米非司酮调控乳腺癌细胞增殖的研究

目的研究米非司酮对乳腺癌细胞系MCF-7和T47D的增殖抑制作用。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测米非司酮对乳腺癌细胞系MCF-7和T47D的半数抑制浓度(IC50)。不同浓度米非司酮(0.25、2.5、25和50μmol/L)分别处理人乳腺癌细胞系MCF-7和T47D1、2、3d后,观察细胞形态变化,以及检测各组细胞生长曲线。结果米非司酮对乳腺癌MCF-7和T47D细胞均有抑制作用,其抑制率均随着米非司酮浓度的增加而变化,存在明显的量效关系。通过对两种细胞抑制率(IR)值直线回归分析,米非司酮对MCF-7细胞的IC50为51.21μmol/L,对T47D细胞的IC50为54.29μmol/L。形态学观察发现,各组细胞体积变小,细胞间的链接消失,细胞内明显有黑色小颗粒聚集。25和50μmol/L浓度米非司酮对MCF-7乳腺癌细胞株生长抑制作用明显,特别是50μmol/L干预24h后在高倍镜下可见明显的核质浓缩。结论米非司酮对病理分型、激素受体型不同的乳腺癌MCF-7和T47D细胞均具有抑制增殖的作用,并呈时间和剂量依赖效应。     

肿瘤治疗的新型药物研究

分子生物学的发展导致抗肿瘤靶点以及抗肿瘤药物的剧增,新的靶点药物与传统细胞毒化疗药物不同,它们的特异性更强,并且副作用更少.对此,我们通过对近年来国外有关细胞信号传导类药物、细胞内信号激酶类药物、肿瘤脉管系统类药物以及表观遗传调节因子相关药物等文献进行了回顾,搜集了得到大家广泛关注的一系列的肿瘤靶点及其一些将来可能进入...     

有机磷农药中毒治疗中阿托品昏迷的判断与处理

阿托品治疗有机磷农药中毒时用量过大可引起昏迷。我们自1984年9月～1986年8月共收治有机磷中毒患者104例,其中发生阿托品昏迷13例。现就对此症的判断与处理体会报告如下。 诊断依据 1.短期内应用大剂量阿托品后患者出现烦躁、惊厥,及至昏迷而不能用其它原因解释;2.未烦躁、惊厥,直接进入昏迷并伴高热、心动过速、皮肤干燥猩     

米非司酮调控乳腺癌细胞中BRCA基因表达变化的研究

目的研究米非司酮处理乳腺癌细胞系T47D后,BRCA1和BRCA 2在mRNA水平的表达变化。方法使用不同浓度米非司酮(0.25、2.5、25μmol/L)分别处理人乳腺癌细胞系T47D 1d后,应用荧光实时定量聚合酶链反应(Realtime-PCR)的方法检测各浓度组和对照组BRCA1、2基因的表达差异。结果不同浓度米非司酮(0.25、2.5、25μmol/L)分别处理人乳腺癌细胞系T47D 1 d后,BRCA1、2基因在mRNA水平上表达均降低。米非司酮25μmol/L组分别与对照组和0.25μmol/L组比较,BRCA1基因在mRNA水平上表达均降低,且具有统计学差异(P<0.05)。与对照组比较,米非司酮2.5μmol/L组BRCA2基因在mRNA水平上表达降低,且具有统计学差异(P<0.05);米非司酮25μmol/L组分别与对照组和0.25μmol/L组比较,BRCA2基因在mRNA水平上表达降低,均具有统计学差异(P<0.01)。结论在乳腺癌细胞中,米非司酮在转录水平上调控BRCA1、2基因的表达。     

