甲减影响新生期鼠脑梨状皮质Goα及Gsα的基因表达

目的"研究甲状腺功能低下对新生期鼠脑梨状皮质Goα及Gsα mRNA表达的影响. 方法"采用地高辛标记寡核苷酸探针原位杂交技术,对围生期正常及甲减Wistar大鼠动物模型梨状皮质Goα及Gsα mRNA的表达状况进行研究. 结果"14d龄甲减鼠脑梨状皮质Goα mRNA的表达明显升高,但其Gsα mRNA与对照组无显著差异.结论"在鼠脑发育过程中,甲状腺激素对梨状皮质Goα基因的表达具有负调作用,而对该区Gsα基因的表达则不具备调节功能.     

瘦素受体基因变异与中国人肥胖的关系

目的研究瘦素受体基因变异与中国人肥胖的关系.方法选择肥胖病人[体重指数(BMI)≥30kg/m2]和正常人(BMI＜25kg/m2)各50例,抽提基因组DNA;用PCR-SSCP技术筛查瘦素受体基因外显子1～7、12和18及内含子2的变异.结果在瘦素受体基因内含子2处发现有碱基改变(T→C);瘦素受体基因外显子18发现碱基改变(C→A),导致其968位氨基酸由丙氨酸→天冬氨酸.结论瘦素受体基因内含子2发生碱基改变可能引起瘦素受体基因RNA剪切异常,导致产生异常的瘦素受体;瘦素受体基因外显子18碱基改变,导致其968位氨基酸由丙氨酸→天冬氨酸,氨基酸改变可能影响受体的空间构象,从而影响其功能.     

IA-2基因的克隆及原核表达研究

目的 应用基因获取足量且具有免疫活性IA－2重组蛋白,为建立IA－2抗体检测方法奠定基础。方法 通过逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）法从小鼠脑组织RNA中扩增编码IA－2胸内结构域的cDNA,构建表达型重组质粒,以DNA序列分析确证后,在大肠杆菌中表达,用亲和层析纯化融合目的蛋白,并以斑点印迹技术（Dot blot)鉴定其免疫原性。结果 所获特异CR产物正确重组至Pimpoint Xa-1表达载体中。经异丙基硫代半乳糖苷诱导的原核表达及亲和层析得到了纯度较高、相对分子质量约56000的融合目的蛋白,表达量约1mg蛋白／升菌液,且表达产物与谷氨酸脱羧酶抗体阳性的糖尿病患者血清及健康对照血清发生的显色反应差异有显著性（P＜0.05)。结论 原核表达的IA－2融合蛋白具有免疫学活性,可用用于糖尿病患者血清中相关抗体的检测。     

差异显示PCR分析高脂饮食诱导的肥胖大鼠脂肪组织的基因表达谱

本实验采用高脂饮食饲养ＳＤ大鼠 ,建立肥胖大鼠模型 ,用差异显示ＰＣＲ(ＤＤ ＰＣＲ)方法比较高脂饲料组大鼠与普通饲料组大鼠脂肪组织中基因表达的差异 ,力求发现受饮食调控的基因 ,探讨高脂饮食致肥胖的分子机制。一、材料和方法1.动物模型与标本采集 :2 0只ＳＤ大鼠分为高脂饲料组和普通饲料组。动物饲养 16周。2 .脂肪组织总ＲＮＡ的抽提及处理 :(1)脂肪组织总ＲＮＡ的抽提 :取 1ｇ大网膜脂肪组织按照Ｔｒｉｚｏｌ总ＲＮＡ抽提试剂盒说明书进行。 (2 )总ＲＮＡ的处理 :用不含ＲＮＡ酶的ＤＮＡ酶处理抽提的总ＲＮＡ以去除含有的少量基因…     

