基于转录组学探讨四君子汤增强顺铂抗胃癌作用的机制

目的：采用转录组学方法探讨四君子汤增强顺铂抗胃癌的作用及其机制。方法：建立人胃癌裸鼠移植瘤模型,随机分为模型组、顺铂组、四君子汤联合顺铂组,测量各组裸鼠体质量、肿瘤体积和瘤重。通过转录组测序分析筛选差异基因并对差异基因进行功能注释与富集分析。结果：与顺铂组比较,四君子汤联合顺铂组肿瘤体积、瘤重、瘤重指数均显著降低（P<0.01,P<0.05）,顺铂组的抑瘤率为25.99%,四君子汤联合顺铂组的抑瘤率为79.14%。四君子汤联合顺铂组与顺铂组共有31个差异表达基因,涉及PI3K/Akt、ErbB等信号通路。结论：四君子汤可以增强顺铂抗胃癌作用,其作用机制可能与PI3K/Akt、ErbB等信号通路有关。     

补脾益气方对哮喘模型大鼠肺组织核因子KappaB抑制剂的激酶β表达的影响

目的:探讨补脾益气方对哮喘模型大鼠肺组织核因子Kappa B(NF-κB)抑制剂的激酶β(the kinase of nuclear fac-tor-kappa B inhibitor β,IKKβ)的调控作用及对白介素8(IL-8)含量的影响。方法:SPF级雄性Wistar大鼠随机分为对照组(A)、哮喘组(B)、补脾益气方治疗组(C)。卵蛋白致敏和激发复制出哮喘模型,按照10 g.kg-1体重给予C组大鼠中药ig 1次/d,共21d。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织IKKβ的mRNA表达水平,采用免疫组化检测肺组织IKKβ的蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定支气管肺泡灌洗液IL-8的含量。结果:①肺组织IKKβ的mRNA的表达:B组显著高于A组(P<0.01);C组显著低于B组(P<0.05)。②肺组织IKKβ的蛋白表达水平:B组显著高于A组(P<0.01);C组显著低于B组(P<0.01)。③肺泡灌洗液IL-8含量:B组显著高于A组(P<0.01);C组显著低于B组(P<0.01)。结论:哮喘组大鼠肺组织IKKβmRNA和蛋白的表达水平显著增强,补脾益气方能有效抑制其表达,降低肺泡灌洗液IL-8含量,证明补脾益气方能有效抑制IKKβ信号转导的途径。     

中药复方对小鼠吗啡镇痛耐受影响的研究

目的探讨中药复方对小鼠吗啡镇痛耐受的影响及其机制。方法选取2008年12月—2009年5月健康雄性昆明种小鼠30只,随机数字表法分为3组,即吗啡组(M组)、吗啡加中药复方组(MB组)、正常对照组,每组10只。在安静、室温、正常光照的环境中适应性饲养1周,1周后M组每12 h皮下注射吗啡10 mg/kg;MB组每12 h皮下注射吗啡10 mg/kg并给予中药复方0.2 ml/只。以上各组均给药1周共15次。正常对照组不给予任何处理。第1次给药前及第1、3、6、9、12、15次给药半小时后测量甩尾潜伏期(TFL)。免疫组化染色测定蛋白激酶A(PKA)。结果 M组与MB组给药前、第1次、第3次给药后TFL比较,差异均无统计学意义(P>0.05);两组第6次、第9次、第12次、第15次给药后TFL比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。正常小鼠脑皮质免疫组化染色显示PKA几乎没有表达,M组PKA表达有所增多,MB组小鼠脑皮质内PKA明显增多。M组PKA染色平均光密度值为(0.3492±0.0055),MB组为(0.3230±0.0096),差异有统计学意义(t=2.83,P<0.05)。结论中药复方对小鼠吗啡耐受的形成具有抑制作用,与吗啡同用可以取得良好的镇痛效果,其机制可能与拮抗了吗啡对细胞内信号转导系统的影响有关。     

