三种西药制剂微生物限度检查方法适用性试验的研究

目的建立复方氨酚烷胺胶囊、复方盐酸普鲁卡因胶囊和诺氟沙星胶囊三种制剂的微生物限度检查方法。方法按照2015年版《中国药典》四部的规定测定三种制剂对5个试验菌株的回收比值,并进行控制菌检查的方法适用性试验。结果复方氨酚烷胺胶囊与复方盐酸普鲁卡因胶囊均采用稀释法(1∶100)+薄膜过滤法(500mL/膜)进行需氧菌总数的测定,诺氟沙星胶囊采用稀释法(1∶100)+中和剂法+薄膜过滤法(500mL/膜)进行需氧菌总数的测定;三种制剂均采用平皿法(1∶10)进行霉菌和酵母菌总数的测定;复方氨酚烷胺胶囊采用薄膜过滤法(1∶20,冲洗500mL)、复方盐酸普鲁卡因胶囊采用常规法、诺氟沙星胶囊采用中和剂法+薄膜过滤法(1∶20,冲洗800mL)进行控制菌大肠埃希菌的检查。结论上述方法可作为三种制剂的微生物限度检查方法。     

连作和轮作模式下杭白菊土壤理化性质及细菌多样性的差异

目的:通过研究杭白菊在不同模式下根际土壤部分理化性质及细菌多样性的差异来揭示轮作的优势以及土壤因子的作用。方法:分别利用电极法、低温外热重铬酸钾氧化-比色法、苯酚-次氯酸钠比色法、磷酸苯二钠比色法测定土壤pH值、有机质、脲酶和磷酸酶活性;同时,对土壤微生物总基因组DNA进行PCR-变性凝胶梯度电泳(DGGE),分析土壤细菌的多样性。结果:种植杭白菊的土壤pH在5.95～6.91之间,均呈弱酸性;轮作土壤的有机质和酶活性基本大于连作模式且种植地呈逐年上升趋势;多样性分析结果表明轮作的Shannon指数、均匀度和丰富度指数均大于连作,体现出比连作更高的微生物多样性;主成分分析(PCA)显示出连作和轮作土壤的细菌多样性明显各聚为一类;在pH、有机质、酶活、Shannon指数的相关性分析中pH与磷酸酶,磷酸酶与Shannon指数显著正相关,相关系数分别为0.83(P0.01)和0.47(P0.05),其余理化性质之间无显著相关性。结论:在连作和轮作模式下,杭白菊根际土壤理化性质及细菌多样性均存在较大差异,究其原因,可能是根分泌物的影响所致。与连作相比,轮作的杭白菊根际体现出更高的土壤肥力以及生物多样性水平,从而有利于杭白菊的优质高产。     

去甲斑蝥素通过下调c-met基因逆转肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药的研究

目的 本研究通过去甲斑蝥素（NCTD）作用于肺癌顺铂（DDP）耐药细胞A549/DDP,探讨其对DDP耐药的逆转作用及其相关机制。方法 应用CCK-8法检测NCTD对A549和A549/DDP细胞活力的影响、DDP对A549细胞和A549/DDP的半数抑制浓度（IC₅₀）、NCTD联合不同浓度DDP对A549/DDP细胞DDP耐药性的影响;细胞克隆形成实验检测NCTD、DDP单给药及NCTD与DDP联合用药对A549/DDP细胞克隆形成率的影响;Western blotting法检测A549/DDP和A549细胞中c-met表达,以及NCTD、DDP单给药及NCTD与DDP联合用药对A549/DDP细胞内c-met蛋白表达的影响。结果 NCTD剂量相关性地抑制A549和A549/DDP细胞的活力,选择抑制率小于10%的最大NCTD浓度即10 μmol/L作为逆转浓度;DDP作用于A549/DDP和A549细胞的IC₅₀分别为15.11和5.04 μmol/L,差异有统计学意义（P<0.01）;A549/DDP细胞中c-met表达明显高于A549细胞;用NCTD（10 μmol/L）处理后,DDP对A549/DDP细胞的IC₅₀从15.11 μmol/L减少到8.06 μmol/L,差异显著（P<0.01）;与DDP单给药组比较,NCTD联合DDP作用明显降低A549/DDP细胞克隆形成率（P<0.01）;Westernblotting结果显示,NCTD联合DDP作用明显抑制顺铂耐药细胞A549/DDP细胞中c-met蛋白的表达,单用DDP或NCTD与对照组比较差异不明显。结论 NCTD与DDP联用可逆转A549/DDP细胞对DDP耐药,其机制可能与抑制c-met蛋白表达有关。     