Graves''病甲状腺自身抗体的免疫印迹研究

目的：研究Graves'病（Graves' disease,GD）甲状腺自身抗体的异质性。方法：以正常、GD及桥本氏甲状腺炎患者（HT）甲状腺组织作为抗原、运用Western blot检测20例GD甲亢期及20例GD缓解期患者的甲状腺自身抗体，并以正常阴性血清及标准阳性血清[甲状球蛋白（TGAb）＋、甲状腺过氧化物酶抗体（TPOA b）＋、TSH受体抗体（TRAb）＋]作为对照。结果；GD血清可与多种甲状腺抗原反应，每个患者出现的阳性条带带型均不一样。GD血清在HT及GD甲状腺组织抗原泳道出现的阳性条带数明显多于正常甲状腺组织抗原泳道出现的阳性条带数（P＜0．01）。且有的条带不出现于正常甲状腺组织抗原泳道。与标准阳性血清出现的阳性条带相比，GD血清出现更多的条带。结论：GD甲状腺自身抗体存在异质性，GD时存在除TGAb、TPOAb、TRAb以外其它的甲状腺抗体，甲状腺细胞中某些蛋白的变异可能是导致GD时产生甲状腺自身抗原的原因之一。     

甲减影响新生期鼠脑梨状皮质Goα及Gsα的基因表达

目的研究甲状腺功能低下对新生期鼠脑梨状皮质Goα及GsαmRNA表达的影响。　方法采用地高辛标记寡核苷酸探针原位杂交技术 ,对围生期正常及甲减Wistar大鼠动物模型梨状皮质Goα及GsαmRNA的表达状况进行研究。　结果 14d龄甲减鼠脑梨状皮质GoαmRNA的表达明显升高 ,但其GsαmRNA与对照组无显著差异。结论在鼠脑发育过程中 ,甲状腺激素对梨状皮质Goα基因的表达具有负调作用 ,而对该区Gsα基因的表达则不具备调节功能     

Graves病甲状腺自身抗体的临床和免疫印迹研究

目的　研究Graves病 (GD)甲状腺自身抗体的临床特点及异质性。方法　运用放免法测定 77例GD甲亢期、76例GD缓解期患者及 39例正常人的甲状腺球蛋白 (TG)、反三碘甲腺原氨酸 (rT3)、游离三碘甲腺原氨酸 (FT3)、游离甲状腺素 (FT4 )、超敏促甲状腺激素 (s TSH)、甲状腺球蛋白抗体 (TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体 (TPOAb)、TSH受体抗体 (TRAb) ,分析各抗体与临床指标间的关系。同时以正常、GD及桥本甲状腺炎 (HT)甲状腺组织作为抗原 ,运用免疫印迹 (Westernblot)检测GD甲状腺自身抗体 ,并以正常阴性血清及标准阳性血清 (TGAb、TPOAb、TRAb阳性 )作为对照。结果　与缓解期患者相比 ,GD甲亢期患者TRAb水平及阳性率显著增高 (P <0 0 0 1)。GD甲亢期患者的TRAb水平与FT3间存在显著正相关 (r =0 4 2 4 ,P <0 0 5 )。免疫印迹检测发现GD血清可与多种甲状腺抗原反应 ,GD血清在HT及GD甲状腺组织抗原泳道出现的条带数明显多于正常甲状腺组织抗原泳道 ,且有的条带不出现于正常甲状腺组织抗原泳道。GD血清可出现阳性对照血清所不出现的阳性条带。结论　TRAb在GD的致病中起重要作用 ,GD时存在新的甲状腺自身抗体且抗体存在异质性     

甲状腺激素对大鼠小脑,海马,嗅脑神经元型一氧化氮合酶基因表达的调节

目的　观察 15日龄大鼠小脑 ,海马 ,嗅脑一氧化氮 (NO)含量 ,一氧化氮合酶 (NOS)活性的变化及甲状腺激素对上述部位神经元型一氧化氮合酶 (nNOS)基因表达的调节。方法　采用丙基硫氧嘧啶 (PTU)给孕母鼠灌胃造成仔鼠甲减动物模型 ;采用NO ,NOS生化测定法及nNOSmRNA半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)法。结果　无论正常组还是甲减组 ,NO含量 ,NOS活性及nNOSmRNA转录均以小脑为最高 ,嗅脑次之 ,海马最低 (P <0 .0 5 ) ;正常组NO含量 ,NOS活性nNOSmRNA转录均高于甲减组 (P <0 .0 1)。结论　提示甲状腺激素对nNOS基因表达有上调作用 ,NO信号系统可能参与大鼠小脑 ,海马 ,嗅脑等区甲状腺激素缺乏所造成的脑损害过程。