四神丸挥发油对慢性溃疡性结肠炎小鼠TLR/MyD88信号通路的调控作用

目的 从Toll样受体（TLR）/髓样分化因子88（MyD88）信号通路,探讨四神丸挥发油有效治疗慢性溃疡性结肠炎的可能机制。方法 将BALB/c小鼠随机分成正常组,模型组,四神丸挥发油组,二神丸挥发油组,五味子散挥发油组和美沙拉嗪组,采用葡聚糖硫酸钠（DSS）建立慢性溃疡性结肠炎小鼠模型,灌胃给药7 d后,通过体质量、结肠质量、结肠质量指数、结肠长度、结肠镜下损伤评分评价其疗效;用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测结肠组织上清液中白细胞介素-4（IL-4）,白细胞介素-10（IL-10）,白细胞介素-17A（IL-17A）,白细胞介素-21（IL-21）和γ干扰素（IFN-γ）水平,同时用蛋白免疫印迹法（Western blot）法检测各组小鼠结肠黏膜中TLR/MyD88信号通路相关蛋白,包括TLR2,MyD88,Ras相关的C3肉毒素底物1（Rac1）,白细胞介素-1受体相关激酶4（IRAK4）,白细胞介素-1受体相关激酶1（IRAK1）,肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）,转化生长因子-β活化激酶1结合蛋白1（TAB1）,转化生长因子-β活化激酶1结合蛋白2（TAB2）,丝裂原活化蛋白激酶激酶6（MKK6）,p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）和环磷腺苷效应元件结合蛋白（CREB）的表达水平。结果 与正常组比较,模型组结肠长度显著降低,结肠质量、结肠质量指数和结肠镜下病理损伤评分均显著升高,IL-10水平显著降低,IL-4,IL-21和IFN-γ水平明显升高（P<0.05,P<0.01）,TLR2,MyD88,Rac1,IRAK4,IRAK1,TRAF6,TAB1,TAB2,MKK6,p38 MAPK和CREB蛋白表达量均显著升高（P<0.01）;与模型组比较,经四神丸挥发油干预后,小鼠结肠长度显著增加,结肠质量、结肠质量指数和结肠镜下病理损伤评分均显著降低,且小鼠结肠组织中IL-10水平明显升高,而IL-4,IL-17A,IL-21和IFN-γ水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,同时小鼠结肠组中TLR2,MyD88,Rac1,IRAK4,IRAK1,TRAF6,TAB1,TAB2,MKK6,p38 MAPK和CREB蛋白表达量均明显下调（P<0.05,P<0.01）。结论 四神丸挥发油能有效改善慢性溃疡性结肠炎的炎性损伤,可能是通过抑制TLR/MyD88信号通路实现的。     

四神丸及其拆方对结肠炎小鼠Tfr/Tfh9/Tfh17细胞水平的影响

探讨四神丸及其拆方二神丸、五味子散对葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate, DSS)诱导的小鼠结肠炎滤泡辅助性T细胞(T follicular helper cells, Tfh)亚群的调控作用及其可能的作用机制。将60只SPF级BALB/c雄性小鼠随机选取10只作为正常组,其余50只采用3%DSS溶液复制结肠炎小鼠模型,造模成功后,随机均分成5组,分别为模型组、四神丸组、二神丸组、五味子散组和美沙拉嗪组。观察各组小鼠体质量、结肠质量、结肠质量指数、结肠长度及单位结肠质量指数等情况;HE染色后进行病理损伤评分;流式细胞术检测小鼠外周血中CD4⁺CXCR5⁺IL-9⁺(Tfh9)、CD4⁺CXCR5⁺IL-17⁺(Tfh17)和CD4⁺CXCR5⁺Foxp3⁺(Tfr)等滤泡辅助性T细胞的分化水平;Western blot法分析结肠组织中STAT/SOCS信号通路相关分子...     

