中药添加剂降低烟气悬凝物诱导16HBE细胞TNF-α、IL-8及气道黏液蛋白基因mRNA高表达的实验研究

目的:研究中药添加剂降低烟气悬凝物诱导16HBE细胞TNF-α、IL-8及MUC5AC mRNA高表达的作用。方法:CCK-8法检测细胞活力,RT-PCR法检测TNF-α、IL-8及MUC5AC mRNA表达水平。结果:CSC染毒后细胞活力下降,TNF-α、IL-8及MUC5AC mRNA表达水平升高。中药添加剂组细胞活力高于普通烟组,mRNA表达水平有所下降。结论:中药添加剂具有抑制CSC诱导16HBE细胞活力下降及TNF-α、IL-8及MUC5AC mRNA高表达的作用。     

1,2-丙二醇体内外安全性实验研究

目的 从体内和体外分别考察1,2-丙二醇气管内雾化给药局部刺激性、体外溶血性和细胞毒性,初步评价1,2-丙二醇吸入给药安全性。方法 取大鼠,采用气管内雾化给药方式给予30% 1,2-丙二醇200 μL,连续5 d,评价1,2-丙二醇吸入给药对肺部的局部刺激性;采用体外试管法肉眼观察和紫外分光光度计法计算溶血率考察1,2-丙二醇的溶血性;采用MTT法研究1,2-丙二醇对人肺腺癌细胞A549、人支气管上皮细胞16HBE、大鼠气管上皮细胞RTE的不良反应,分别计算IC₅₀值。结果 1,2-丙二醇气管内雾化给药后,动物出现极轻度的血管壁周围水肿,极轻度到轻度的肺脏局部支气管内炎症细胞浸润,溶剂对照出现极轻度到轻度的血管壁周围水肿。当1,2-丙二醇浓度≥50%,溶血试验肉眼观察发现,温育1 h上层略偏红色,温育时间延长,颜色略加深,3 h温育结束,发生溶血,但未见凝聚现象;采用紫外分光光度计法计算溶血率均>5%,均有溶血发生。细胞毒性试验中,1,2-丙二醇体积分数在0.12%~10%,对A549、16HBE及RTE的细胞不良反应存在一定的量效关系,相关系数R²值分别为0.986,0.989,0.993,IC₅₀分别为2.538%,2.015%,1.983%。结论 气管内雾化给予1,2-丙二醇对肺部刺激性较小,肺部耐受性较好。浓度≥50%时,可引起溶血。体积分数达到2%时,1,2-丙二醇对A549、16HBE和RTE细胞有显著的不良反应。本研究为1,2-丙二醇吸入途径应用的安全性提供了毒理学数据参考。     

茯砖茶不同溶剂提取物抗氧化活性研究

目的 研究茯砖茶不同溶剂提取物体外抗氧化活性,并测定其总多酚、黄酮含量.方法 以抗坏血酸为阳性对照,采用二苯代苦味酰基（DPPH）、[2,2＇-连氨-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二氨盐]（ABTS）及铁离子还原/抗氧化能力（FRAP）三种抗氧化模型,评价茯砖茶80％乙醇（总提物）、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水5种不同溶剂提取物体外清除DPPH、ABTS＋自由基能力和对铁离子的还原/抗氧化能力.结果 茯砖茶乙酸乙酯提取物总多酚含量最高,正丁醇提取物黄酮含量最高,分别为（291.38±5.24）、（222.86±6.12）mg/g.茯砖茶不同溶剂提取物均具有一定的抗氧化活性,清除ABTS＋自由基和铁离子还原/抗氧化能力为：总提物＞乙酸乙酯提取物＞正丁醇提取物＞水提物＞石油醚提取物;清除DPPH自由基的能力为：乙酸乙酯提取物＞总提物＞正丁醇提取物＞水提物＞石油醚提取物.茯砖茶总提物和乙酸乙酯提取物均具有良好的抗氧化活性,清除DPPH自由基能力的半清除率浓度（IC50）分别为0.048、0.043 g/L,清除ABTS＋自由基能力的IC50分别为0.025、0.027 g/L.茯砖茶抗氧化能力与总多酚含量呈正相关.结论 茯砖茶提取物具有良好的抗氧化能力,为开发功能性抗氧化剂提供科学依据.     

