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目的制备本课题组报告的肝癌相关抗原Kinectin的多克隆抗体,并鉴定其免疫学特性。方法以本课题组前期构建的人MBP-Kinectin融合片段重组质粒为基础,原核表达和亲和层析大量纯化MBP-Kinectin融合蛋白,并免疫新西兰兔制备多克隆抗体;用间接ELISA法测定抗体效价,用Western blot鉴定抗体的特异性。同时用Kinectin多克隆抗体检测Kinectin在正常成人肝细胞HL-7702和人肝癌细胞株SMMC-7721内的表达。结果通过免疫新西兰兔获得抗Kinectin抗体,ELISA测定纯化的Kinectin抗体效价最高为1∶12 800,Western blot结果显示Kinectin抗体具有较好的特异性。免疫细胞化学和western blot检测发现Kinectin蛋白在肝癌细胞株内的表达显著高于正常成人肝细胞株。结论制备的抗Kinectin抗体具有较高的效价和特异性,能满足Western blot和免疫细胞化学检测Kinectin蛋白的要求,为进一步深入研究Kinectin在肝癌发生发展中的作用奠定基础。 相似文献
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背景:Kinectin作为树突状细胞瘤苗可运用于肝癌临床免疫治疗.目的:检测kinectin-麦芽糖结合蛋白融合蛋白致敏的树突状细胞刺激T细胞亚群的分化情况.方法:运用免疫组化法检测kinectin-麦芽糖结合蛋白孵育的树突状细胞刺激增殖的T细胞中CD4+、CD8+ T细胞亚群活化情况,同时设立麦芽糖结合蛋白组、非致敏树突状细胞组及普通培养T细胞组作为比较.结果与结论:Kinectin-麦芽糖结合蛋白致敏树突状细胞刺激的T细胞组CD8+T细胞明显高于麦芽糖结合蛋白孵育树突状细胞刺激的T细胞组、非致敏树突状细胞刺激组及普通培养T细胞组(P < 0.05);各组CD4值之间、CD4/CD8值之间比较,差异无显著性意义(P > 0.05).经Kinectin-麦芽糖结合蛋白融合蛋白致敏的树突状细胞能有效刺激自体CD8+ T淋巴细胞的增殖,Kinectin-麦芽糖结合蛋白作为肝癌相关抗原可通过致敏树突状细胞发挥较明显的抗肿瘤功能. 相似文献
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目的 探讨肝癌相关抗原Kinectin基因重组蛋白Kinectin-MBP(MBP,麦芽糖结合蛋白)致敏树突状细胞(DCs)体外诱导特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)对肝癌细胞株的杀伤作用.方法 体外基因工程的方法表达、纯化Kinectin-MBP.从正常人外周血中分离单个核细胞(PBMC),重组人粒细胞-巨噬细胞集落因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素4(rhIL-4)联合培养,诱导扩增DCs,并通过形态学、流式细胞术鉴定DCs.DCs经Kinectin-MBP致敏后,ELISA检测细胞上清液中IL-12和IFN-γ的含量;将致敏DCs与自体T淋巴细胞混合培养后,MTT法检测T细胞增殖的能力;同时诱导T细胞增殖转化为CTL,以此CTL为效应细胞,Kinectin表达阳性的肝癌细胞株bel-7404为靶细胞,LDH 4 h释放法检测CTL对肝癌细胞株的杀伤作用.结果 体外重组蛋白技术成功表达、纯化出Kinectin-MBP.PBMC经rhGM-CSF和rhIL-4联合诱导,可成功培养出DCs.DCs经Kinectin-MBP致敏后上清液中IL-12和IFN-γ的分泌量明显增高,且刺激自体T细胞增殖的能力也显著增强;同时Kinectin-MBP致敏的DCs能明显诱导CTL的增殖,此CTL对Kinectin阳性的7404肝癌细胞株有较明显的杀伤作用,其杀伤率在效靶比为25∶1时达最高峰[为(65.00±1.47 )%],显著高于其他对照组(均P <0.001).结论 体外诱导扩增的DCs经肝癌相关抗原Kinectin-MBP致敏后具有较强的刺激自体T细胞增殖的能力,且在体外可诱导同种CTL产生和增殖,后者对Kinectin阳性的7404肝癌细胞株具有较强的杀伤效应.该实验为将Kinectin蛋白运用于以DCs为基础的肝癌临床免疫治疗奠定了基础. 相似文献
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赵飞兰 《广西中医学院学报》2008,11(2):116-117
组织学属于医学形态学科,实验教学是该学科的重要环节。多年来传统的实验教学模式在组织学实验中发挥了重要作用。但是我们不能否认,随着现代社会对创新性人才需求的不断增长,传统教学模式已跟不上社会发展的步伐。因为实验教学的目的除了培养学生的基本实验操作技能和理论与实践相结合的能力外,更主要的,要培养出具有开拓创新意识的实用性医学精英人才。 相似文献
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目的通过观察参附注射液对大鼠心脏骤停/心肺复苏(CA/CPR)模型的脑组织Nogo1-NgR通路的影响及大鼠脑神经功能的变化情况,研究参附注射液阻断Nogo1-NgR通路促进心肺复苏后大鼠神经功能恢复的机制。方式将制备成功CA/CPR模型大鼠随机分为4组:常规西医组、假手术组、拮抗剂组、参附组,每组30只,另选30只健康大鼠为空白对照组。空白对照组不实行CA/CPR,每日上下午各给予生理盐水(2.1 mL/kg)颈外静脉注射1次;常规西医组在CA/CPR时应用西药肾上腺素、多巴胺等及亚低温处理;其他各组在常规西医组处理的基础上于CPR后1 h开始给予颈外静脉注相应剂量(2.1 mL/kg)药物干预:假手术组予注射生理盐水,拮抗剂组使用Nogo拮抗剂,参附组使用参附注射液,每日2次,连续1周。常规西医组、拮抗剂组、参附组统称为用药组。各组分别于CPR后24 h、3 d、7 d随机选择10只大鼠进行神经功能评分,并采用Western Blot法观察NgR在各组大鼠中海马以及皮层的表达情况。结论 Western Blot显示,在空白对照组的海马及皮层组织中均有少量NgR表达。在海马组织中,经... 相似文献
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