人参皂苷Rg1 对DSS 诱导的溃疡性结肠炎小鼠Treg/Th9 细胞平衡的调控作用

目的探讨人参皂苷Rg1 对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的溃疡性结肠炎小鼠调节性T 细胞（Treg）/辅助性 T 细胞9（Th9）细胞平衡的调控作用。方法将40 只BALB/C 雄性小鼠随机分为正常组、模型组、人参皂苷 Rg1 组（200 mg·kg-1）及美沙拉嗪组（300 mg·kg-1）,每组10 只。除正常组外,其余各组小鼠采用3% DSS 自由 饮水7 d 建立溃疡性结肠炎模型;给药组同时按照上述剂量灌胃给药,每日1 次,连续10 d。观察记录小鼠一 般情况及体质量;测量结肠长度及其质量,计算结肠质量指数;采用HE 染色法进行结肠组织病理学观察,并 进行病理损伤评分;采用ELISA 法检测结肠组织中IL-1β、IL-4、IL-15、IL-17A 表达水平;采用流式细胞术 检测小鼠外周血中CD4+ CD44+ Foxp3+、CD4+ CD44+ IL-9+、CD4+ CD44+ IL-10+、CD4+ CD25+ Foxp3+、CD4+ CD25+ PD-1+ 及CD4+ CD25+ PD-L1+ T 细胞水平。结果与正常组比较,模型组小鼠结肠黏膜充血、水肿,杯 状细胞减少,大量炎症细胞浸润,部分区域溃疡形成;小鼠体质量明显下降、结肠质量明显增加、结肠长度 明显缩短、结肠质量指数及病理评分明显升高（P＜0.01）;小鼠结肠组织中IL-1β、IL-15、IL-17A 表达水平显 著升高（P＜0.01）,IL-4 表达水平显著降低（P＜0.01）;小鼠外周血的CD4+ CD44+ Foxp3+、CD4+ CD25+ Foxp3+、CD4+ CD44+ IL-10+ T 细胞水平均显著降低（P＜0.01）,而CD4+ CD44+ IL-9+、CD4+ CD25+ PD-1+、 CD4+ CD25+ PD-L1+ T 细胞水平显著升高（P＜0.01）。与模型组比较,人参皂苷Rg1 组小鼠结肠黏膜充血、水肿 明显减轻,糜烂修复,炎症细胞浸润明显减少;体质量明显增加、结肠质量明显降低、结肠长度明显延长、 结肠质量指数及病理评分明显降低（P＜0.05）;小鼠结肠组织中IL-1β、IL-15、IL-17A 表达水平明显下降 （P＜0.01）,IL-4 表达水平明显升高（P＜0.05）;小鼠外周血的CD4+ CD44+ Foxp3+、CD4+ CD25+ Foxp3+、CD4+ CD44+ IL-10+ T 细胞水平均显著升高（P＜0.01）,同时CD4+ CD44+ IL-9+、CD4+ CD25+ PD-1+、CD4+ CD25+ PDL1+ T 细胞水平均显著降低（P＜0.05,P＜0.01）。结论人参皂苷Rg1 可能通过调控Treg/Th9 细胞平衡治疗 DSS 诱导的小鼠溃疡性结肠炎。     

补脾益肠丸治疗溃疡性结肠炎的临床研究进展

溃疡性结肠炎是一种慢性非特异性胃肠道炎症性疾病,随着近些年来发病率升高,对其临床研究也与日俱增.临床上有相当一部分患者给与常规西药治疗效果欠佳,且容易复发,近些年临床研究发现,补脾益肠丸或联用补脾益肠丸治疗UC安全有效,且疗效显著,为治疗UC提供更佳的中医药途径.本文将从补脾益肠丸治疗溃疡性结肠炎的临床研究进及作用机制...     

以温阳-能量-免疫轴理论解析四神丸治疗炎症性肠病

在中医经典理论“凡阴阳之要,阳密乃固”“益火之源以消阴翳”及“治未病”等指导下,结合免疫代谢学研究最新热点提出的“温阳-能量-免疫轴”理论,诠释了阳气的功能物质基础、阳虚证的免疫代谢学表征以及“益火之源以消阴翳”的科学内涵,进而为从阳论治未病提供科学依据。在这一理论指导下,具有温脾补肾、涩肠止泻之功的四神丸可通过改善炎症性肠病动物模型能量代谢水平,调节免疫状态平衡,维持免疫耐受,从而有效治疗炎症性肠病,不失为“温阳-能量-免疫轴”理论实际利用的典范。     

左金丸对DSS 诱导溃疡性结肠炎小鼠滤泡辅助性T 细胞的调控作用

目的探讨左金丸对溃疡性结肠炎（UC）小鼠滤泡辅助性T 细胞（Tfh）的调控作用。方法将BALB/c 小 鼠随机均分为正常组、模型组、左金丸组（3 g·kg-1）及美沙拉嗪组（300 mg·kg-1）,每组10 只。除正常组外其余 各组小鼠采用自由饮水的方式给予3%葡聚糖硫酸钠（DSS） 溶液,连续7 d,构建UC 小鼠模型。7 d 后按照相 应剂量灌胃给药,每日1 次,连续给药7 d。每天称小鼠体质量并观察其一般症状;采用流式细胞术检测Tfh 及滤泡调节性T 细胞（Tfr）数量;测定小鼠结肠质量、结肠长度,计算结肠质量指数;采用HE 染色法进行结肠 组织病理学观察;Western Blot 法检测小鼠结肠组织Bax、Bcl-2、Caspase-3 蛋白表达水平。结果与模型组比 较,左金丸组小鼠的结肠质量指数明显降低（P < 0.01）,结肠长度明显恢复（P < 0.01）,结肠组织病理评分明显 降低（P < 0.05）;CD4+CD44+ICOS+、CD4+CD44+IL-17+及CD4+CD44+CXCR5+细胞水平明显下降（P < 0.05,P < 0.01）,CD4+CXCR5+Foxp3+及CD4+CXCR5+Blimp-1+细胞水平均明显升高（P < 0.05）;结肠组织中的Caspase-3、 Bax 蛋白表达明显下调（P < 0.05,P < 0.01）,Bcl-2/Bax 蛋白比值明显升高（P < 0.01）。结论左金丸可能通过 调控Tfh/Tfr 细胞平衡,以及结肠组织的Bax、Bcl-2、Caspase-3 蛋白表达水平,发挥对UC 小鼠的治疗作用。 关键词：左金丸;溃疡性结肠炎;滤泡辅助性T 细胞;滤泡调节性T 细胞;Bax;Bcl-2;Caspase-3;小鼠     

