毒蕈胆碱M_1受体激动剂的高通量筛选模型

目的　建立毒蕈碱样胆碱M1 受体激动剂的高通量筛选模型 ,以此模型进行M1 受体激动剂筛选。方法　将M1 受体基因质粒 (M1 /pCDNA3 1 )与报告基因质粒 (3×CRE/ 3×MRE/SRE LUC)按 1∶5的比例共转染HEK2 93 ,建立了一个稳定的M1 受体激动剂报告基因筛选细胞株。配体与细胞表面M1 受体结合后 ,激活相应的信号通路 ,调节报告基因的表达 ,通过测定荧光酶素报告基因表达水平的变化 ,评估配体激活M1 受体的生物活性。结果　通过对筛选条件 ,如细胞数目、荧光素酶表达时间、底物浓度的优化 ,建立了可靠的筛选方法 ,并对多种抗衰老中药水提物进行了筛选 ,找到 3种对M1 受体有活性的中药。结论　该系统能准确、稳定、有效地应用于M1 受体激动剂的高通量筛选     

Neuromedin U及其受体的研究进展

NeuromedinU作为一种脑肠多肽 ,其外周生物活性包括刺激平滑肌、增加血压、增加血流、改变小肠离子传输、控制局部血流、调节肾上腺皮质素等功能 ,已发现neuromedinU在中枢神经系统的作用为减少食物摄取和体重。该文就neuromedinU及其受体的结构、组织分布和生理学功能等研究进行综述。     

麦草粉对单纯性肥胖大鼠胰岛素抵抗的影响

目的:探讨麦草粉对单纯性肥胖大鼠胰岛素抵抗及血糖的影响。方法:34只Wistar大鼠随机分成正常对照组、模型组和麦草粉组。模型组和麦草粉组以高脂饲料饲喂6w诱发大鼠肥胖模型,再灌胃给麦草粉4w,分批禁食20～24h,采尾血测定基础血糖,然后进行葡萄糖钳夹实验。结果:模型组基础血糖、胰岛素、TG、TCH、LDL和FFA明显高于对照组(P<0.05),麦草粉组与模型组比较,基础血糖、胰岛素、TG、TCH、LDL和FFA均呈非常显著降低(P<0.01),葡萄糖钳夹实验结果显示,麦草粉组葡萄糖输注速率(GIR)值非常显著高于模型组(P<0.01),增重率和脂肪垫比率显著低于模型组(P<0.05)。结论:麦草粉可降低单纯性肥胖大鼠的血糖,调节血脂,改善胰岛素抵抗,有一定的减肥作用。     

柑橘类黄酮对Neuromedin U2受体的激活效应及siRNA干扰分析

目的:利用NMU2R稳定细胞株和阴性细胞株并通过siRNA干扰分析筛选柑橘类黄酮中对NMU2R有激活效应的物质.方法:利用NMU2R细胞考察9种柑橘黄酮对NMU2R的激活效应,然后针对激活效应较高的柑橘类黄酮,分别用阴性细胞和NMU2R的siRNA干扰分析来排除假阳性干扰.结果:柑橘类黄酮中的橙皮苷和川陈皮素能有效激活NMU2R,橙皮苷和川陈皮素的效能、半效浓度、效价强度分别为4.688,318.970 μmol·L-1,200.933 μmol·L-1和4.758,5.832 μmol·L-1,3.124μmol·L-1.结论:柑橘类黄酮中的橙皮苷和川陈皮素都对NMU2R有激活效应.川陈皮素的半效浓度较低,具有药用开发价值.     

G-蛋白偶联受体的功能测定和高通量药物筛选

G 蛋白偶联受体家族是药物开发中最大的一类药物靶点 ,高通量药物筛选是开发药物早期阶段的最重要工具之一。根据G 蛋白偶联受体与配体结合及激发的信号通路 ,人们设计了各种可行的功能测试方法 ,用于G 蛋白偶联受体为药靶的高通量药物筛选 ,如 :微体积荧光数字图像测定技术 (Fluorometicmicrovolumeassaytechnology ,FMAT)、荧光偏振 (Fluoresencepolarization ,FP)、竞争性ELISA (Com petitiveenzyme linkedimmunosorbent)、闪烁邻近测定法(Scintillation proximityassay ,SPA)、载黑色素细胞测定法(Melanophoreassay)、报告基因测定法 (Reportergeneassay)和钙离子测定法等测定方法。在这些方法中 ,报告基因测定法和钙离子测定法占了主导地位。非放射性、无需底物和辅助剂的报告基因测定方法和荧光钙离子指示剂的钙离子测定方法可能是将来G 蛋白偶联受体的功能分析和高通量药物筛选的发展方向     

