抗醛糖还原酶单克隆抗体的制备与特性鉴定

目的:制备抗醛糖还原酶(AR)的单克隆抗体(mAb),并与本室制备的抗醛糖还原酶相似蛋白(ARL-1)mAb进行比较。方法:经RT-PCR获得AR基因,将基因插入pGEX-4T-1(His)6C中,构建重组质粒pGEX-4T-1(His)6C-AR,以重组质粒转化E.coliRosetta诱导表达GST-AR蛋白。以纯化的GST-AR蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb。应用间接ELISA和Western blot方法对mAb进行筛选和鉴定。使用Clustalx和Antheprot软件,比较AR与ARL-1的同源性,表达GST-dAR[80~142氨基酸(aa)],与ARL-1差异较大;并分析AR的抗原性,表达GST-dA1(1~79aa)、GST-dA2(80~99aa)、GST-dA3(111~142aa)、GST-dA4(143~316aa)。利用AR全长及截短蛋白,采用Western blot分析制备的抗AR mAb识别AR抗原的部位。结果:获得3株稳定分泌抗AR mAb的杂交瘤细胞系ARB3、AR7B3G4和ARF10。3株抗GST-AR的mAb均为IgG1(κ型),腹水mAb效价为1∶4×105,细胞培养上清mAb效价为1∶1×104,3株mAb均可与胎盘组织中的AR蛋白起反应,而与GST-ARL-1和GST蛋白无交叉反应。它们分别为抗GST-dA1、GST-dA3和GST-dA4蛋白的mAb。结论:成功地制备了3株特异性抗AR mAb,可分别识别AR的1~79、111~142、143~316位氨基酸。将它们与抗ARL-1mAb联合应用,将有助于进一步研究AR与ARL-1蛋白的功能,并为深入探讨AR、ARL-1与相关疾病的关系及进行大规模的流行病学调查提供了有力的工具。     

脂质过氧化在肺炎衣原体促进巨噬细胞泡沫化过程中的作用

目的：探讨肺炎衣原体（ Ｃｐｎ） 促进 Ｃ５７ Ｂ Ｌ／６ Ｊ 小鼠腹膜巨噬细胞泡沫化的机制。方法：取 Ｃ５７ Ｂ Ｌ／６ Ｊ小鼠腹膜巨噬细胞培养２４ ｈ 让其贴壁后分为对照组、 Ｌ Ｄ Ｌ 组和 Ｌ Ｄ Ｌ 加 Ｃｐｎ 组３ 组培养,然后测反应液中自由基、 Ｍ Ｄ Ａ 及 Ｓ Ｏ Ｄ 含量。结果：反应液中自由基、 Ｍ Ｄ Ａ、 Ｓ Ｏ Ｄ 含量 Ｌ Ｄ Ｌ 加 Ｃｐｎ 组比 Ｌ Ｄ Ｌ 组高,存在显著性差异。结论：脂质过氧化是肺炎衣原体促进巨噬细胞泡沫化的机制之一。     

神经鞘脂在动脉粥样硬化中的研究进展

动脉粥样硬化是引起大多数心血管疾病的主要原因,但其发病机制复杂,目前尚未完全阐明。越来越多的研究表明,脂质代谢紊乱可能在动脉粥样硬化的形成和发展中发挥重要作用。神经鞘脂作为一类参与机体结构组成、具有信号转导功能的生物活性脂质,在心血管疾病患者的血液和病变血管中水平异常,某些神经鞘脂分子可能是心血管疾病潜在的生物标志物和治疗靶点。文章综述神经鞘脂对动脉粥样硬化的影响和调控机制,为防治动脉粥样硬化寻找新的思路和分子靶点。     

冠心病患者肺炎衣原体感染的研究

目的：探讨肺炎衣原体感染与冠心病之间的关系。方法：采用微量免疫荧光方法检测76例冠心病（包括急性心肌梗塞）患者和76例对照组患者的外周血肺炎衣原体IgG、IgM抗体；采用PCR法检测以上所有病人的鼻咽拭子。结果：两组患者IgG抗体的几何平均滴度差异显著（P<0.05）。IgG、IgM抗体阳性率在冠心病组（包括急性心肌梗塞）分别为75.4%、23.1%，而在对照组分别为52.1%和5.2%，差异显著（P<0.05）。PCR检测冠心病组（包括急性心肌梗塞）20例阳性，阳性率为26.3%（n=76）；对照组4例阳性，阳性率为53%，两组显著差异（P<0.01）。结论：肺炎衣原体感染与冠心病可能有密切的关系。     