姜黄素对肥胖小鼠溃疡性结肠炎记忆性滤泡性T细胞的调控作用

本研究在明确姜黄素有效治疗肥胖小鼠溃疡性结肠炎的基础上,评价其对结肠炎肥胖小鼠记忆性滤泡性T细胞(memory follicular T cells, mTf)的调控作用。经江西中医药大学实验动物伦理委员会审议同意并批准后,将40只瘦素突变型(ob/ob)雄性小鼠随机分为对照组、对照+姜黄素组、模型组和模型+姜黄素组,每组10只。采用葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate, DSS)诱导模型组和模型+姜黄素组小鼠建立慢性溃疡性结肠炎模型后,对照+姜黄素组和模型+姜黄素组小鼠灌胃给予姜黄素(200 mg·kg^-1·d^-1)。麻醉处死小鼠,观察各组小鼠结肠质量、结肠质量指数、结肠长度等情况; HE染色后进行病理损伤评分;流式细胞术检测小鼠脾脏记忆性滤泡性辅助性T细胞(memory follicular helper T cells, mTfh)和记忆性滤泡性调节性T细胞(memory follicular regulatory T cells, mTfr)细胞亚群水平;酶联免疫吸附法检测结肠组织中白介素-10 (interle...     

补脾益肠丸重塑CD4+T细胞亚群稳态缓解溃疡性结肠炎的机制研究

目的 探究补脾益肠丸(BPYCP)对实验性溃疡性结肠炎(UC)小鼠CD4⁺T细胞亚群的调控作用。方法48只C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为对照组(Control组,10只)、模型组(DSS组,13只)、模型+补脾益肠丸组(DSS+BPYCP组,13只)、模型+5-ASA组(DSS+5-ASA组,12只);采用自由饮用2.5%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液诱导小鼠UC模型,DSS+BPYCP组和DSS+5-ASA组分别采用BPYCP或美沙拉嗪(5-ASA)连续灌胃2周。观察小鼠粪便黏稠度及便血情况,测量结肠长度,结肠称质量并计算结肠质量指数及单位结肠质量指数;苏木素-伊红(HE)染色法观察结肠病理变化,并进行病理损伤评分;流式细胞术检测肠系膜淋巴结中的CD4⁺T细胞亚群水平;酶联免疫吸附试验检测干扰素(INF)-γ、白细胞介素(IL)-4、IL-17A、IL-10及IL-21表达水平;实时荧光定量PCR检测结肠组织T-框蛋白21(T-bet)、GATA结合蛋白3(GATA-3)、维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)、B细胞淋巴瘤-6(Bcl...     

四神丸、二神丸及五味子散对结肠炎小鼠肠道菌群失衡的调控作用

目的 探讨四神丸、二神丸及五味子散对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)小鼠肠道菌群的调控作用。方法 BALB/c小鼠随机分成正常组、复发型结肠炎模型组、复发型结肠炎四神丸组、复发型结肠炎二神丸组、复发型结肠炎五味子散组和美沙拉嗪对照组,采用葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium, DSS)建立慢性复发型溃疡性结肠炎小鼠模型,经给药治疗10 d后,通过体质量变化增长率、体质量、结肠重量、结肠重量指数、结肠长度、单位结肠质量指数及结肠镜下损伤评分评价其疗效,采用MiSeq高通量测序检测盲肠内容物肠道菌群表达水平,同时采用蛋白免疫印迹法检测小鼠结肠黏膜中模式识别受体4 (toll-like receptor 4,TLR4)和模式识别受体2 (toll-like receptor 2,TLR2)的表达。结果 与模型组比较,四神丸、二神丸及五味子散组小鼠体质量增长率和结肠长度有不同程度地增加,结肠质量、结肠重量指数、单位结肠质量指数和结肠镜下病理损伤评分明显降低;同时,肠道菌群结构分析发现,与模型组比较,给药组物种均匀度、丰富度升高,多样性增加,且给...