关于利用精子作基因转移载体的质疑

Lavitrano等于1989年首次报道,利用精子作为转基因载体成功地将外源基因导入小鼠卵。然而这一结果却没有被其他学者证实,1990年Castro等报道外源DNA可以进入牛和猪的精细胞。本研究将牛、猪的鲜精用DNA处理后人工授精。对出生的后代用Southern方法鉴定外源基因的整合。     

荧光试剂法测定小鼠受精卵胞质游离Ca~(2 )

目的通过测定小鼠卵细胞受精过程中胞质游离Ｃａ２＋浓度的变化，研究其变化规律及在胚胎早期发育中的作用。方法采用Ｃａ２＋特导荧光试剂Ｆｕｒａ－２／ＡＭ和ＡＲ－ＣＭ－ＭＩＣ型单细胞阳离子测定系统，测定了休止于第二次成熟分裂中期（ＭⅡ）的小鼠卵母细胞受精过程中的胞质游离Ｃａ２＋浓度。结果小鼠卵受精过程中胞质游离Ｃａ２＋浓度发生波动或振荡。结论这对胚胎发育的早期研究有一定意义     

受精和人工激活诱导的小鼠卵内游离钙离子变化

目的：研究哺乳类动物卵母细胞激活机制，方法：将休止于第二次成熟分裂中期的小鼠卵母细胞负载Ｆｕｒａ２－ＡＭ后用乙醇，钙离子载体，电脉冲或受精等激活，采用ＳｐｅｘＡＲ－ＣＭ－ＭＩＣ阳离子检测系统测定卵激活过程中细胞内游离Ｃａ＾２＋浓度变化；电镜下检测卵激活后皮质颗粒释放，结果在含Ｃａ＾２＋（１．７ｍｍｏｌ．Ｌ＾－１）的ＩＶＦ液中，精子受精诱发卵内Ｃａ＾２＋浓度波动，这种Ｃａ＾２＋波动持续达３－４ｈ直到     

受精和人工激活诱导的小鼠卵内游离钙离子变化(英文)

目的:研究哺乳类动物卵母细胞激活机制。方法:将休止于第二次成熟分裂中期的小鼠卵母细胞负载Fura 2-AM后用乙醇,钙离子载体,电脉冲或受精等激活;采用Spex AR-CM-MIC阳离子检测系统测定卵激活过程中细胞内游离Ca~(2 )浓度变化;电镜下检测卵激活后皮质颗粒释放。结果:在含Ca~(2 )(1.7mmol·L~(-1))的IVF液中,精子受精诱发卵内Ca~(2 )浓度波动,这种Ca~(2 )波动持续达3—4h直至受精卵发育至原核期消失。当外Ca~(2 )升高至5.0mmol·L~(-1)时Ca~(2 )波动加快;去除外Ca~(2 )后Ca~(2 )波动很快消失;将卵移入含Ca~(2 )IVF后又恢复Ca~(2 )波动。出现Ca~(2 )波动的卵随后均排出第二极体并形成原核。胞内注射Ca~(2 )螯合剂依他酸(200μmol·L~(-1))抑制受精诱导的Ca~(2 )波动则阻止卵激活。胞内注射肝素(MW=3500,100μmol·L~(-1))不能阻止受精Ca~(2 )波动。乙醇,钙离子载体和1次电脉冲刺激诱导卵内Ca~(2 )浓度升高1次并且仅诱导大龄卵(>18h CG)激活。刚排出卵的激活则需要[Ca~(2 )]_i多次升高诱导。人工激活诱导卵出现与受精相似的皮质颗粒释放。卵内注射Ca~(2 )螯合剂抑制[Ca~(2 )]_i升高则阻断卵激活的一系列反应。结论:细胞内游离Ca~(2 )升高是诱导卵激活的重要信号;受精与人工激活诱导的[Ca~(2 )]_i升高及Ca~(