埃希菌全细胞转化阿糖尿苷合成阿糖腺苷

利用选择培养基从土壤中筛选到具有高核苷磷酸化酶活性的AEM0812菌株,通过16S rDNA鉴定,初步确定为埃希菌(Escherichia sp.).该菌株的最适生长温度与产酶温度均为37℃,最适产酶pH为7.5～8.0,通气培养最佳产酶的发酵时间为8～9 h.利用该菌全细胞建立了以阿糖尿苷为底物酶促合成阿糖腺苷的反应体系,成功得到阿糖腺苷.优化反应条件,并进行了100 L放大试验,结果阿糖尿苷转化率为78.17%,反应液中阿糖腺苷浓度为9.38 g/L.     

纸色谱-分光光度法测定生物转化体系中脱氧腺苷含量

目的建立纸色谱-分光光度法测定生物转化液中脱氧腺苷(dAR)含量。方法用不同极性的展开剂进行纸色谱从混合物中分离dAR,分光光度法测定分离的dAR浓度。结果测试了4种展开剂对dAR的分离效果,发现用展开剂正丁醇-异丙醇-氨水-水(3∶3∶2∶2)一次色谱可将dAR与其它成分分离。将分离并重新溶解的dAR在258 nm处测定其吸光度值,根据标准曲线即可计算出转化反应液中的产物浓度。结论该法测定结果与高效液相色谱法测定结果一致,是一种简易有效的快速测定生物转化体系中dAR含量的方法。     

固定化细胞转化脱氧胸苷合成2'-脱氧腺苷

目的选择最优的载体包埋固定化AEM0957细胞酶促催化脱氧胸苷和腺嘌呤合成脱氧腺苷。方法分别用琼脂、聚丙烯酰胺、明胶、卡拉胶、海藻酸钠、聚乙烯醇等6种材料包埋固定细菌AEM0957细胞,以此为催化剂转化脱氧胸苷合成脱氧腺苷。结果通过优化反应条件,聚丙烯酰胺固定化细胞催化脱氧胸苷的转化率可达57%,高于游离细胞反应能力,并能多次重复使用,10次重复反应的转化率仍能够保持在32%左右。结论聚丙烯酰胺在稳定性、转化性能等方面优于其它材料,该研究为脱氧腺苷的工业化生产奠定了重要基础。     

固定化细胞转化阿糖尿苷合成阿糖腺苷

采用聚乙烯醇、卡拉胶和聚丙烯酰胺为混合载体固定化埃希菌AEM0812细胞.以8.0％聚乙烯醇、1.0％卡拉胶和10％聚丙烯酰胺作为载体,菌体浓度为30％,在pH 7.0、含4.0％氯化钾的饱和硼酸溶液(成型剂)中处理36h,得相对酶活力为98.17％且较稳定的颗粒型固定化细胞,用来催化转化阿糖尿苷合成阿糖腺苷,在54℃、pH 6.5和缓冲液离子浓度120 mmol/L的最适条件下,阿糖尿苷的转化率为68％.固定化细胞连续5次反应的平均转化率约54.3％.