NHERF-1介导雌激素调节PTEN蛋白表达的研究

目的：研究雌激素调节PTEN蛋白表达的分子机制。方法：利用蛋白质芯片筛选PTEN的结合蛋白，发现了NHERF-1与PTEN的相互作用；应用GST pull-down、over-lay和免疫共沉淀等方法确认了其二者的相互作用。通过瞬时转染、免疫印迹分析、RT-PCR、RNAi以及蛋白降解速度检测等方法检测NHERF-1对细胞内PTEN稳定性的影响。结果：发现了PTEN与NHERF-1的相互作用，该相互作用是通过PTEN羧基末端与NHERF-1的第一个PDZ结构域相结合而实现的。将PTEN羧基末端的4个氨基酸分别突变为丙氨酸，都会明显抑制二者的结合。利用免疫共沉淀确认了细胞内完整的PTEN与NHERF-1蛋白分子的相互作用。发现NHERF-1的表达可以提高细胞内PTEN的蛋白表达量，而其mRNA表达水平没有增加。利用环己酮抑制新蛋白合成后，检测到NHERF-1的表达可以抑制PTEN蛋白的降解速度；RNAi抑制内源性NHERF-1的表达导致IYFEN的蛋白表达量显著下降。雌激素可以明显增高NHERF-1与PTEN的蛋白表达，RNAi干扰NHERF-1表达后，雌激素不再调节PTEN的蛋白的表达。结论：PTEN与NHERF-1可以特异结合。NHERF-1与PTEN结合显著提高PTEN蛋白的稳定性；雌激素并不直接调节PTEN蛋白的表达而是通过诱导NHERF-1的表达，引起PTEN蛋白稳定性的增强而导致PTEN蛋白含量的提高。     

研究生《分子生物学进展》网络课程建设与探索

《分子生物学进展》为研究生了解分子生物学前沿领域的主要动向及发展趋势开辟了窗口。根据课程的特点和研究生的培养目标,我们利用多媒体技术和网络资源共享的优势,在建设《分子生物学进展》网络课程,开展网络辅助教学,拓展学生的学习空间,改革教学结构方面进行了探索。     

NHERF3在肾癌组织中的表达变化及其意义

目的研究NHERF3在肾癌及其癌旁组织中的表达变化,为揭示肾癌组织NHERF3表达变化的临床意义提供线索。方法分别采用免疫组织化学法、Western blotting和RT-PCR方法检测肾癌及其对应癌旁组织中NHERF3蛋白及mRNA的表达,比较二者的差异。结果在癌旁组织中,NHERF3蛋白有较丰富的表达,而在肾癌组织中NHERF3蛋白的表达十分微弱(P<0.01);癌旁组织NHERF3 mRNA表达水平亦明显高于肾癌组织(P<0.05),二者之间的差异均有统计学意义。结论肾癌组织中NHERF3蛋白及mRNA与癌旁组织比较均呈现异常低表达,表明NHERF3基因表达在转录水平受到明显抑制,提示与肾癌NHERF3蛋白缺乏相关的NHERF3功能缺失(loss of function)可能在肾癌发生、发展中起重要作用。     

针对国际医学生的生物化学与分子生物学英语教学探讨

对国际医学生的特点进行分析,提出采取因人而异、因地制宜的方法.又对生物化学和分子生物学的学科特点进行探讨,提出创新思维在此学科中的应用.全英文式教学是医学与英语及相关思维的整合,我们要以结合实验教学的思想对待,达到中国与世界医学生共同发展的新局面.     

医学分子生物学教学改革与探索

针对医学生的特点及在医学分子生物学教学过程中出现的问题,对医学分子生物学教学进行了改革和探索,提出了适合医学生的有针对性的意见和建议,以期提高医学分子生物学的教学质量。     

EBP50抑制HeLa细胞增殖及基质金属蛋白酶表达

与膜-细胞骨架连接蛋白(ezrin-radixin-moesin,ERM)家族结合的磷酸化蛋白50(ERM-binding phosphoprotein-50,EBP50)与肿瘤细胞迁移和增殖有密切关系,但各个研究者对EBPSO在肿瘤中所起的具体作用尚存争议[1-2].     

重组DNA技术的医学研究思路

重组DNA技术作为医学分子生物学的一门重要技术,目前已经广泛应用于医学各个领域,在生物制药、基因诊断与治疗、遗传病的防治等方面发挥了巨大作用。因此本文就重组DNA技术的概念、过程及医学研究应用和研究思路作一简单总结。     

缺氧影响PTEN磷酸化和核定位

目的观察缺氧(hypoxia)对第10号染色体缺失并与张力蛋白同源的磷酸酶(phosphatase and tension homolog deleted onchromosome ten,PTEN)磷酸化及核定位的影响。方法以1%O2条件下培养的COS-7细胞为缺氧模型,在缺氧处理不同时间点0、1、8、24、32 h收集细胞,应用Western blotting方法检测PTEN磷酸化水平及其下游信号分子磷酸化蛋白激酶B(phosphorylatedprotein kinase B,p-Akt)的表达变化;分别应用细胞核、质分离技术,共聚焦显微镜观察缺氧24 h前后PTEN亚细胞定位的变化。结果 COS-7细胞缺氧处理24 h与未缺氧对照细胞相比,PTEN磷酸化水平显著降低,p-Akt亦明显减少;细胞核中PTEN表达量则显著升高。结论 PTEN磷酸化水平和核质分布受到细胞缺氧的调节。在细胞缺氧反应中,PTEN去磷酸化而活化,通过抑制其下游分子Akt磷酸化,从而抑制缺氧诱导的细胞增殖信号通路活化;并且部分入核发挥核内PTEN功能。     

PLC-β3与syntrophin蛋白的相互作用

 目的 探索并鉴定PLC-β3与PDZ蛋白syntrophin的相互作用,为进一步研究PLC-β3在神经系统信号转导通路中所扮演的角色提供线索。方法 制备GST-PLC-β3-CT融合蛋白,利用GST pull down的方法,检测PLC-β3-CT与β2-syntrophin和γ2-syntrophin的PDZ结构域的相互作用。结果 构建重组质粒pGEX-PLC-β3-CT,在大肠杆菌BL21中成功表达融合蛋白后,利用GST pull down的方法证实了PLC-β3-CT可以与β2-syntrophin而不是γ2-syntrophin的PDZ结构域相互作用。结论 PLC-β3与β2-syntrophin的相互作用的研究结果,为研究完整的PLC-β3与β2-syntrophin的相互作用以及这种相互作用在神经系统信号网络中的功能提供了线索。     

生物化学专业英语教育初探

基础医学专业英语教学模式是教学改革的重要内容之一,从教材选择、教学方法改进等方面入手,讨论对基础医学专业学生进行生物化学专业英语授课的经验和体会,以期对提高生物化学的专业英语教学有所帮助.