肝再生刺激因子的提取与活性检测

肝再生刺激因子(HSS)是一类从幼年动物和动物再生状态的肝脏中提取的蛋白或多肽,具有耐热性,能特异性地促进活体和体外培养的肝细胞的DNA合成和有丝分裂。我们从67％肝部分切除术后大鼠再生肝中提取HSS,利用32％肝切术后30h大鼠肝细胞有丝分裂计数法检测了HSS的活性。 材料和方法 一、HSS的提取 1.肝大部分切除术 雄性SD大鼠,在戊巴比妥钠腹腔注射麻醉下,行左叶及中叶套扎切除术(67％肝切)。术后22—23h处死大鼠,     

移植BDNF和GDNF基因修饰的hMSCs对大鼠大脑中动脉阻塞的影响

 目的：构建脑源性神经营养因子（BDNF）和胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）基因的非病毒表达载体,用脂质体法转染人骨髓间充质干细胞（hMSCs）,观察其对大鼠大脑中动脉阻塞（MCAO）模型的影响,探索移植转基因修饰的hMSCs治疗脑血管疾病的可行性。方法：构建高效非病毒表达载体,用脂质体法转染获得高表达2种神经营养因子的hMSCs。建立大鼠MCAO模型,建模后24 h经股静脉进行转基因hMSCs移植,并以磷酸盐缓冲液(PBS)和hMSCs为对照。用脑梗死体积计算、体重变化、行为学评测等指标对大鼠脑损伤程度进行评估,通过大鼠脑组织观察和病理切片对脑组织损伤以及细胞的迁移分化情况进行分析。结果：经股静脉转基因hMSCs移植能够提高大鼠MCAO后的感觉运动功能,减小脑梗死体积,与PBS对照组相比有显著差异;与hMSCs治疗组相比,治疗效果较好且稳定。移植的细胞在脑损伤区域有少数存活但未见分化现象。结论：经静脉移植脂质体介导、GDNF和BDNF基因修饰的hMSCs,可促进缺血脑组织的损伤修复,效果较好,为非病毒载体在干细胞相关转基因治疗的应用提供了理论依据。本研究表明,MSCs的作用不依赖干细胞的分化和神经元的替换,而可能与其分泌细胞因子对抗脑损伤并促进神经修复有关,在MSCs中转入特定的外源性神经营养因子可加强这一作用。     

体外表达人重组肝细胞增强因子rhALR的分离纯化

目的：对大肠杆菌表达的人源重组肝细胞生长肽进行分离纯化获得目的蛋白rhALR。方法：其表达产物在大肠杆菌中以不溶性包含体形式存在，经过超声破菌、包含体抽提、洗涤处理、使包含体纯度达75％以上，用8mol/L尿素变性溶解包含体沉淀后上清直接稀释复性，再经浓缩、透析、离子交换凝胶过滤等系列纯化步骤。结果：纯化后目的蛋白纯度达95％以上。回收率达20％。     

促肝细胞生长素对小鼠移植肿瘤的实验研究

在肝癌移植小鼠模型成功基础上,应用pHFG对荷瘤小鼠、裸小鼠进行治疗与预防,旨在探讨pHGF在动物体内对肿瘤细胞生长行为的影响,探讨pHGF的可能作用机理.将BEL-7402肝癌细胞移植至BALB/C裸小鼠皮下,将SP_2/O骨髓瘤细胞移植至同系BALB/C小鼠皮下,将SP_2/O骨髓瘤细胞移植至同系BAL/C小鼠皮下.预防组同时皮下     

pHGF诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究

应用BEL-7402肝癌细胞及正常单层肝细胞作靶细胞,探讨pHGF及分离组分对靶细胞的影响.结果显示,pHGF对7402细胞酶代谢活性有明显抑制作用,并呈量效关系.ID50为350μg/ml,这种抑制作用非样品毒性.组分3、4对7402细胞有显著抑制活性,有效活性比pHGF高25～100倍.pHGF对单层肝细胞有酶活性激活作用,其组分1、2、5作用最为显著.表明pHGF组分中存在正向调节单层肝细胞酶活性的物质,也存在抑制7402细胞活性的负调节因子.进一步研究显示,这种抑制方式是诱发7402细胞发生程序性死亡.     

自体骨髓间充质干细胞回输治疗脑卒中30例

背景:自体骨髓间充质干细胞对神经功能缺损的修复有一定的作用,但对脑卒中的治疗作用尚缺乏较为严格的对照研究。目的:观察自体骨髓间充质干细胞回输治疗脑卒中患者的临床效果。方法:对30例要求进行自体骨髓间充质干细胞回输治疗的脑卒中住院患者予以自体骨髓间充质干细胞回输治疗,同时期30例未接受干细胞治疗的脑卒中住院患者作为对照组。用《临床神经功能缺损程度评分量表》评分作为疗效评估指标,观察治疗后6个月两组的神经功能恢复情况及其差异,并观察其安全性。结果及结论:治疗后6个月时两组《临床神经功能缺损程度评分量表》分值均下降,自身对照差异有显著性意义(P<0.05):干细胞治疗组分值下降更多,与对照组下降分值比较,差异有显著性意义(P<0.05)。提示自体骨髓间充质干细胞移植治疗脑血管病有确切效果并且安全。但有待于扩大样本量,并且严格随机、双盲、对照的临床观察进一步证实。     

肝再生增强因子的免疫组化定位及其在肝炎病患者血清水平观察

目的：探讨肝再生增强因子（ALR）的组织分布，观察肝炎病患者血清ALR的水平。方法：取鼠、人胎儿系列新鲜组织固定后，石蜡包埋切片，以SABC试剂盒进行免疫组化染色定位；用ELISA法检测肝炎病患者血清ALR水平。结果：免疫组化染色结果显示，ALR在组织细胞中呈胞浆、胞膜型分布，尤以睾丸、肝脏染色最深；慢性肝炎患者血清ALR水平升高非常显著（P<0.01），急性肝炎患者血清ALR水平升高显著（P<0.05），急、慢性肝炎患者ALR无显著差异。结论：ALR主要分布于肝脏和睾丸组织，既无种族特异性，也无器官特异性；肝脏是ALR作用的靶器官，其本身也可产生ALR。     

自体骨髓间充质干细胞回输治疗脑卒中30例

背景：自体骨髓间充质干细胞对神经功能缺损的修复有一定的作用,但对脑卒中的治疗作用尚缺乏较为严格的对照研究。 目的：观察自体骨髓间充质干细胞回输治疗脑卒中患者的临床效果。 方法：对30例要求进行自体骨髓间充质干细胞回输治疗的脑卒中住院患者予以自体骨髓间充质干细胞回输治疗,同时期30例未接受干细胞治疗的脑卒中住院患者作为对照组。用《临床神经功能缺损程度评分量表》评分作为疗效评估指标,观察治疗后6个月两组的神经功能恢复情况及其差异,并观察其安全性。 结果及结论：治疗后6个月时两组《临床神经功能缺损程度评分量表》分值均下降,自身对照差异有显著性意义(P < 0.05);干细胞治疗组分值下降更多,与对照组下降分值比较,差异有显著性意义(P < 0.05)。提示自体骨髓间充质干细胞移植治疗脑血管病有确切效果并且安全。但有待于扩大样本量,并且严格随机、双盲、对照的临床观察进一步证实。