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鼠抗人TCR/CD3单克隆抗体的制备及其初步应用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的应用B淋巴细胞杂交瘤技术,制备鼠抗人CD3单克隆抗体,并用于T淋巴细胞亚类检测。方法以本室纯化的CD3蛋白免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,成功地获得1株抗人CD3单克隆抗体。经间接ELISA测定,杂交瘤细胞培养腹水的抗体效价。结合SDS-PAGE实验考察单克隆抗体对CD3促T淋巴细胞增殖活性的作用。结果杂交瘤细胞培养腹水的抗体含量为20 mg/mL,效价为10-7,并对T淋巴细胞有促增殖活性,检测正常人外周血阳性T细胞百分率为(73±7)%。结论制备的抗人CD3单克隆抗体具备较高的纯度和活性,可用于T细胞亚类的检测。 相似文献
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<正> 冠心病普查时,在进行心电图运动试验检查中,经常遇到阳性结果中以40岁左右的为多,而且女多于男,这是不符合冠心病的发病规律。为了提高对假阳性的识别,我们对30例异常心电图及150例心电图运动试验阳性加作心得安试验。材料及方法:全部病例系普查时发现的30例异常心电图(多为ⅡⅢavF的ST段下降T波异常)及150例心电图运动试验阳性85例, 相似文献
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目的:探讨建立高表达重组Ret蛋白的B16细胞株的方法,为Ret抗原的免疫原性研究提供靶细胞。方法:通过常规分子克隆的方法,构建Fxyd3-Ret嵌合蛋白的真核表达质粒pIRES-rFxyd3-His-Ret-neo2;将该质粒转染293细胞以验证构建质粒的可行性;将该质粒转染B16细胞,通过筛选获得Fxyd3-Ret蛋白高表达的阳性细胞株。结果:PCR和酶切验证pIRES-rFxyd3-His-Ret-neo2的产物片段大小符合预期,Western blot对转染pIRES-rFxyd3-His-Ret-neo2质粒的细胞进行检测,发现在转染细胞内有目标蛋白高表达。结论:成功构建了pIRES-rFxyd3-His-Ret-neo2真核转染质粒;成功建立了Ret蛋白高表达的B16细胞株。 相似文献
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姜黄素对人肝癌细胞Sk-hep-1抗癌作用的研究 总被引:5,自引:0,他引:5
目的:研究姜黄素对人肝癌细胞Sk-hep-1体外抗癌作用,探讨其抗癌作用的分子机制.方法:应用MTT法、DAPI核染色法和细胞周期分析法,检测姜黄素对Sk-hep-1细胞生长和凋亡的影响,并通过RT-PCR方法检测姜黄素对Sk-hep-1细胞抗凋亡基因(Survivin和Bcl-xL)和耐药基因(DRG2和MDR1)mRNA表达的影响.结果:姜黄素抑制Sk-hep-1细胞增殖呈量效关系.姜黄素处理组肝癌细胞Sk-hep-1,HepG2和Hep3B细胞发生不同程度的凋亡,正常肝细胞Chang's liver无明显凋亡.姜黄素处理组Sk-hep-1细胞周期发生变化,G_0/G_1或G_2/M期细胞比例增多.姜黄素处理组Sk-hep-1细胞耐药基因MDR1 mRNA水平显著下降,而抗凋亡基因的表达无明显变化.结论:姜黄素能够抑制Sk-hep-1细胞增殖,并诱导其凋亡,推测可能是通过下调MDR1 mRNA的表达而起作用. 相似文献
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目的:构建人基质细胞衍生因子(SDF—1)C末端a螺旋结构域缺失及嵌合内质网定位片段的SDF-1α/54/KDEL重组真核表达载体,并考察其对Molt-4细胞的影响。方法:用PCR法扩增SDF-1α/54并将其亚克隆至真核表达质粒pcDNA3.1构建成真核重组表达载体pcDNA3.1/SDF1a/54/KDEI。。脂质体法转染Cos-7细胞后用Western blot检测SDF-1α/54/KDEL的表达。电穿孔法瞬时转染Molt-4细胞,并用流式细胞仪检测CXCR4含量以及其对细胞趋化性的影响。结果:经DNA测序验证目的片段插入方向和碱基组成顺序均准确无误,Western blot证实融合蛋白能在Cos-7细胞表达。SDF-1α/54/KDEL可以显著降低胞膜表面CXCR4表达量并抑制细胞的趋化作用。结论:SDF-1α/54/KDEI,可从胞内抑制Molt-4细胞CXCR4的表达,C末端α螺旋结构域的缺失并不影响其抑制作用,推测其是决定细胞趋化作用的主要结构域。 相似文献
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目的 建立高效、简便的方法对蜜炙黄芪黄酮和皂苷部位进行分离,并探究二者对NO分泌水平的影响.方法 采用Poly-Sery HLB固相萃取(Poly-Sery HLB SPE)法对蜜炙黄芪醇提物中的黄酮与皂苷部位进行分离,以UPLC/Q-TOF-MS对分离所得蜜炙黄芪黄酮和皂苷部位进行定性定量分析.通过脂多糖体外诱导小鼠RAW264.7细胞建立炎症模型,采用MTT法检测蜜炙黄芪黄酮和皂苷部位的细胞毒性作用,采用Griess法检测蜜炙黄芪黄酮和皂苷部位作用后炎症细胞内NO的表达水平. 结果 Poly-Sery HLB SPE能很好地富集与分离蜜炙黄芪黄酮和皂苷部位,使得二者相对质量分数达到96.59%、95.06%.蜜炙黄芪黄酮和皂苷部位对RAW264.7细胞NO分泌释放均具有显著的抑制作用,炎症模型组的NO释放量为5.28 μmol/L,蜜炙黄芪黄酮和皂苷部位给药组的NO释放量分别为2.31 μmol/L与2.01 μmol/L. 结论 Poly-Sery HLB SPE法能高效分离蜜炙黄芪黄酮和皂苷部位;蜜炙黄芪黄酮和皂苷部位均能有效抑制炎症模型细胞NO的释放,推测具有抗感染免疫活性. 相似文献