活化T细胞核因子5 对人胃癌MGC803 细胞增殖及凋亡能力的影响

目的:探讨活化T 细胞核因子5（nuclear factor 5 of activated T cells, NFAT5）对人胃癌MGC803 细胞增殖及凋亡能力的影响及其可能的机制。方法：设计并合成3 条靶向NFAT5 基因的siRNA（siRNA2567、siRNA2714 和siRNA4562）及1 条与NFAT5 基因无同源性的阴性对照siRNA（NC-siRNA）,脂质体介导转染人胃癌MGC803 细胞后,采用Real-time PCR检测分析细胞中NFAT5 mRNA 表达水平的变化,进而筛选出有效抑制NFAT5 基因表达的siRNA（NFAT5-siRNA）。NFAT5-siRNA 转染MGC803 细胞48 h 后,进一步采用Real-time PCR和Western blotting 验证并检测细胞中NFAT5 和S100A4 mRNA及蛋白表达水平的变化,流式细胞术和CCK-8 法分析抑制NFAT5 表达对细胞增殖及凋亡的影响。结果: 转染siRNA2567 对NFAT5 mRNA的表达抑制最为明显（P<0.01）,siRNA2567 被验证为NFAT5-siRNA。转染NFAT5-siRNA 48 h 后,NFAT5 和S100A4 mRNA及蛋白的表达水平均明显降低（P<0.05）;与NC-siRNA 组相比较,NFAT5-siRNA 组MGC803 细胞的增殖率在72 h 和96 h 均显著降低（P<0.01）;NFAT5 基因沉默48 h 后,MGC803 细胞的凋亡率由（2.7±0.2）%上升至（7.9±0.2）%（P<0.01）。结论: NFAT5-siRNA 能有效沉默人胃癌MGC803 细胞中NFAT5 基因表达,在抑制细胞增殖率的同时能够有效促进细胞凋亡,该作用可能通过调控S100A4 表达实现。     

生长分化因子15 对人肺腺癌SPCA1 细胞增殖与迁移的影响

目的：探讨靶向生长分化因子15（growth differentiation factor 15,GDF15）基因siRNA 对人肺腺癌SPCA1 细胞增殖和迁移的影响。方法：根据基因数据库（GenBank）设计并合成3 条人GDF15 基因siRNA（GDF15-siRNA161、GDF15-siRNA290 和GDF15-siRNA860）和阴性对照NC-siRNA 序列,采用qPCR法测定转染不同GDF15-siRNA 的SPCA1 细胞中GDF15 mRNA表达水平,筛选有效抑制GDF15 基因表达的siRNA。CCK-8 法和划痕实验分别检测转染有效GDF15-siRNA 和NC-siRNA 的SPCA1 细胞增殖和迁移能力。结果：3 条GDF15-siRNA 对SPCA1 细胞GDF15 mRNA表达均有明显抑制（P<0.01）,其中GDF15-siRNA161抑制最为明显。和转染NC-siRNA 的SPCA1 细胞相比,转染GDF15-siRNA161的SPCA1 细胞增殖明显减慢[ （0.46±0.03）vs（0.52±0.01）,P<0.01],转染GDF15-siRNA161的SPCA1 细胞迁移速度明显低于转染NC-siRNA的SPCA1 细胞（P<0.01）。结论：有效沉默人肺腺癌SPCA1 细胞GDF15基因表达能抑制肺腺癌细胞的增殖和迁移,GDF15 可能成为人肺腺癌基因治疗的候选靶点。     

基于高通量测序技术探讨益糖康对糖尿病小鼠外周血miRNA表达谱的影响

目的：基于高通量测序技术探讨益糖康对糖尿病小鼠外周血miRNA表达谱的影响。方法：从15只C57BL/6小鼠中随机选取5只作为空白组,其余小鼠采用高脂饲料结合腹腔注射链脲佐菌素(100 mg·kg^-1)的方式建立糖尿病模型。将造模成功的小鼠随机分为模型组和益糖康组(32.2 g·kg^-1),每组5只,灌胃9周,每日1次,每周检测空腹血糖(fasting blood glucose, FBG)。采用高通量测序技术检测小鼠外周血miRNA表达情况,筛选差异表达miRNA,并通过miRanda数据库预测靶基因。最后,针对靶基因进行基因本体(Gene Ontology, GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encylopaedia of Genes and Genomes, KEGG)富集分析。结果：给药第1—9周,与空白组比较,模型组小鼠FBG升高(P<0.01);给药第4—9周,与模型组比较,益糖康组小鼠FBG降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,益糖康组小鼠外周血8个miRNA表达上调,包括miR-434...     

