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目的基于转录组测序技术探讨肠道病毒71型(EV71)感染对人横纹肌肉瘤(RD)细胞自噬和免疫的影响及其作用机制。方法用不同剂量EV71感染RD细胞确定感染复数(MOI)。在MOI=1时选择不同时间点(0、0.5、1、1.5、3、6、9和12 h)共8组进行后续实验。倒置显微镜观察细胞形态和数量变化;蛋白免疫印迹(Western blot)检测蛋白表达情况;运用转录组测序技术分析细胞功能及基因表达的变化;高内涵细胞成像技术观察细胞内蛋白表达情况。结果倒置显微镜可见细胞在病毒感染3 h由梭形贴壁逐渐变为圆形悬浮,细胞数量相比0 h明显减少(P<0.05)。Western blot结果显示细胞在感染后6 h、9 h、12 h,病毒在RD细胞内已经表达病毒衣壳蛋白1(VP-1),感染后9 h自噬相关蛋白LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ与0 h组相比明显升高(P<0.01)。转录组测序结果显示EV71感染RD细胞后3 h细胞内基因表达变化达到峰值,上调基因1 199个,下调基因126个。KEGG分析提示改变的信号通路分子大多与自噬和免疫相关。高内涵细胞成像显示细胞在感染后数量减少,细胞内自噬蛋... 相似文献
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