，易产生耐药性并具有神经毒性；流感病毒神经氨酸苷酶抑制剂研究已     

脱氧核酶对丙型肝炎病毒RNA的剪切活性

目的 观察丙型肝炎病毒(HCV)RNA特异性脱氧核酶的体外剪切活性,探讨其用于抗病毒基因调控的可能性。 方法 以HCV 5’-非编码区及部分C区(5’-NCR-C)中两个具有5’…A ↓ U…3’特征的序列为靶位,以5’GGCTAGCTACAACGA3‘为活性中心,设计并合成两端经硫代修饰的脱氧核酶(TDRz),即TDRz-127和TDRz1。用Nar 1将质粒pHCV-neo完全线性化后,以之为模板体外转录获取HCV 5’-NCR-C;用碱性磷酸酶去除其5’端磷酸,再用T4聚核苷酸激酶和γ-32P-ATP进行5’端放射陛标记。在pH7.5、Mg2 10 mmol/L等条件下,将两种TDRz分别(5μmol/L)或共同(各2.5μmol/L)与底物RNA(200 nmol/L)混合,经变性、复性后于37℃孵育,分别于不同的时间点取出等份终止反应。以8％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和放射自显影分离、显示剪切产物,在凝胶成像分析仪上分析各条带光密度值并计算剪切百分率。 结果 在所设常用反应条件下于37℃孵育15、30、45、60、75、90min后,TDRz-127的剪切百分率分别达8.3％、16.1％、24.3％、26.2％、29.4％和31.1％,TDRzl的剪切百分率分别达7.4％,13.0％、15.6％、18.7％、19.4％和20.3％,两者同时剪切时的百分率约15.1％、29.6％、37.8％、39.1％、41.5％、42.6％。结论 TDRz-127和TDRzl对HCV 5’-NCR-C的剪切百分率随时