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摘要:目的:采用HPLC梯度洗脱法同时测定得生胶囊中氧化芍药苷、芍药苷、柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、洋川芎内酯H、洋川芎内酯I、洋川芎内酯A和藁本内酯含量,建立得生胶囊多指标成分定量控制模式,并采用化学计量学方法对不同厂家得生胶囊质量进行综合评价。方法:采用Agilent Eclipse XDB C18色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),柱温:30℃;以乙腈-0.1%磷酸为流动相,体积流量:1.0 ml·min-1;检测波长分别为230 nm(检测氧化芍药苷和芍药苷)、210 nm(检测柴胡皂苷a和柴胡皂苷d)和280 nm(检测洋川芎内酯H、洋川芎内酯I、洋川芎内酯A和藁本内酯);采用聚类分析和主成分分析方法对8种指标成分定量测定结果进行统计分析,评价不同厂家得生胶囊质量的差异性。结果:氧化芍药苷、芍药苷、柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、洋川芎内酯H、洋川芎内酯I、洋川芎内酯A和藁本内酯的线性范围分别为1.47~36.75μg·ml-1,14.26~356.50μg·ml-1,1.28~32.00μg·ml-1,0.97~24.25μg·ml-1,0.54~13.50μg·ml-1,0.86~21.50μg·ml-1,2.65~66.25μg·ml-1,3.43~85.75μg·ml-1;平均加样回收率分别为98.65%,100.06%,96.90%,98.31%,97.66%,97.89%,99.76%和99.16%,RSD分别为0.90%,0.64%,1.12%,1.63%,1.29%,1.57%,0.84%,0.98%;聚类分析和主成分分析结果显示,10批得生胶囊样品分为3类,主成分1~3是影响得生胶囊质量评价的主要因子,同一厂家得生胶囊样品一致性较好,不同厂家样品一致性较差。结论:所建立的方法操作便捷、结果准确、专属性强,可有效控制得生胶囊的产品质量。 相似文献
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目的研究小鼠胚胎干细胞药物代谢酶CYP3a11基因的敲除。方法根据已知小鼠的CYP3a11基因组DNA序列,从129品系小鼠E14胚胎干细胞基因组DNA中,通过PCR的方法分别获得用于构建基因敲除载体的0.65kb的5'-短臂(short arm,SA)和(3.3+4)kb的3'-长臂(long arm,LA)片段,通过常规分子克隆技术,构建完成针对小鼠药物代谢酶CYP3a11基因的替代型基因敲除载体pCR-CYP3a11_KO,并对载体进行酶切鉴定。将线性化的pCR-CYP3a11_KO载体通过电穿孔技术转入E14胚胎干细胞。G418药物筛选4~6周直至克隆形成,用PCR和Southern blot技术对筛选出的细胞克隆进行鉴定。结果酶切结果表明基因敲除载体pCR-CYP3a11_KO DNA序列正确;转染后的E14胚胎干细胞经过G418筛选后,存活的细胞可形成单克隆集落,经过PCR和Southern blot技术鉴定,其中有5个单克隆被证实CYP3a11基因已被敲除。结论成功构建了小鼠CYP3a11基因敲除载体,并在小鼠E14胚胎干细胞的CYP3a11基因敲除中获得阳性克隆。 相似文献
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构建人基质细胞衍生因子(SDF-1)突变体SDF-1α/54/KDEL重组真核表达质粒,并考察其对T细胞性白血病细胞株Molt-4细胞表面受体CXCR4表达的影响,为尝试表型敲除肿瘤细胞CXCR4以抑制肿瘤的转移提供理论和实验依据.以SDF-WT-Gly×4-Dec/PET30a( )质粒为模板,用PCR法扩增出SDF-1α/54并将其亚克隆至真核表达质粒pEGFP-C3构建成真核表达载体pEGFP-C3/SDF-1α/54/KDEL.经酶切及测序验证后,脂质体介导转染入COS-7细胞,通过Western blot检测SDF-1α/54/KDEL的表达.电穿孔法将重组载体瞬时转染CXCR4高表达的Molt-4,并用流式细胞仪检测CXCR4含量的变化.DNA测序证明:读码框完全正确,重组真核表达载体含有SDF-1α/54基因和编码4肽KDEL的基因,Western blot证明融合蛋白能在COS-7细胞表达.电穿孔转染Molt-4细胞后发现,SDF-1α/54/KDEL可以显著降低胞膜表面CXCR4表达量.由此提示: KDEL介导的SDF-1α/54对Molt-4细胞CXCR4具有表型敲除作用,且此效应不受SDF-1α C端α螺旋缺失的影响. 相似文献