黄黑小斑蝥纤溶活性蛋白分离纯化及性质研究

目的以药用斑蝥(Mylabris)为原料,从其中分离纯化得到一种具有纤溶性的蛋白MFP(Fibrinolyric Protein of Myla-bris)。方法采用硫酸铵分段盐分、透析和DEAE-32纤维素离子交换层析等纯化方法进行分离纯化,SDS-PAGE电泳测定其分子量,纤维蛋白平板法测定其纤溶活性。结果该目的蛋白相对分子质量约为95.5 kD,其水解纤维蛋白的相对比活力为14.7 u/mg;该成分在35℃下最稳定,65℃及以上活性丧失,金属离子K+,Na+对其活力无影响,Mn2+,Ca2+对其有明显抑制作用,最适pH为6.0。结论研究分离出的斑蝥活性蛋白确为一种具有纤溶性的蛋白组分,并证明其纤溶作用机理为纤溶酶原激活;体外溶栓实验表明,其对血栓的溶解具有一定作用;溶血实验结果表明,该纤溶活性蛋白溶液无溶血反应。     

少棘蜈蚣活性蛋白提取及纤溶作用性质研究

目的 研究少棘蜈蚣活性蛋白的纤溶性及其性质.方法 通过硫酸铵分段盐析、DEAE纤维素柱和Sephadex G-75柱层析从少棘蜈蚣Scolopendra subspinipes mutilans L.Koch组织分离纯化出纤溶性活性蛋白,纤维蛋白平板法测定其纤溶性,SDS-PAGE测定样品纯度和分子量,温度、pH改变对少棘蜈蚣纤溶性蛋白活性的影响.结果 分离纯化到一种相对分子质量约为48.3 kD的纤溶性蛋白,水解纤维蛋白的比活力为42.36 u/mg.结论 少棘蜈蚣活性蛋白具有纤溶性,该成分在40℃下基本稳定,最适温度35℃,最适pH8.0.     

地鳖纤溶活性蛋白对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用

目的探讨地鳖纤溶活性蛋白(fibrinolytic protein from Eupolyphaga sinensis Walker,EFP)对H22荷瘤小鼠的抑瘤功效。方法采用水提取法对地鳖进行成分分离;皮下接种肿瘤细胞建立荷瘤小鼠动物模型;灌胃和皮下注射法观察EFP的抑瘤作用;ELISA法检测血清抗H22抗体水平;记录各组体重变化、脾脏和胸腺等免疫器官的器官系数,检测肝脏丙二醛(MDA)水平、肝脏超氧化物歧化酶(SOD)活性、肝脏谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)以及血清谷丙转氨酶(GPT)活力等生理生化指标。结果EFP具有明显的抑瘤活性。经EFP灌胃和皮下注射后的荷瘤小鼠,与对照组荷瘤小鼠相比其胸腺指数、脾指数明显增加;抗H22抗体水平以及MDA、SOD、GPT、GOT活性明显增加;肿瘤生长缓慢。结论EFP是地鳖抗肿瘤作用的主要有效成分,EFP在动物体内具有抗肿瘤作用,能通过增强荷瘤小鼠参与免疫抗体以及相关酶的活性而发挥抗肿瘤作用。     

黄粉虫纤溶活性蛋白酶(TFP)酶学性质以及红外光谱分析

目的研究黄粉虫纤溶活性蛋白(Tenebrio Fibrinolyric Proteins,TFP)的酶学性质及对其进行分类。方法以BAEE、BAPNA和酪蛋白为底物分别测TFP的Km值;分别研究PMSF和胰蛋白酶对TFP活性的影响。结果以BAEE和BAPNA为TFP底物,Km值分别为0.182 mmol/L和1.138 mmol/L,表明TFP与BAEE亲和力最好,酯酶活力>酰胺酶活力>肽键酶活力。丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF能有效抑制TFP活性,而偏弱碱性环境下胰蛋白酶未降解TFP,胰蛋白酶与TFP红外结构图谱相似,可以初步证明TFP属于丝氨酸蛋白酶。结论黄粉虫纤溶活性蛋白酶的酯酶活力最好,属于丝氨酸蛋白酶。     

东亚钳蝎蝎毒溶纤活性蛋白的提取及其体外溶栓特性研究

论文采用硫酸铵分段盐析,DEAE-32纤维素柱层析等方法从东亚钳蝎蝎尾中提取出相对分子质量为37.7 k的单一蛋白,纤溶平板法证明其具有纤溶活性,并研究了温度、时间、pH值、金属离子对其溶纤活性的影响。实验结果表明蝎毒活性蛋白最适作用温度为35℃,最适pH值为5.0,Fe2+、Ca2+、Ba2+对其纤溶活性有促进作用,Cu2+、Mn2+对其有抑制作用,同时时间作用对其影响很小。并讨论其体外溶栓作用,表明其有溶栓活性。     

少棘蜈蚣活性蛋白对舌癌细胞Tea-8113的抑制作用研究

目的研究少棘蜈蚣活性蛋白对人舌癌细胞Tea-8113增殖的抑制作用。方法 MTT法测定少棘蜈蚣活性蛋白对人舌癌细胞Tea-8113增殖的影响,少棘蜈蚣活性蛋白按照不同浓度分别作用于舌癌Tea-8113细胞24 h、48 h和72 h结果在一定范围内,随着药物浓度的增大,作用时间的增长,少棘蜈蚣活性蛋白对Tea-8113细胞增殖的抑制率逐渐增大。结论可以看出少棘蜈蚣活性蛋白对舌癌Tea-8113细胞增殖的抑制作用呈现明显的量效依赖关系,时间依赖关系也比较明显,少棘蜈蚣活性蛋白有一定的体外抗肿瘤活性。     

交联壳聚糖微球偶联胰蛋白酶研究

采用反相悬浮交联法,制备交联壳聚糖微球(CCTS),再以戊二醛为偶联剂,偶联胰蛋白酶.研究了胰蛋白酶偶联的最佳条件和偶联后酶的理化性质.结果表明:用终浓度为0.6%的戊二醛,在50℃下,先处理CCTS 6 h,再置冰浴加酶为12 mg/g,搅拌24 h,固定化酶活性回收率达63.4%.胰蛋白酶与壳聚糖微球偶联的最适温度为80℃、最适pH值为7、表观米氏常数(Km)为3.16 mmol/L.与壳聚糖载体相比,CCTS具有机械强度好、粒度均匀、耐酸性能好、对牛血清白蛋白非特异性吸附较弱的优点.