食管鳞癌RASSF1A基因启动子区甲基化研究

目的 研究肿瘤抑制基因RASSF1A启动子区甲基化所致该基因表达抑制在我国食管鳞癌发生中的作用及可能机制. 方法 用甲基化特异PCR技术(MSP)检测43例原发性食管鳞癌标本及6例对照食管上皮组织标本、食管鳞癌细胞系TE11和TE12中RASSF1A启动子甲基化状态;逆转录(RT)-PCR法检测5-氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理前后食管鳞癌细胞系中RASSF1A mRNA表达水平;Western blot方法检测食管鳞癌细胞系中细胞微管蛋白的表达. 结果 20.9%(9/43)原发性食管鳞癌标本有RASSF1A启动子超甲基化,正常食管上皮组织未发现该基因超甲基化改变.RASSF1A基因甲基化与食管癌患者的性别和TNM分期无关(P＞0.05),但在不同年龄组间的差异有统计学意义(P＜0.05).TE12细胞RASSF1A启动子发生甲基化,RT-PCR检测不到RASSF1A mRNA.TE11细胞系启动子未发生甲基化,RT-PCR检测其有RASSF1A mRNA表达.5-Aza-CdR处理可使TE12重新表达RASSF1A mRNA.TE12细胞的β-微管蛋白水平比TE11细胞低87.8%. 结论 原发性食管鳞癌存在RASSF1A启动子超甲基化,该基因甲基化与年龄相关.RASSF1A在食管鳞癌细胞系表达抑制与其甲基化状态有关.RASSF1A表达缺失可能导致β-微管蛋白减少.     

脆性X综合征分子病理及治疗研究进展

<正>脆性X综合征(FXS)是一种常见的遗传性智力低下综合征,其发病率仅次于唐氏综合征,呈X连锁遗传。FXS的发病率男性为1/4000,女性为1/6000。99%以上的FXS患者,其发病的分子遗传学基础是FXS智力低下基因1(FMR1)动态突变,使其编码的脆性X蛋白(FMRP)表达减少或者缺失。     

脆性X智力低下蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化

目的:在大肠杆菌中对脆性X智力低下蛋白(FMRP)进行重组表达,获得高产量及高纯度的可溶性重组蛋白。方法:以人脑cDNA文库为模板,PCR扩增FMR1基因后将其克隆至融合表达载体pGEX-6P-1中,重组载体转化进入大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,并用IPTG进行诱导表达。应用谷胱甘肽-琼脂糖凝胶4B进行亲和层析纯化GST-FMRP融合蛋白,并以SDS-PAGE电泳和Westernblot对融合蛋白的表达进行检测。结果:亲和纯化后的融合蛋白经FMRP及GST单抗分别进行Westernblot鉴定为GST-FMRP融合蛋白。结论:大肠杆菌中FMRPISO10的重组表达产量高,纯化得到可溶性重组蛋白,为FMRP抗体的制备及FXS检测试剂盒的开发奠定基础。     

人血管内皮生长因子在肿瘤广谱筛查和临床诊断中的应用

肿瘤的生长和转移依赖于新血管的生成（Angiogenesis）,而肿瘤新血管的生成是在肿瘤血管生成刺激因子和抑制因子的共同调控下进行的。血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）是肿瘤血管新生中最重要的刺激因子,也是目前研究最多和最广泛的课题。1994年,Kondo等人首次报道了癌症病人血清VEGF水平高于正常对照,从而开始了VEGF血液（包括血清和血浆）含量与肿瘤的发生、发展、以及治疗过程中VEGF的变化的实验性临床研究,并获得了大量的研究资料。本文收集了国内外关于“血液VEGF与肿瘤诊断”研究论文500余篇,英文文献279篇,中文文献236篇。     

血管内皮生长因子定量检测试剂盒的研制

 目的   研制血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）检测试剂盒（酶标法）。方法  以一株特异性抗VEGF单克隆抗体作为捕获抗体,另一株单克隆抗体作为检测抗体,通过棋盘滴定法确定两抗体的最佳浓度组合。制备冻干VEGF165参考品,并对样本稀释液、封闭液等实验条件进行优化。检测自制试剂盒的特异性并对其进行初步应用。结果  棋盘滴定法确定捕获抗体的质量浓度为10 μg/ml,检测抗体的稀释倍数为1:20 000。冻干VEGF165的质量浓度为720~880 pg/ml,样本间变异系数＜10%。以5%牛血清白蛋白作为封闭液和样本稀释液最为合适。自制试剂盒与10种细胞因子均无交叉反应,具有较高的特异性和灵敏度。结论  成功研制出VEGF检测试剂盒。