肺炎衣原体与动脉粥样硬化

近年来发现肺炎衣原体与心血管疾病有关，尤其是与动脉粥样硬化密切相关。人群中肺炎衣原体感染很普遍，其抗体检出率为40％～60％；在成年人中，男性肺炎衣原体抗体的阳性率高于女性，这与男性易患动脉粥样硬化的结论相一致。动脉粥样硬化患者肺炎衣原体抗体的阳性率明显高于对应的正常人群，在动脉粥样硬化病变中尤其是斑块中可以找到肺炎衣原体原体。经鼻接种肺炎衣原体的新西兰白兔喂正常饲料可以形成动脉粥样硬化病变。本文从诸多方面综合近五年的研究成果，讨论二者相关的证据并在此基础上推测肺炎衣原体致动脉粥样硬化可能的机制。     

自发性脑出血患者肺炎衣原体感染的研究

目的:探讨自发性脑出血与肺炎衣原体感染的关系。方法:检测9例自发性脑出血患者的外周血肺炎衣原体IgG、IgM抗体(微量免疫荧光法)、病变脑动脉组织肺炎衣原体DNA(PCR法)及肺炎衣原体主要外膜蛋白的表达(Western blot法)。 结果:患者IgG抗体的几何平均滴度(190.3±3.2)、IgG抗体阳性率(85.2%)、IgM抗体阳性率(30.8%)均显著高于对照组(分别为48.1±2.0、48.1%、4.8%,P<0.01,P<0.05,P<0.01);病变脑动脉中肺炎衣原体DNA检出率为88.9%(8/9);所有患者病变脑动脉都有肺炎衣原体主要外膜蛋白的表达。结论:自发性脑出血患者存在肺炎衣原体感染的证据,自发性脑出血与肺炎衣原体感染可能有关。     

肺炎衣原体对C57BL/6J小鼠腹膜巨噬细胞泡沫化的影响

目的:探讨肺炎衣原体在C57BL/6J小鼠腹膜巨噬细胞泡沫化过程中的作用。方法:将肺炎衣原体与C57BL/6J小鼠腹膜巨噬细胞培养72h后用油红O方法染色观察细胞的形态变化并测定细胞内胆固醇的含量。结果:肺炎衣原体能使C57BL/6J小鼠腹膜巨噬细胞胞浆内脂质颗粒增多,胆固醇酯占总胆固醇的比例增加。结论:肺炎衣原体能促进C57BL/6J小鼠腹膜巨噬细胞泡沫化。     

小鼠醛糖还原酶相似基因同源蛋白表达研究

目的 检测小鼠ARL-1同源蛋白的表达情况，分析人醛糖还原酶相似基因(ARL-1)与小鼠ARL-1同源蛋白的同源性和遗传距离，从进化的角度讨论小鼠ARL-1同源蛋白与人ARL-1的亲缘关系。方法 利用GenBank和Swiss-Prot数据库，采用Clustal X 1．8软件分析人ARL-1与小鼠ARL-1同源蛋白的同源性，利用Mega 2．0软件分析人ARL-1与小鼠ARL-1同源蛋白的遗传距离，推测其进化关系；采用western blot方法，运用抗ARL-1多克隆抗体分析小鼠多种组织ARL-1同源蛋白的表达情况。结果 人ARL-1分别与小鼠中国仓鼠卵巢还原酶(CHO-Red)、成纤维细胞生长因子调节蛋白(FR-1)、鼠醛糖还原酶相似蛋白(rARLP)、小鼠输精管蛋白(MVDP)、鼠晶状体醛糖还原酶(LeAR)、δ4-3-5β酮甾类还原酶(5β-Red)、鼠醛酮还原酶蛋白C(RaK-c)、3α-18-羟甾类脱氢酶(3α-HSD)有83％、82％、81％．79％、70％、51％、50％、45％的同源性。人ARL-1与小鼠CHO-Red的遗传距离最短(18．0％，P=0．023)，其次是FR1(19．1％，P=0．023)和rARLP(19．9％，P=0．025)。从进化树来看，人ARL-1与小鼠FR-1、rARLP、CHO-Red亲缘关系较近，其次是MVDP与LeAR。采用western blot在小鼠输精管，睾丸、膀胱、子宫检测到ARL-1同源蛋白。结论 人ARL-1与小鼠CHO-Red、FR-1、rARLP、MVDP较高的同源性、较短的遗传距离和较近的亲缘关系。小鼠输精管、睾丸、膀胱、子宫检测到ARL-1同源蛋白，从同源性的高低、遗传距离的长短以及亲缘关系的远近推测这些蛋白可能是FR-1、rARLP、CHO-Red以及MVDP。