基于网络药理学的二陈汤治疗冠心病分子机制研究

目的应用网络药理学研究二陈汤治疗冠心病的作用靶点、代谢物、信号通路等,从而揭示其从痰瘀论治冠心病的分子机制。方法应用中药系统药理学技术平台(TCMSP)、中药潜在靶点数据库(TCM-PTD)、中药综合数据库(TCMID),找到二陈汤的主要成分,并通过ChemMapper数据库进行靶点预测,筛选成分靶点。通过TTD、Drugbank、DisGeNET数据库进行检索,获得冠心病相关的疾病靶点。将疾病靶点与药物靶点进行交集,筛选得到疾病-药物成分共同靶蛋白。应用STRING平台构建蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络模型。应用Metabo Analyst数据库将上述筛选出成分进行代谢物分析,筛选出主要代谢物。采用Cytoscape的MetScape及ClueGO插件分别分析二陈汤治疗冠心病相关靶点的基因功能及代谢通路,构建二陈汤主要药物成分-代谢物-靶点-信号通路拓扑网络。结果经数据库分析共筛选出二陈汤的8种主要成分及与冠心病相关的靶点56个,同时筛选出与二陈汤主要成分相关的代谢物13个及相关信号通路13个;在此基础上构建了二陈汤的成分-靶点、成分-冠心病靶点及相关代谢及信号通路的共表达网络,发现二陈汤可能通过保护血管内皮、抗氧化应激、抗炎修复等多靶点、多途径发挥对冠心病的治疗作用。结论从多角度探索了二陈汤从痰瘀论治冠心病的潜在分子机制,揭示了二陈汤的药理作用,为其后续临床疗效评价指标的筛选提供了研究方向。     

小干扰RNA沉默 TLR4表达对脂多糖促进人肺癌SPCA1细胞增殖的影响

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)对脂多糖(LPS)促进人肺癌SPCA1细胞增殖的影响。方法:采用LPS(10μg/ml)刺激细胞,模拟慢性炎症的细胞微环境。将靶向TLR4基因的小干扰RNA(TLR4-siRNA)或阴性对照(NC-siRNA)通过脂质体介导转染人肺癌SPCA1细胞,24 h后加入10μg/ml LPS。按转染siRNA和加入LPS情况,实验分为不做任何处理的Control组、NC+10LPS组以及TLR4-siRNA+10LPS组。采用Real-time PCR和流式细胞术检测SPCA1细胞中TLR4 mRNA及蛋白的表达情况;采用CCK-8法和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测分析细胞周期分布情况。结果:与NC+10LPS组相比较,TLR4-siRNA+10LPS组细胞中TLR4 mRNA及蛋白的表达水平显著下降(P<0.01);与Control组和NC+10LPS组相比较,TLR4-siRNA+10LPS组SPCA1细胞的增殖明显减缓(P<0.01),TLR4-siRNA+10LPS组细胞克隆形成能力明显降低[(4.50±1.89)vs(13.33±1.81)、(15.75±1.25)个,P<0.01];TLR4-siRNA+10LPS组细胞周期阻滞于G0/G1期[(61.55±0.55)%vs(53.59±1.59)%、(51.72±0.77)%,P<0.01]。结论:TLR4-siRNA能有效沉默SPCA1细胞中TLR4的表达,能够阻滞细胞的生长,抑制细胞的增殖。     

siRNA沉默 TLR4 表达对人肺腺癌A549细胞增殖和侵袭的影响

【摘要】目的:探讨靶向TLR4基因的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对人肺腺癌细胞A549增殖和侵袭的影响。方法：设计并合成针对TLR4基因的3条siRNA(siRNA₇₂₂、siRNA₁₆₇₃和siRNA₂₅₆₀)及1条与TLR4基因无同源性的阴性对照siRNA,用Real-time PCR方法测定干扰后A549细胞上TLR4 mRNA的表达水平,筛选出有效抑制靶基因表达的siRNA并确定最佳转染时间;采用TLR4特异性siRNA(TLR4-siRNA)转染A549细胞,CCK-8法和Transwell小室法分别检测A549细胞的增殖和侵袭能力。结果：与阴性对照相比siRNA₁₆₇₃在转染48h后对TLR4基因的抑制最为明显,TLR4-siRNA转染后A549细胞增殖活性明显下降,TLR4-siRNA组A549细胞的侵袭细胞数明显少于阴性对照组【(23.60 ± 2.88)个vs(59.80 ± 5.54)个(P<0.01)】。结论：TLR4-siRNA能沉默A549细胞中TLR4基因的表达,抑制A549细胞的增殖和侵袭,TLR4可能成为肺癌基因治疗的候选靶点。