Pim-3对抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的研究

目的研究原癌基因Pim-3对心肌细胞急性缺氧/复氧(A/R)损伤的保护作用。方法采用原代培养新生大鼠的心肌细胞A/R损伤和缺氧预适应(APC)保护模型,将已经构建好的pEGFP-N2/Pim-3质粒导入原代培养的乳鼠心肌细胞中,实验结束后测定Pim-3mRNA及蛋白表达水平(RT-PCR、Western blot法)的改变,同时检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、四唑盐(MTT)比色试验测定细胞存活率、TUNEL法检测细胞凋亡。结果RT-PCR和Western blot结果显示,Pim-3在正常组几乎不表达,A/R组表达明显升高,缺氧预适应(APC)+A/R组表达则进一步升高;转染pEGFP-N2/Pim-3质粒后24h,荧光倒置显微镜显示转染效率达30%;在A/R损伤后,Pim-3基因转染组较未转染组的心肌细胞LDH值明显降低,细胞存活率则明显升高,心肌细胞的凋亡指数明显下降。结论在细胞水平,Pim-3参与心肌APC保护作用,导入外源性的Pim-3基因能对抗急性A/R损伤。     

细胞色素C在Pim-3抗心肌急性损伤中的作用

目的:探讨原癌基因Pim-3对抗心肌急性损伤的作用是否与线粒体信号转导途径介导的细胞色素C(Cyt C)的释放有关.方法:采用大鼠乳鼠心肌细胞,随机分为4组,对照组;缺氧复氧(A/R)组,建立A/R损伤模型;pcDNA3.1+A/R组,将pcDNA3.1转染入心肌细胞,24 h后进行A/R损伤;pcDNA3.1/Pim-3+A/R组,将Pim-3重组质粒(pcDNA3.1/Pim-3)转染入心肌细胞,24 h后进行A/R损伤.实验结束后,检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH) 活性,四唑盐(MTT)比色试验测定细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡,蛋白印迹检测Pim-3 蛋白表达水平,线粒体、胞浆Cyt C动态变化和caspase-3活性.结果:与对照组比较,A/R组细胞存活率明显下降,LDH值和凋亡指数明显升高,差异有统计学意义(P ＜ 0.01);与A/R组比较,pcDNA3.1/Pim-3+A/R组细胞存活率明显升高,LDH值和凋亡指数明显下降,并且Cyt C由线粒体向胞浆的释放明显被抑制,同时caspase-3活性也下降,差异有统计学意义(P ＜ 0.01).结论:Pim-3对抗心肌急性损伤的机制是通过抑制Cyt C易位释放入胞浆激活caspase-3而致.     

支原体肺炎合并急性胰腺炎患儿的药学监护

目的探讨临床药师参与治疗儿童支原体肺炎合并急性胰腺炎(AP)的作用。方法全程跟踪1例支原体感染合并AP患儿的治疗过程,从药品用法用量的选择,药品不良反应的预防、药物的相互作用、饮食管理及心理支持等方面为患儿提供药学服务,制定个体化用药方案。结果经过医生、护士、药师共同努力,患儿的病情逐渐好转,最终好转出院。结论临床药师在全程参与患儿的治疗过程中,可协助医师合理选药,做好患儿家属的用药教育,提供合理的饮食建议,同时还要学会读懂患儿及家属的心理变化。     

p38 MAPK- Pim-3通路可能介导预处理对抗心肌细胞缺氧/复氧损伤

目的： 研究MAPK通路在原癌基因Pim-3抗心肌急性缺氧复氧损伤中的作用。方法：采用原代培养新生大鼠的心肌细胞,随机分为4组：正常对照组（control）、缺氧复氧组(A/R)、缺氧预适应组(APC+A/R)、阻断剂组。在缺氧预处理前分别用终浓度为10 μmol/L SB203850(p38 MAPK阻断剂)、U0126（ERK1/2阻断剂）、SP600125（SAPK/JNK阻断剂）与细胞孵育30 min。实验结束后测定MAPKs通路中ERK1/2、JNK、p38 MAPK 磷酸化蛋白表达水平及Pim-3蛋白的表达水平,同时检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH) 活性、四唑盐（MTT）比色试验测定细胞存活率、TUNEL法检测细胞凋亡。结果： SB203850、U0126、SP600125能分别取消由APC或A/R所诱导ERK1/2、JNK、p38 MAPK的磷酸化水平的升高;由APC所诱导的Pim-3表达的升高在p38 MAPK通路被阻断后明显下调(P<0.01),并且心肌细胞LDH值升高,细胞存活率则下降,心肌细胞的凋亡指数升高。结论： p38 MAPK的激活可上调原癌基因Pim-3的表达,从而可能对心肌细胞起到保护作用。