胰高血糖素样肽1受体激动的高通量筛选及作用机制研究

目的 筛选胰高血糖素样肽1(GLP-1)受体激动剂,并进行初步的作用机制研究.方法 建立稳定的GLP-1受体激动剂高通量筛选模型,从天然药物中筛选活性成分;在PC12细胞中验证GLP-1受体激动剂的功能及作用机制.结果 经过筛选、鉴定,京尼平苷是一种新的GLP-1受体激动剂,能够通过MAPK信号通路诱导PC12细胞分化,对抗过氧化氢诱导的PC12细胞氧化损伤,提高神经细胞活力.结论 京尼平苷具有与GLP-1受体激动剂类似的神经营养和神经保护功能.     

神经介素NMU2R受体激动剂的高通量筛选模型研究

 目的 建立神经介素Neuromedin U 2 Receptor（NMU2R）激动剂的高通量筛选模型，从中药中筛选NMU2R受体激动剂。方法 将人NMU2R受体基因质粒（hNMU2R/pCDNA3.1）与报告基因质粒（MRE/CRE/LUC）按1∶5的比例共转染到HEK293细胞，通过G418筛选，建立稳定的hNMU2R受体激动剂筛选细胞株。利用CRE的激活剂Forskolin和NMU2R内源激动剂Neuromedin U探索和优化荧光素酶表达时间、每孔细胞数目、荧光素酶底物浓度等筛选条件，建立可靠的筛选方法，并对部分中药水提液进行筛选。结果 已建立了一个稳定的hNMU2R受体激动剂筛选细胞株和可靠的筛选方法，其Z′-因子为0.75，荧光素酶表达时间为6～8 h，细胞密度为每孔4×10⁴～8×10⁴个。结论 该系统能够有效地应用于NMU2R受体激动剂的高通量筛选，能从中药中筛选出NMU2R受体的激动剂。     

柑橘皮总黄酮对大鼠佐剂性关节炎的影响及机制研究

目的:探讨柑橘皮总黄酮(TFO)对大鼠佐剂性关节炎(AA)发展的影响及机制。方法:建立大鼠AA模型,灌胃给药37.5,75,150 mg.kg-1TFO。游标卡尺测量大鼠足跖厚度,HE染色观察关节病理损伤,放射免疫法检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-1β和前列腺素(PG)E2水平,Western blot法分析关节滑膜组织环加氧酶(COX)-2表达。结果:75,150 mg.kg-1TFO可显著减少AA大鼠足跖厚度,减轻关节病理学损伤,降低血清TNF-α,IL-1β,PGE2水平,抑制关节滑膜组织COX-2表达。结论:TFO可拮抗大鼠AA发展,其作用机制与抑制炎症介质的生成密切相关。     

芦丁对单纯性肥胖大鼠血糖和脂代谢紊乱的调节作用

目的　探讨芦丁对单纯性肥胖大鼠血糖、脂代谢紊乱的调节作用。方法　34只Wistar大鼠随机分成对照组、模型组和芦丁组。模型组和芦丁组以高能量食物饲喂6周,诱发大鼠肥胖模型,再灌胃给药4周,分批禁食2 0～2 4h ,1 0 %水合氯醛麻醉,右颈静脉及左颈动脉插管,取血测空腹血糖、胰岛素和血脂生化指标,然后进行糖钳实验。结果　模型组空腹血糖、胰岛素、TCH、TG、LDL -C和FFA明显高于对照组(P <0 . 0 5 ) ,芦丁组显著低于模型组(P <0 . 0 5 ) ;糖钳实验显示,模型组葡萄糖灌注速率GIR显著低于对照组(P <0 .0 1 ) ,芦丁GIR显著高于模型组(P <0 . 0 5 )。结论　芦丁具有降低单纯性肥胖大鼠的血糖、调节血脂、改善胰岛素抵抗的作用。