藏药二十五味鬼臼丸对金黄色葡萄球菌的抑菌作用及机制研究

目的 研究藏药二十五味鬼臼丸对金黄色葡萄球菌的抑菌作用,初步探讨相关抑菌机制。方法 采用琼脂平板打孔法,测定二十五味鬼臼丸（50、100、200mg·mL^-1）对金黄色葡萄球菌的抑菌圈大小。通过微量肉汤稀释法,测定最小抑菌浓度（MIC）。调整肉汤培养基中的二十五味鬼臼丸浓度为0.5MIC、1.0MIC和2.0MIC,分别加入1.0×10⁸CFU·mL^-1菌悬液,以不含药液而含菌量相同的培养基作为对照组,在37℃、120r·min^-1恒温培养箱中振荡培养,每小时取样,用紫外可见分光光度计在600nm处测定吸光度（A₆₀₀）值,绘制细菌的生长曲线;每2小时取样,离心取上清液,试剂盒法测定碱性磷酸酶（AKP）活性;每小时取样,离心取上清液,用紫外可见分光光度计在260nm处测定A₂₆₀值,以A₂₆₀值表示DNA/RNA大分子相对量;每小时取样,离心取上清液,加入考马斯亮蓝G250溶液,于595nm处测定A₅₉₅值,检测胞外可溶性蛋白含量;培养8h后,离心留沉淀,进行SDS-PAGE电泳,检测菌体蛋白含量。结果 二十五味鬼臼丸50、100、200mg·mL^-1对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径分别为（12.33±0.75）、（16.33±0.41）、（19.17±0.68）mm;对金黄色葡萄球菌的MIC为100mg·mL^-1;与对照组相比,二十五味鬼臼丸组的金黄色葡萄球菌生长显著减缓（P＜0.05）,胞外的AKP活性显著升高（P＜0.05）,胞外DNA/RNA大分子相对量显著升高（P＜0.01）,胞外可溶性蛋白含量显著升高（P＜0.01）,菌体总蛋白表达量明显减少。结论 二十五味鬼臼丸对金黄色葡萄球菌具有抑菌作用,其抗菌作用可能与致细菌细胞壁、细胞膜结构破损,且对菌体蛋白具有一定抑制作用有关。     

基于三代测序技术对中药灵芝和食用菌rRNA基因及其基因间序列的鉴定研究

目的：基于三代PacBio测序技术,建立中药灵芝和食用菌rRNA 18S-ITS-28S全长序列文库,从分子水平快速、准确鉴定和研究品种。方法：对收集到的8种食用菌和1种中药材真菌灵芝抽提基因组DNA,设计引物扩增18S-ITS-28S全长序列,18S-ITS-28S全长序列包括连续且完整的18S rRNA-ITS1-5.8S rRNA-ITS2和28S rRNA部分序列,其总长度>3.3 kb。将18S-ITS-28S全长序列进行建库和三代PacBio测序。结果：食用菌和药用灵芝的18S rRNA、5.8S rRNA及部分28S rRNA基因序列相似度高且序列保守,而rRNA基因间（ITS1和ITS2）的序列差异性大。结论：本研究的结果提示,分析rRNA基因间（ITSs）区域,而不是仅仅分析rRNA基因,有助于真菌类中药材的鉴定和研究。     

基于Nrf2/HO-1通路探讨二十五味鬼臼丸对宫颈炎大鼠的治疗作用及机制

目的 研究藏药二十五味鬼臼丸对苯酚胶浆致宫颈炎模型大鼠的治疗作用及机制。方法 将雌性SD大鼠48只随机分为对照组、模型组及二十五味鬼臼丸低、中、高剂量（0.2、0.4、0.8 g·^kg-1）组和抗宫炎片（0.47 g·^kg-1）组，每组8只。除对照组外，其余5组建立25%苯酚胶浆致宫颈炎大鼠模型，各药物组分别以相应药物ig给药，每日1次，连续给药12 d后取材。观察大鼠外阴炎症程度评分、子宫指数、子宫解剖形态学改变；采用苏木精-伊红（HE）染色观察大鼠子宫组织病理学改变；采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测子宫组织中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量变化；采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法和蛋白免疫印迹（Western blotting）法检测子宫组织中核因子E2相关因子（Nrf2）、血红素氧合酶-1（HO-1）、NADPH氧化酶4（Nox4）的mRNA和蛋白表达情况。结果 与对照组比较，模型组大鼠外阴炎症评分、子宫指数、子宫组织中MDA水平、Nox4的mRNA和蛋白表达均显著升高（P＜0.01），体质量、SOD活性、Nrf2、HO-1的mRNA和蛋白表达均显著降低（P＜0.01），子宫组织出现不同程度的病理变化；与模型组比较，二十五味鬼臼丸能明显降低外阴炎症评分、子宫指数、子宫组织中MDA水平、Nox4的mRNA和蛋白表达（P＜0.05、0.01），升高体质量及子宫组织中SOD活性和Nrf2、HO-1的mRNA和蛋白表达（P＜0.05、0.01），减轻子宫颈炎症损伤程度。结论 二十五味鬼臼丸可能通过抑制Nox4的表达，激活Nrf2/HO-1通路，发挥抗氧化作用，减轻炎症反应，从而抑制宫颈炎发展。