浙贝母中内生菌的多样性及组成分析

[目的]研究浙贝母器官内生菌群,以期探明浙贝母道地性的形成机制,为开发其潜在的内生菌资源提供理论依据.[方法]本实验用PCR-变性凝胶梯度电泳（DGGE）对浙贝母的根、鳞茎、地上茎以及叶中的内生菌多样性和组成进行了检测和分析.[结果] DGGE结果表明,浙贝母不同器官中的内生菌多样性和结构均有差异.根部条带明显比其它器官多,内生细菌多样性指数最高（2.69）,而且出现不少特异性条带;茎中的细菌多样性为2.44;叶中最低,仅2.21.测序结果表明,浙贝母中的内生细菌主要为蓝细菌、根瘤菌、睾丸酮假单胞菌、伯克氏菌属和燕麦噬酸菌,后两种菌均为β-变形菌,该菌的存在可能会对浙贝母的生长产生不利影响,而根瘤菌和丛毛单胞菌则对其生长有利.根部特异性细菌包括蓝细菌（B4）、伯克氏菌属（B23）、根瘤菌（B5、B24）以及3种不可培养细菌（B6-B8）.与细菌相比,内生真菌DGGE图谱在不同器官之间的差异更小,大部分为共有条带,只是亮度有差异.当然也有特异条带,如曲霉属（F10）仅在鳞茎中出现.镰孢菌属（F11）以及2种不可培养的真菌（F5、F6）为根部特有.与细菌不同,地上茎中的真菌Shannon指数最高（2 82）,其次是鳞茎和根,叶最低2.53.利用DGGE检测到浙贝母的内生真菌主要为侧齿霉、镰孢霉和曲霉,而利用传统方法还分离到交链孢霉、青霉、拟茎点霉、葡萄孢、卵形孢霉、枝链孢霉、毛壳菌、丝核菌以及束丝菌等属,说明对浙贝母而言,传统方法更适合.[结论]浙贝母不同器官中内生细菌和真菌的多样性及组成均存在差异,但地下鳞茎和地上茎差异较小;真菌的器官差异不如细菌明显.浙贝母内生菌的分布跟其它植物明显不同,其菌群组成主要取决于浙贝母宿主植物本身.不同的内生菌占据不同生态位,执行不同功能,有的对促进浙贝母的生长,而有的则影响生?     

紫草素逆转由肝细胞生长因子诱导的肺癌吉非替尼耐药

目的:研究肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)诱导人肺癌HCC827细胞对吉非替尼的耐药以及紫草素(shikonin)逆转此耐药作用的可能机制。方法:体外培养HCC827细胞,分别采用不同浓度的紫草素和吉非替尼单独/联合作用,MTT法检测细胞活力,并计算吉非替尼的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50)); Transwell小室实验检测紫草素对HGF诱导的吉非替尼耐药HCC827细胞侵袭能力的影响; Western blot检测HGF诱导的吉非替尼耐药HCC827细胞中上皮间质转化(EMT)及相关信号通路蛋白水平的变化。结果:随着给药剂量的增加,紫草素对HCC827细胞的生长抑制率显著上升(P 0. 05),并呈一定的剂量依赖关系,其IC_(50)为3. 06μmol/L。肺癌吉非替尼敏感细胞HCC827对吉非替尼的IC_(50)为0. 51μmol/L。利用不同浓度的HGF诱导吉非替尼耐药,发现20μg/L HGF诱导耐药最为明显,在外源性HGF存在的情况下,HCC827细胞对吉非替尼的IC_(50)为12. 71μmol/L。紫草素能逆转由HGF诱导的吉非替尼耐药(P 0. 05)。Transwell小室实验结果显示,与对照组相比,HGF组能显著提高肺癌HCC827细胞的侵袭能力;同时,紫草素联合吉非替尼作用组则明显抑制由HGF诱导的侵袭(P 0. 01)。Western blot实验结果显示,HGF可诱导HCC827细胞发生EMT,使细胞中E-cadherin蛋白表达下调,vimentin蛋白表达上调,紫草素则能逆转EMT的发生(P 0. 01)。此外,HGF组可激活细胞中AKT蛋白的磷酸化;紫草素联合吉非替尼作用组则能明显抑制由HGF激活的AKT蛋白磷酸化水平(P 0. 01)。结论:紫草素能逆转由HGF诱导肺癌HCC827细胞的吉非替尼耐药,其分子机制可能与逆转EMT和抑制AKT蛋白通路的磷酸化水平有关。     

HPLC法同时测定布洛芬混悬液中6种合成色素方法的建立

目的 建立一种布洛芬混悬液中合成色素的HPLC测定方法 .方法采用直接稀释法处理样品,采用HPLC测定含量.色谱柱为C18柱(250mm×4.6mm,5μm);以甲醇-0.02mol·L-1乙酸铵溶液为流动相,采用梯度洗脱;检测波长为254nm;柱温30℃;进样量:20μL;流速1.0mL·min-1.结果 苋菜红浓度在1.00~25.02mg·L-1、胭脂红浓度在1.15~28.70mg·L-1、柠檬黄浓度在1.23~30.64mg·L-1、日落黄浓度在0.99~24.77mg·L-1、赤藓红浓度在1.06~26.59mg·L-1、诱惑红浓度在1.23~30.64mg·L-1范围内与峰面积线性关系良好(r≥0.9997),平均回收率分别为99.2%、99.4%、99.6%、100.2%、98.5%、99.1%(RSD≤2.2%;n=6).结论 该方法操作简便、快速、准确、重复性好、灵敏度较高,可用于布洛芬混悬液中的6种合成色素的同时测定.