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目的 构建胰岛素抵抗(IR)小鼠小肠类器官模型,研究两色金鸡菊黄酮类成分黄诺玛苷对肠黏膜屏障的保护作用。方法 (1)构建C57BL/6J和db/db小鼠小肠类器官模型,3D免疫荧光染色观察小肠类器官细胞核核抗原(Ki-67)、上皮细胞E钙黏蛋白(E-cad)、溶菌酶(Lyz)和黏蛋白2(MUC-2)表达,实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测纤连蛋白(Fn)、胰高血糖素样肽1(GLP-1)和肽YY(PYY)m RNA表达;Western印迹法检测Fn,GLP-1和PYY蛋白表达;ELISA检测Lyz分泌水平。(2)将构建的小鼠小肠类器官分为5组：以C57BL/6J小鼠小肠类器官为正常对照组,db/db小鼠小肠类器官为IR模型组,db/db小鼠小肠类器官用黄诺玛苷25,50和100μmol·L-1处理48 h为IR模型+黄诺玛苷组,RT-q PCR检测各组类器官Lyz m RNA表达,Western印迹法检测Lyz蛋白表达。结果 (1) C57BL/6J和db/db小鼠小肠类器官培养第6天形成管腔结构清晰的环状结构,IR小鼠小肠类器官模型建立成功。3D免疫荧光检... 相似文献
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目的：探讨黄诺玛苷对胰岛素抵抗小鼠小肠类器官转录组的影响。方法：首先建立C57BL/6J和db/db小鼠小肠类器官；采用免疫荧光法检测细胞核核抗原（ki-67）和上皮细胞E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达；将小肠类器官分为3组，分别是以C57BL/6J小鼠小肠类器官为正常组、db/db小鼠小肠类器官为模型组和db/db小鼠小肠类器官黄诺玛苷干预组为给药组（FM组）；采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测3组小肠类器官胰高血糖素样肽-1(GLP-1)蛋白的表达；并对3组样本进行转录组测序。结果：小肠类器官培养第6天形成围绕管腔周围的环状结构，初步建立了小肠类器官培养模式；免疫荧光检测结果显示小肠类器官均表达ki-67和E-cadherin;Western blot结果显示黄诺玛苷可增加GLP-1蛋白的表达；差异基因表达分析中，模型组与正常组相比差异表达基因共有1 862个，FM组与模型组相比差异表达基因共有2 282个；通过蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络分析2组共同表达的差异基因，得到Nr1i3、Cyp2c44、Ugt2b1、Gsta1、Gstm2、Ptgs1、G... 相似文献
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