产N-demethyl ECO-0501工程菌的构建

ECO-0501是一种在东方拟无枝酸菌(Amycolatopsis orientalis)中分离出的一种新型抗菌化合物.N-demethyl ECO-0501作为ECO-0501生物合成途径的小组分在抗菌活性方面优于ECO-0501.ECO-ORF5(ABM47006.1)编码N-甲基转移酶,负责ECO-0501胍基的甲基化修饰.本研究利用PCR-targeting的方法敲除了产生菌东方拟无枝酸菌HCCB10162的ECO-ORF5,得到了一株高产去甲基ECO-0501的突变株A.orientalis HCCB10370,其产量是东方拟无枝酸菌HCCB10162的3.6倍.     

东方拟无枝酸菌中vcm14基因的敲除对万古霉素合成的影响

PCR-targeting是一种用于敲除或阻断放线菌染色体上某一基因的快速高效的方法 .本研究利用该方法 在大肠埃希菌中构建破坏粘粒cLYLH17(△vcm14::apr),通过结合转移首次敲除东方拟无枝酸菌HCCB10007中万古霉素生物合成基因簇中推测的haloperoxidase基因--vcm14,得到一株双交换阻断突变株A.orientalis dvcm14(Avcm14::apr).该菌不产生万古霉素及其类似物,证实vcm14基因的编码蛋白不是haloperoxidase,且该蛋白不参与万古霉素的卤化反应,可能是万古霉素生物合成途径中的一个关键酶.本研究为阐明万古霉素生物合成途径中的卤化过程提供了有益线索.     

东方拟无枝酸菌基因工程菌产新糖肽类化合物的发酵条件优化

目的 对产新糖肽类化合物的基因工程菌东方拟无枝酸菌HCCB10167的发酵条件进行优化.方法 考察了该工程菌的遗传稳定性,对发酵的主要影响因子接种量、初始pH值、温度、摇瓶装量、转速等进行了单因素试验,确定了最佳培养条件,并用均匀设计试验对其发酵培养基进行了优化.结果 该工程菌遗传稳定,优化后的产量较起始条件提高1.8倍.结论 工程菌保持了万古霉素类抗生素的生产能力,具有规模化生产的潜能.     

东方拟无枝酸菌发酵液小组分的分离鉴定

本文首次从万古霉素产生菌东方拟无枝酸菌的发酵液中分离纯化出三个微量组分LYV091x01、LYV091x02、LYV091x03。考察了摇瓶装量的影响,确定了适合LYV091x01、LYV091x02富集的摇瓶发酵条件。LYV091x03则通过万古霉素水解来富集提取。经筛选获得一种具有特异性吸附作用的弱极性大孔吸附树脂AB-8,结合中压液相色谱及高效液相色谱技术进一步纯化鉴定得到一新结构的异黄酮苷,并对其理化性质及体外活性进行丁初步研究。     

东方拟无枝酸菌HCCB10007中vcm8基因的敲除及无氯万古霉素产生菌的构建

目的:利用基因敲除的方法构建无氯万古霉素产生菌。方法:利用PCR-Targeting的方法获得破坏粘粒cLYLH15(Δvcm8::apr),通过接合转移敲除东方拟无枝酸菌HCCB10007中万古霉素生物合成基因簇中的卤化酶基因vcm8。结果:筛选得到1株突变子A.orientalisdvcm8(Δvcm8::apr)。结论:该菌不再代谢产生万古霉素,转而合成无氯万古霉素。经传代试验证明该菌株遗传稳定,可作为无氯万古霉素产生菌。     

放线菌1161代谢产物分离纯化及其菌种鉴定

本文对放线菌1161粗提物进行抗菌活性检测,并利用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)分析该菌株代谢产物,然后对其代谢产物1161-S8和1161-S9进行分离,最后对该菌株进行分类鉴定。结果表明,该菌株代谢产物对Bacillus subtilis、Sarcina lutea、Staphylococcus aureus、methicillin-resistant Staphylo-coccus aureus(MRSA)、vancomycin-resistant Enterococcus faecalis(VRE)均显示出较强的抗菌活性;UPLC-MS/MS分析其粗提物显示可能为结构相似的一系列的化合物,通过质谱氢谱和碳谱数据判断1161-S8和1161-S9分别为阿扎霉素F4和阿扎霉素F5。同时结合该菌株培养特性、生理生化特性、16SrRNA序列比对与系统进化分析,将其初步鉴定为Streptomyces malaysiensis,是阿扎霉素新的产生菌。     

氯离子对东方拟无枝酸菌发酵产物的影响

本文研究了氯离子对东方拟无枝酸菌发酵产物的影响。在常规培养条件下，改变发酵培养基中氯离子存在形式或是添加抑氯剂和溴化钠，都发现了新组分无氯万古霉素（didechlorovancomycin，DDCV）的产生。通过对培养基中添加抑氯剂的量的改变，发现加入0．005％2-巯基苯骈噻唑和0．1％溴化钠时万古霉素产量降至对照的6％，而DDCV的相对含量达到62％。     

金属纳米粒子与抗生素联用抗耐药菌

随着抗生素的广泛应用,细菌的耐药问题日益严重,迫切需要开发出新的抗菌药物或者新的治疗方案。金属纳米粒子具有较强的抗菌活性和靶点非特异性,已成为克服细菌耐药性的有效解决途径。但其细胞毒性限制了其临床应用,而将金属纳米粒子与抗生素联用可降低其毒性,且对抗生素的抗菌活性具有增效作用。本文将从金属纳米材料,及其与抗生素联用抗耐药菌活性及其协同机制等方面进行综述。     

ECO-0501产生菌的发酵条件优化

优化东方拟无枝酸菌(Amycolatopsis orientalis)dA9发酵制备ECO-0501的工艺条件,包括种龄、初始pH、培养温度、碳氮源种类等,并通过正交试验优化发酵培养基的组成。在30℃、种龄3d、接种量8%、发酵4d的条件下,摇瓶发酵单位达115mg/L,比优化前提高了约60%。     

糖肽类抗生素N-甲基无糖万古霉素的分离、纯化和结构鉴定

目的 利用含N-甲基转移酶的粗酶液对无糖万古霉素进行催化,从得到的反应液中分离、纯化N-甲基无糖万古霉素,并进行结构鉴定。方法 利用大孔树脂吸附、中压反相制备色谱等方法进行分离纯化。利用光谱分析,进行结构解析。结果 分离到一个糖肽类化合物N-甲基无糖万古霉素。结论