白藜芦醇通过上调小鼠胚胎干细胞过氧化物酶体增殖激活受体γ共激活子1α表达促进其分化为心肌细胞

目的观察白藜芦醇对小鼠胚胎干细胞(ESC)分化为心肌细胞的调节作用,并探讨其机制。方法 采用悬滴悬浮培养法培养ESC。白藜芦醇0.44,4.4和44μmo.lL-1处理ESC 96 h。光学显微镜下记录每组自发心肌搏动数;透射电镜观察细胞内线粒体结构;实时PCR方法测定α-肌球蛋白重链(α-MHC)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、PPARγ共激活子1α(PGC-1α),核呼吸因子-1(NRF-1)、线粒体转录因子A(mtTFA)和线粒体呼吸链复合体Ⅳ(COXⅣ)的基因表达;Western蛋白印迹法检测PPARγ,α辅肌动蛋白和PGC-1α蛋白表达。结果 与正常对照组相比,白藜芦醇0.44和4.4μmo.l L-1可增加ESC细胞分化为自发搏动的心肌细胞数,并明显上调分化的ESC心肌特异性基因α-MHC表达,约分别为正常对照组的5.6和3.7倍;上调心肌细胞特定标识蛋白α辅肌动蛋白的表达,约为正常对照组的1.7和2.1倍;提示白藜芦醇可以促进ESC分化为心肌细胞。白藜芦醇干预各组均可上调PPARγ基因和蛋白表达,同时白藜芦醇0.44和4.4μmo.lL-1可以明显上调线粒体生物合成相关因子基因表达;白藜芦醇4.4μmo.lL-1处理组线粒体数目增多,提示线粒体生物合成可能是ESC分化为心肌细胞的重要机制。结论 白藜芦醇可以通过激动PPARγ受体并上调由PGC-1α介导的线粒体生物合成,从而促进ESC分化为心肌细胞。     

促性腺激素释放激素在雌二醇诱导的大鼠青春期启动提前中的作用

目的探讨促性腺激素释放激素(Gn RH)在雌二醇(E2)诱导大鼠青春期启动提前中的作用。方法 18日龄雌性SD大鼠分别经口给予玉米油和E250μg·kg-1,连续给药5 d。观察大鼠阴道开口时间及卵巢组织变化;Western蛋白印迹法检测下丘脑的Gn RH、G蛋白偶联受体54(GPR54)和磷脂酶C(PLC)蛋白表达水平。结果与玉米油对照组相比,E2组大鼠阴道开口时间显著提前约12.2 d(P<0.01)。卵巢组织切片可见黄体,且下丘脑Gn RH,GPR54和PLC蛋白表达水平分别增加47%,55%和56%(P<0.05)。结论 E2诱发的大鼠青春期启动时间提前可能与调节下丘脑Gn RH,GPR54和PLC表达相关。     

基于人胚胎干细胞健康安全评价体系的构建

食品、药品、医疗器械和材料、生物制剂以及环境的质量和健康安全是政府和民众十分关注的热点问题。目前国际标准的健康安全评价检测方法以微生物、动物及其细胞作为载体,不能准确反映人类的生物学特征,预测人体心、肝等靶器官毒性及发育毒性的准确率偏低,在技术层面严重制约了人类健康安全的评价和监控。如何建立准确反映人类生物学特征的健康安全评价体系是关系国民健康安全的重大科学问题［1］。 人类胚胎干细胞（human embryonic stem cells, hESCs）可真实反映人类生物学特征,并利用其无限增殖和定向分化的特点,可达到检测载体的高度标准化,hESCs技术的发展为体外健康安全评价体系的升级提供了有力支持。 由北京大学牵头,联合浙江大学、中国医学科学院整形外科医院和军事医学科学院,与新加坡国立大学合作,我们完成了科技部国际科技合作一期项目“基于人胚胎干细胞健康安全评价新载体的构建”,并就相关研究成果作为科研工作综述进行发表［2］。在此基础上,合作团队顺利完成了二期项目“创建人胚胎干细胞健康安全预测新体系”,取得了系列成果,现综述如下。     

糖网明目颗粒对大鼠长期毒性研究

目的：观察大鼠连续灌胃给予糖网明目颗粒26周的毒性反应、程度及可逆性。方法连续灌胃给予SD大鼠糖网明目颗粒26周（以8．4、4．2和2．1 g／kg的高、中、低3个剂量给药3周,后调整为14．0、8．4和4．2 g／kg的高、中、低剂量给药23周）,另设溶剂对照组（蒸馏水）,每组40只;每天观察大鼠一般状态、体征、饮食情况及尿、粪便,每周称体质量1次并计算摄食量;给药中期（13周）、给药结束（26周）及恢复期（4周）后进行血液学、血液生化学、血凝指标及病理组织学检查。结果与同期对照组相比,给药期间高、中、低剂量组雄性动物体质量出现小幅降低,高、中剂量组摄食量出现降低（P＜0．05）;高剂量MCHC、ALT、TBIL和Na＋出现降低（P＜0．05）,TP、ALB和D-BIL增高（P＜0．05）;中剂量雄性动物胸腺质量与脏器系数降低（P＜0．05）,高剂量雄性动物肝脏、肾脏脏器系数等升高（P＜0．05）;病理镜检发现,各组动物肝脏、肾脏等脏器存在不同程度的慢性炎性细胞浸润灶,雄性动物前列腺间质炎性细胞浸润。以上的个别指标虽有统计学差异,但未见明显的剂量－毒性关系,且均在正常范围内波动;其他各项指标差异均无统计学意义,未见与药物作用有关的病理变化。结论在本实验条件下,糖网明目颗粒对SD大鼠的无毒性反应剂量（NOAEL）为14．0 g／kg体质量（相当于临床成人拟用剂量的50倍）。     

曲安奈德联合利多卡因痛点注射治疗慢性腰肌捞损32例体会

目的：探讨曲安奈德联合利多卡因通过痛点注射治疗慢性腰肌劳损的临床疗效。方法：选取2010年3月～2011年3月来我院理疗科就诊治疗的32例慢性腰肌劳损患者的临床资料进行回顾性分析,随机分为观察组及对照组,各组16例,观察组给予曲安奈德联合利多卡因痛点注射治疗,对照组仅给予利多卡因痛点注射治疗,观察两组患者临床治疗效果及疼痛指数评分,并进行分析比对。结果：观察组患者临床总有效率为100.00％,而对照组临床总有效率为75．00％,2组比较差异性先准（P〈0．05）,具有统计学意义;观察组疼痛指数评分较治疗前及对照组明显降低,差异性显著有统计学意义（P〈0．05）。结论：曲安奈德联合利多卡因痛点注射治疗慢性腰肌劳损临床效果明显,可有效缓解患者疼痛程度,增加功能恢复,且安全性高,操作简单,值得临床广泛推广使用。