基于PCR-核酸试纸条快速鉴定鹿茸及其伪品的实验研究

目的 通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)与核酸试纸条相结合的方法,实现鹿茸真伪的可视化检测。方法 采用十二烷基硫酸钠(sodium dodecylsulfate, SDS)碱变性法提取正品及伪品鹿茸样品基因组DNA,通过查找细胞色素C氧化酶亚基I(COI)特异性位点,应用Primer 3.0软件设计鹿茸特异引物,摸索PCR最佳反应体系及条件,建立PCR-核酸试纸条及琼脂糖凝胶电泳鉴定鹿茸真伪的最优条件。同时,通过克隆测序,验证鹿茸真伪鉴定的准确性。结果 本实验中正品鹿茸在PCR-核酸试纸条上均出现两条带,阴性对照及伪品出现一条带,与琼脂糖凝胶电泳结果吻合,且试纸条检测的灵敏度可达1 ng·μL^-1。对9个市售鹿茸样品检测,正品鹿茸5个,合格率为45%。结论 自主构建的PCR-核酸试纸条检测方法简单、快速、特异性较好,可在较短时间内实现鹿茸真伪的可视化检测,检测结果稳定,为中药材鉴定提供又一新的方法。     

PCR-核酸试纸条检测方法鉴别蛤蚧真伪

目的:蛤蚧为我国的名贵中药材,建立PCR-核酸试纸条检测方法对蛤蚧进行定性鉴别。方法:通过碱裂解法提取蛤蚧及其伪品的基因组DNA,以蛤蚧细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(CoⅠ)为靶基因,设计特异性引物,确定合适的PCR-核酸试纸条反应体系以及反应条件。结果:通过PCR-核酸试纸条对蛤蚧进行定性分析,正品蛤蚧在PCR-核酸试纸条上均出现2条带,伪品以及阴性对照均出现1条带。结论:PCR-核酸试纸条检测方法可实现短时间内蛤蚧可视化检测,操作方便,结果准确,可以为蛤蚧的DNA分子鉴别提供技术保障。     

应用多重PCR技术鉴别3种肾源性中药的实验研究

目的 建立一种应用多重聚合酶链式反应(PCR)技术鉴别3种肾源性药品的方法。方法 提取梅花鹿、驴、犬3个物种肾组织的基因组DNA,通过多重PCR对梅花鹿、驴、犬的特异性片段进行扩增,鉴别样品中是否含有梅花鹿、驴、犬3种动物源性成分。结果 通过对特异性片段的PCR扩增,可同时将梅花鹿、驴、狗的肾与其他物种进行区分。结论 本研究建立了一种基于多重PCR技术的快速、准确的同时鉴别梅花鹿、驴、犬3个物种肾源性药品方法,为解决药用性产品易混、难以鉴定的问题提供了又一个新方法。     

蛤蚧真伪鉴定试剂盒的研制与性能评价

目的 蛤蚧作为我国的名贵中药材，资源少，市场需求量大，导致市场常有混伪品出现，因此研制蛤蚧真伪鉴定试剂盒，为蛤蚧药材鉴定提供新的方法。方法 以蛤蚧细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(CoⅠ)为靶基因，设计特异性引物，确定合适的PCR反应条件，研制蛤蚧真伪鉴定试剂盒。结果 扩增产物经过琼脂糖凝胶电泳后，正品可以扩增出约250～500bp之间(473bp)的扩增条带，而伪品无蹼壁虎和石龙子均没有条带。结论 研制出的蛤蚧真伪鉴定试剂盒特异性强，灵敏度高，重复性好，适用范围广，操作简单，结果准确，可以为蛤蚧的DNA分子鉴别提供技术保障，可以保证药源无误，药效可靠。