地鼠多瘤病毒PCR检测方法的建立

目的  建立地鼠多瘤病毒（hamster polyomavirus, HaPyV）PCR检测方法,并应用于乙型脑炎减毒活疫苗生产过程中地鼠肾细胞的感染检测。方法  设计针对HaPyV衣壳蛋白VP1基因片段的特异引物,以含HaPyV VP1片段的质粒PMD19T-HaPyV688为模板进行PCR扩增并测序确认扩增产物。以多种病毒DNA为模板进行PCR扩增并对扩增产物进行斑点杂交鉴定以验证PCR方法的特异性。将定量的质粒PMD19T-HaPyV688 10倍系列稀释后进行PCR敏感性检测。以小鼠多瘤病毒(murine polyomavirus, MuPyV)检验PCR法对质粒DNA和病毒DNA检测的一致性。应用建立的方法对生产用地鼠肾细胞悬液进行HaPyV DNA检测。结果  仅含有质粒PMD19T-HaPyV688和MuPyV DNA的样品能够扩增出600 bp的片段,经斑点杂交及测序证明其分别为HaPyV和MuPyV的VP1特异基因片段。PCR所能检出的PMD19T-HaPyV688和MuPyV 的最少DNA拷贝数分别为5300和590。7个亚批生产用地鼠肾细胞悬液的HaPyV检测结果均为阴性。结论  建立的PCR方法具有较高的敏感性和特异性,可用于生产用地鼠肾细胞HaPyV感染的检测。     

柱层析法纯化人用地鼠肾细胞狂犬病毒灭活疫苗的研究

目的改进和提高现行人用地鼠肾细胞狂犬病灭活疫苗的纯度和保护效价。方法　将原代地鼠肾细胞 (PHKC)培养并收获的aG株狂犬病毒原液超滤浓缩 40～ 5 0倍 ,再经Sepharose 6FastFlow分子筛柱层析 ,收集完整的病毒颗粒 ,除菌、灭活、添加Al (OH) 3 佐剂制成纯化地鼠肾细胞狂犬病毒疫苗。结果　浓缩狂犬病毒经过柱层析纯化 ,抗原比活性较纯化前平均提高 2 9 5 4倍 ,纯化效果平均达到 96 1% ,疫苗效力平均达到 2 98IU/ml,其余检测结果均符合现行有关规程。结论　凝胶分子筛柱层析技术 ,是一种快捷而经济的改进现行狂犬疫苗质量的有效方法     

冻干RA27／3株风疹减毒活疫苗的研制

目的 研制安全有效的风疹疫苗。方法 将RA27／3风疹减毒株按适当比例接种MRC－5人二倍体单层细胞,培养、收获病毒液,加保护剂冻干制苗。结果 连续中试4批疫苗,各项检测指标均达到现行《中国生物制品规程》标准。结论 试制RA27／3株风疹活疫苗,质量及热稳定性良好。     

乙型脑炎减毒活疫苗生物学关键质量指标警戒限和行动限的建立与应用

 目的   建立适用于乙型脑炎减毒活疫苗（乙脑疫苗）生物学关键质量指标（critical quality attribution,CQA）的警戒限和行动限范围,开展趋势分析以及时发现异常趋势,指导疫苗生产。 方法   根据CQA的数据分布及特点,采用休哈特控制图法及阈值法建立限度范围,比较两种方法的结果,并采用适宜的限度范围对近3年的数据进行统计分析。 结果  乙脑疫苗的病毒滴度等生物学CQA数据为非正态分布,采用休哈特控制图建立的行动限范围有超出法规限的情况;而采用阈值法建立的行动限范围则均在法规限以内。采用阈值法建立的限度分析近3年乙脑疫苗各生产阶段生物学指标的状态,各指标超出行动限的点数均小于总点数的1%,表明乙脑疫苗各生产阶段处于稳定状态。 结论  阈值法为建立限度范围的适用方法;趋势分析中应结合数据本身特性与分布,选用适合的方法来建立限度标准,才能更为科学地将趋势分析工具用于指导实际生产。     

乙型脑炎减毒活疫苗单一病毒收获液在2～8℃条件下储存的稳定性研究

目的 考察在现行工艺规定的2～8℃储存条件下,乙型脑炎减毒活疫苗(乙脑活疫苗)单一病毒收获液病毒滴度的稳定性.方法 取常规生产中收获的高、中、低滴度的单一病毒收获液各6批,按正常生产程序和工艺条件储存于2～8℃,自第5天起每隔1d无菌取样,进行病毒滴定,采用极差控制图、线性回归、单因素方差分析等方法对收获液的病毒滴度结果进行统计分析.结果 常规生产中高、中、低滴度段的单一病毒收获液在2～8℃储存21 d,各单一病毒收获液的病毒滴度均呈下降趋势,并且不同滴度段病毒收获液间的日均下降滴度差异无统计学意义(F=1.67,P=0.222),总体日均下降滴度为0.036 lg蚀斑形成单位/ml.结论 掌握了单一病毒收获液在工艺规定储存条件下的滴度下降趋势及日均下降水平,为乙脑活疫苗半成品的点配制及其病毒滴度的一致性控制提供了数据支持.     

乙型脑炎减毒活疫苗生产工艺液体质量验证

 目的   对乙型脑炎（乙脑）减毒活疫苗生产过程中使用的工艺液体进行系统验证,确保其配制过程和储存过程的一致性。 方法   根据工艺液体在生产中是否接触或进入产品,确定验证主要针对8种关键工艺液体。针对制备和储存过程中影响液体质量的变量建立工艺参数,并根据液体在生产中的用途建立能反映工艺液体质量的标准。通过系统性实验收集数据来证明液体制备和储存过程工艺参数的可行性。 结果  在对8种关键工艺液体每种各3次的混合均一性验证中,每次9个样品的相对标准差均<5%,并且8种液体每种各3批在经过最长可能储存时间后,样品检定结果均符合可接受标准。 结论  验证证明了采用乙脑活疫苗关键工艺液体的制备程序能配制出均一并符合工艺要求的液体,且每种工艺液体均能在规定的储存条件下在最长储存时间内维持质量稳定,从而为质量、安全性和有效性都符合中国药典及WHO标准的乙脑活疫苗生产提供了保障。