中药添加剂降低烟气悬凝物诱导16HBE细胞损伤的实验研究

目的:观察中药添加剂降低烟气悬凝物诱导16HBE细胞损伤的作用.方法:使用人类支气管上皮细胞系16HBE细胞,建立细胞烟气悬凝物染毒模型,检测染毒后细胞活力,氧化应激水平,TNF-α、IL-8分泌情况.结果:烟气悬凝物染毒后,细胞活力下降,氧化应激水平升高,TNF-α、IL-8分泌增加.含中药添加剂组烟气悬凝物染毒后细胞活力高于普通烟组,LDH释放及氧化应激水平降低,TNF-α、IL-8分泌减少.结论:烟气悬凝物染毒16HBE细胞可致细胞活力下降及氧化应激水平升高,细胞因子分泌增加,中药添加剂可缓解以上情况.     

烤烟和白肋烟的致突变作用和细胞毒性的对比研究

目的比较纯粹烤烟和白肋烟的致突变作用和细胞毒性,为开发低危害卷烟提供参考依据。方法以2种纯粹烤烟(F1,F2)和2种纯粹白肋烟(B1,B2)为研究对象,应用鼠伤寒沙门杆菌TA98和TA100菌株,分别在代谢活化和非活化条件下进行细菌回复突变试验;应用人淋巴母细胞TK6细胞进行TK基因突变试验,并通过测定相对悬浮生长率和平板效率考察细胞毒性,应用中国仓鼠成纤维细胞(CHL)细胞进行中性红试验。结果细菌回复突变试验结果表明,在非代谢活化条件下,4个样品均未检测出致突变作用;在代谢活化条件下,只有白肋烟样品被检测出具有较弱致突变作用。TK基因突变试验结果显示,与阴性对照组相比,白肋烟样品(B2)显著诱导突变频率的增加,差异具有统计学意义。TK6细胞细胞毒性试验和CHL细胞中性红试验结果表明,未见烤烟和白肋烟的细胞毒性之间差异有统计学意义。结论在该实验条件下,认为白肋烟的致突变作用强于烤烟。     

中药添加剂对吸烟大鼠呼吸功能及免疫功能的影响

[目的]评价中药添加剂对大鼠吸烟所致的呼吸功能及免疫功能的改善效果。[方法]吸烟组大鼠在烟气环境中每日暴露1 h,对照组大鼠在烟机无卷烟空吸环境中每日暴露1 h,持续3个月,测定肺功能,脏器系数,腹主动脉取血测定血清中抗氧化、免疫因子指标。[结果]各吸烟组大鼠用力肺活量(FVC)与对照组相比差异无统计学意义,但FEV1/FVC%(一秒率)有所下降,其中3号烟组与0号烟组相比显著升高(P0.05)。2、3号烟组用力中期呼气流速(FEF25%~75%)、最大呼气中段流量(MMF)、最大呼气流量(PEF)各项指标与0号烟组相比明显改善,且与对照组值接近;1、2、3号烟组大鼠肺脏、胸腺脏器系数较0号烟组相比,无统计学差异。1号烟组脾脏系数极显著高于0号烟组(P0.01),3号烟组脾脏系数显著高于0号烟组(P0.05);与0号烟组相比,2、3号烟组超氧化物歧化酶(SOD)显著升高(P0.05),丙二醛(MDA)差异无统计学意义;1、2、3号烟组γ-干扰素(IFN-γ)均高于0号烟组,白介素-1β(IL-1β)均低于0号烟组,但差异无统计学意义。与0号烟组相比,1号烟组能极显著降低IL-6(P0.001),3号烟组能显著降低IL-12(P0.05)。[结论]2、3号添加剂可改善吸烟引起的大鼠肺功能降低,和对吸烟造成的抗氧化能力下降有保护作用。1、3号添加剂均可一定程度上改善因吸烟引起的大鼠免疫力下降,由此得出3号添加剂为卷烟的理想添加剂。