原发性高血压和动脉硬化性脑梗死及腔隙性脑梗死患者的HLA-DQA1遗传易感性

目的　探讨原发性高血压(EH)、动脉粥样硬化性血栓性脑梗死(ABI)及腔隙性脑梗死(LS)患者HLA-DQA1位点的基因分型及其遗传易感性。方法　采用PCR-SSP方法对EH、ABI及LS共155例患者和正常对照64人进行HLA-DQA1位点的基因分型和遗传易感性分析。结果　EH、ABI及LS组的HLA-DQA1*0301基因频率均明显高于正常对照组,分别为33.6538对17.9688,36.5854对17.9688,33.0645对17.9688（P<0.01）,而HLA-DQA1*0103基因频率却明显低于正常对照组(P<0.05或P<0.01)。结论　HLA-DQA1*0301等位基因可能与EH、ABI及LS的遗传易感性相关,而HLA-DQA1*0103等位基因可能与其保护性相关。     

新结构组蛋白去乙酰化酶抑制剂筛选及抗肿瘤活性初步观察

组蛋白的乙酰化调节是基因表达调控的一种重要机制，它参与了机体病理、生理水平的多方面调节。组蛋白乙酰转移酶和组蛋白去乙酰化酶活性共同决定了组蛋白的乙酰化水平。组蛋白去乙酰化酶抑制剂可以提高组蛋白的乙酰化水平，从而调节某些特定基因的表达。我们建立了非同位素法高通量筛选组蛋白去乙酰化酶抑制剂的模型，筛选了约二百种化合物，发现三种能够抑制组蛋白去乙酰化酶的化合物。实验证明，它们能在细胞水平促进组蛋白的乙酰化，并对体外培养的多种肿瘤细胞具有明显的杀伤作用。初步体内实验表明，化合物H9能抑制小鼠体内肿瘤的发生、发展。新结构的组蛋白去乙酰化酶抑制剂可能具有新型抗肿瘤药物的应用前景。     

整合素连接激酶与缺氧状态下VEGF表达的实验研究

目的探讨缺氧状态下整合素连接激酶(ILK)的表达是否增高以及这种增高与血管内皮生长因子(VEGF)的表达上调是否相关。方法将恒河猴视网膜脉络膜血管内皮细胞(RF/6A)置于94%N2、5%CO2和1%O2的低氧环境,检测0、1、2、3、4hILK,HIF-1α和VEGF的mRNA及蛋白表达水平,进一步用LY294002抑制ILK的活性或RNA干扰抑制ILK的表达后再次检测缺氧4h上述3种因子的表达情况。结果在缺氧0hILK、HIF-1α和VEGF的mRNA及蛋白表达均较低,而缺氧1～4hILK、HIF-1α和VEGF的mRNA及蛋白表达均明显增高,但这种增高都会因为ILK的表达或活性受到抑制而被抑制。结论缺氧状态下在RF/6A细胞中ILK的表达增高,并且ILK的表达增高也会使HIF-1α和VEGF表达上调,说明ILK参与缺氧状态下RF/6A细胞VEGF的表达。     

重组腺伴随病毒载体介导Kringle5基因对SD大鼠视网膜神经细胞及血管内皮细胞的影响

目的:研究腺伴随病毒载体介导Kringle5基因对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUC)及视网膜神经细胞影响作用.方法:亚克隆构建pSNAV-Kringle5-gfp 载体,腺伴随病毒包装形成rAAV-Kringle5-gfp;HUC培养及SD大鼠视网膜神经细胞培养;按设计分为试验组、阴性对照组和空白对照组;聚合酶链反应(PCR),MTT法对各组进行细胞活力测定;荧光显微镜照相.结果:腺伴随病毒载体介导 Kringle5基因产生Kringle5物质对HUC有抑制作用,实验组与对照组比较P＜0.01,实验组与空白对照组比较P＞0.05:腺伴随病毒载体介导Kringle5基因产生Kringle5物质对SD大鼠视网膜神经细胞实验组和空白对照组没有影响,实验组与对照组及实验组与空白对照组比较P＞0.05.结论:腺伴随病毒载体介导Kringle5基因能够对新生血管有抑制作用而对视网膜神经细胞无不良影响作用.     

达肝素对载脂蛋白E基因缺陷小鼠肾动脉粥样硬化病变的影响

目的在动脉粥样硬化模型鼠中,观察达肝素对肾动脉粥样硬化病变进展及对植物血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达影响,探讨达肝素可能的抗动脉粥样硬化机制。方法以6周龄雄性C57BL/6J小鼠24只为对照,随机分为普通饲料组及高脂饲料组。雄性6周龄载脂蛋白E基因缺陷(Apo E-/-)小鼠36只,均予高脂饲料喂养至12周龄,随机分为模型组、低剂量肝素组[达肝素钠100 IU/(kg.d)]、高剂量肝素组[达肝素钠200 IU/(kg.d)],皮下注射连续4周(16周龄)后各组随机取6只处死。分离肾动脉,制成石蜡切片行HE及免疫组织化学染色,观察斑块情况及LOX-1蛋白的表达。用RT-PCR方法,检测肾动脉LOX-1 mRNA及VEGF mRNA的表达。用Western Blot分析法,检测肾动脉中LOX-1蛋白的表达。剩余小鼠继续原方案喂养4周(20周龄)后处死,肾动脉石蜡切片行HE染色,观察斑块情况。结果 Apo E-/-模型组在16周龄时出现轻度肾动脉粥样硬化。低剂量及高剂量达肝素均抑制肾动脉粥样硬化的形成(P<0.05)。Apo E-/-模型组LOX-1 mRNA、VEGF mRNA及LOX-1蛋白的表达水平较C57BL/6J普通饲料组的表达水平明显升高(P<0.05)。低剂量及高剂量达肝素治疗后,LOX-1 mRNA、VEGF mRNA及LOX-1蛋白的表达水平表达较模型组明显下降(P<0.05)。结论达肝素钠可能通过抑制LOX-1蛋白及VEGF表达的途径,抑制肾动脉粥样硬化的进展。     

