Fed-batch培养中补料及接种密度对RABV-G蛋白表达量的影响

目的 研究流加(Fed-batch)培养中补料及接种密度对狂犬病毒糖蛋白G(RABV-G)蛋白表达量的影响,初步建立RABV-G蛋白在重组中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中Fed-batch培养的较优工艺方案。方法 复苏培养1支能够稳定表达狂犬病毒RABV-G蛋白的重组CHO细胞,传代扩增后进行6种方案Fed-batch培养,从Fed-batch培养的第3天开始监测培养上清中目的蛋白表达量和细胞生长参数,第14天结束培养,分析比较不同策略所产生的目的蛋白表达量。结果 本研究方案6中5%的Feed1补料及0.5×10⁶cells/ml的起始接种密度在Fed-batch培养第14天,糖蛋白表达量达150 mg/L,显著高于其余5种方案,确立为优选方案。结论 本研究建立了RABV-G蛋白在重组CHO细胞中流加(Fed-batch)培养的较优工艺方案,为重组狂犬病毒疫苗生产工艺研究提供基础。     

单克隆抗体药物治疗自身免疫性疾病研究进展

自身免疫性疾病（AID）是一种可以对自身抗原发生免疫反应从而导致的疾病,给患者带来了极大的痛苦。治疗AID的传统疗法多采用激素或免疫抑制剂等,虽然可以在一定程度上减轻病症,但无法根治,并且长期用药会引起巨大的副作用。近年来,对单克隆抗体的广泛研究,使得单克隆抗体药物成为治疗AID的首要选择。单克隆抗体通过不同的作用机制,作用于不同的靶点,靶向性引起自身免疫应答治疗各种自身免疫性疾病,并且随着对单克隆抗体不断地深入研究,越来越多的全人源性单克隆抗体药物的上市应用,将单克隆抗体治疗AID推向新的起点。本研究就单克隆抗体药物治疗五种AID的研究进展做一综述。     

TaqMan荧光定量PCR法检测CHO细胞中外源基因拷贝数的方法建立

目的 以β₂-微球蛋白(B2M)为内参基因,建立一种检测CHO细胞中外源基因H拷贝数的TaqMan荧光定量PCR方法。方法 使用含有目的基因H和内参基因B2M的质粒作为标准品,分别建立目的基因H和内参基因B2M的标准曲线。提取重组CHO细胞基因组DNA,并对所提基因组中目的基因H和内参基因B2M的拷贝数同时进行q PCR检测。结果 成功建立了目的基因H和内参基因B2M的标准曲线,扩增效率分别为92.09%和94.96%。标准曲线的相关系数均在0.99以上,且具有良好的重复性。随着细胞传代的增加,目的基因的拷贝数相对稳定。结论 成功建立了TaqMan荧光定量PCR法检测CHO细胞中外源基因拷贝数的方法,该方法可用于外源基因在CHO细胞中的遗传稳定性研究。     

抗CD47抗体Hu5F9真核表达载体构建与表达

目的 在CHO-S细胞中表达抗白细胞分化抗原47(CD47)抗体Hu5F9,并对抗体纯化后进行鉴定。方法 将编码Hu5F9抗体轻、重链基因构建至真核表达载体,瞬转CHO-S细胞进行表达,取细胞上清检测后利用其人源Fc标签纯化抗体蛋白,并进行Western blot鉴定。结果 经双酶切及基因测序验证Hu5F9载体构建成功,细胞上清经SDS-PAGE检测,可见抗体轻链、重链和完整抗体条带,抗体纯化后Western blot鉴定结果显示条带大小与预期一致。结论 在CHO-S细胞中成功表达了抗CD47抗体Hu5F9,为后续的药物研发提供研究依据。     

HD-BioP3细胞电转染条件的优化

目的 优化HD-BioP3细胞的电转染条件，提高HD-BioP3细胞的电转染效率。方法 使用电转染的方法将GFP质粒转入HD-BioP3细胞内，对电转染缓冲液、电转染温度和电转染质粒量3个因素进行优化，24 h后通过全自动荧光细胞分析仪检测细胞活率及电转染效率。结果 3个因素中，电转染缓冲液对电转染效率影响最大，其次为电转染质粒量，电转染温度影响最小。在EX-CELL^?CD CHO Fusion作为电转染缓冲液、电转染温度为4℃、电转染质粒量为30μg的条件下，电转染效果最好。结论 优化HD-BioP3细胞的电转染条件，可为研究外源基因电转染HD-BioP3细胞提供基础数据。