凋亡抑制因子Survivin在肝癌组织中的表达

Survivin是迄今已鉴定的凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein,IAP）家族中分子量最小的分子,在人类多种肿瘤组织中高表达,参与肿瘤的发生发展,与肿瘤的预后密切相关,而在正常终末分化的成年组织或细胞中不表达。我们应用RT-PCR及Western blot方法对肝癌组织中survivin表达情况进行了研究。     

HLA-DQA1*0301及*0103与腔隙性脑梗死和原发性高血压的遗传易感性研究

目的：针对腔隙性脑梗死（lacunar stroke,LS）和原发性高血压（essential hypertension,EH)及多基因致病特点,进行HLA－DQA1位点的基因分型,分析其遗传易感性。方法：采用PCR－SSP方法对62例LS、52例EH和64例正常对照进行HLA－DQA1位点的基因分型。结果：①HLA－DQA1*0301等位基因与LS及EH呈显著正相关。②HLA－DQA1＊0103等位基因与LS及EH呈显著负相关。结论：HLA－DQA1*0301等位基因与LS及EH的发病有一定的关联,而HLA－DQA1＊0103等位基因可能是LS及EH的保护性基因。     

肝缺血再灌注后肺损伤机制及乌司他丁保护作用的实验研究

目的 研究肝缺血再灌注后肺损伤的机制以及乌司他丁的保护作用.方法 新西兰白兔24只,随机分为3组,每组8只.假手术组：麻醉后分离肝门,游离肝动静脉,关腹,120 min后处死.缺血再灌注组：夹闭左侧叶、左中央叶、右中央叶的血管,缺血60 min后再灌注60 min后立即处死.乌司它丁组同缺血再灌注组制作部分肝缺血再灌注模型,但于阻断前15 min注射乌司它丁2万U/kg.测定阻断前（T0）、阻断50min（T1）、再灌注10min（T2）、再灌注60min（T3）四个时点动脉血压、动脉血血气分析和TNF-α、IL-8水平.肝肺病理切片光镜观察、肺干湿重比、肺灌洗液蛋白含量及磷脂水平、肺组织丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活力、髓过氧化物酶（MPO）活力、肺组织SP-A mRNA及SP-A蛋白表达水平.结果 病理结果显示,乌司它丁组缺血再灌注肺损害较轻.缺血再灌注组和乌司它丁组pH阻断后降低,TNF-α和IL-8升高,TNF-α、IL-8水平、干湿重比、MDA、MPO高于假手术组,灌洗液蛋白浓度、PC、PG含量、SOD、SP-A蛋白表达低于假手术组（P＜0.05）,而乌司它丁组各项结果要好于缺血再灌注组（P＜0.05）.结论 肝缺血再灌注会导致肺损伤,缺血前给予乌司它丁可以减轻肺损伤.     

siRNA蛋白抑制对LNCaP细胞增殖的影响作用

目的筛选针对α甲基-辅酶A消旋酶(AMACR)的小分子干扰RNA(siRNA),探讨该蛋白抑制后对前列腺癌细胞系LNCaP增殖的影响。方法设计并合成3对针对AMACR的siRNA序列,通过siPORTTMNeoFXTM转染LNCaP细胞;RT-PCR检测siRNA作用后AMACRmRNA的表达,Westernblot检测AMACR蛋白表达,CCK-8检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡。结果通过测定条带灰度值并分析,编号21030的siRNA可有效抑制AMACR表达约77%,有效抑制AM-ACRmRNA水平约60%,编号为113442和21203的siRNA均不能有效抑制AMACR表达。转染编号21030的siRNA可抑制LNCaP细胞增殖,但未发现明显的细胞凋亡。结论编号21030的siRNA可特异有效下调LNCaPAMACR基因表达,该蛋白抑制后可抑制LNCaP细胞增殖,为前列腺癌基因治疗提供新的思路。     

N-取代苯甲酰胺类衍生物的合成与抗肿瘤活性

为寻找新型具有抗肿瘤活性的组蛋白去乙酰化酶 (HDACs) 抑制剂, 合成了HDACs抑制剂MS-275, 并以其为先导结构设计合成了11个N-取代苯甲酰胺类目标化合物, 测定体外抗肿瘤及抑酶活性。MS-275及目标化合物的结构经¹H NMR及HR-MS分析确证。体外抑HDAC活性研究表明, 化合物9d的抑酶活性与阳性对照药MS-275相当, 值得进一步深入研究; 化合物5c、5d和9c表现出明显量效关系, 具有一定抑酶活性。在对各细胞株的体外抗增殖作用研究中, 发现除9e外, 其他10个化合物显示了对Hut 78的不同抑制活性, 并表现出对Hut 78细胞株具有一定的选择性。