蚓激酶口服固体制剂质量分析

摘 要 目的：评价蚓激酶口服肠溶制剂的质量现状及存在问题,为质量标准的提高和临床用药提供参考,同时促进厂家完善产品质量。方法: 按照国家评价性抽验的总体要求,在法定检验方法检验的基础上,开展以下探索性研究,测定样品的重金属残留、蚓激酶的酶学性质分析、蛋白质来源确证与成分分析、近红外光谱模型。统计分析蚓激酶口服肠溶制剂的质量现状并进行评价。结果: 按照法定标准检验,结果显示78批次蚓激酶口服肠溶制剂均符合规定,合格率为100%。探索性研究结果显示来源不同企业的蚓激酶原料中的5种重金属考察,铅、铜、砷、镉均有检出,平均检出量分别为0.4 mg·kg-1,8.4 mg·kg-1,4.4 mg·kg-1与3.4 mg·kg-1;证实蚓激酶具有纤维蛋白溶酶及纤维蛋白溶酶原激酶两种酶活性并建立测定方法;建立了纤维蛋白 聚丙烯酰胺电泳方法检测纤溶活性蛋白质;确证了蚓激酶的来源,并在各企业的样品中鉴定出8～9种溶纤活性相关的蛋白质组分。结论: 根据现行标准检验及探索性研究结果,蚓激酶口服肠溶制剂总体合格率较好,现行标准需提高,生产企业需规范蚯蚓养殖管理过程并建立统一的原材料蚯蚓的质量标准。     

高效液相色谱法检测乙酰半胱氨酸原料药中有关物质

目的 建立检测乙酰半胱氨酸原料药中L-胱氨酸、L-半胱氨酸、N,N′-二乙酰-L-胱氨酸、N,S-二乙酰-L-胱氨酸4种已知杂质及其他未知杂质的高效液相色谱(HPLC)法.方法 色谱柱为Thermo ODS Hypersil C18柱(250 mm×4.0 mm,5μm),流动相为水(用磷酸调pH至3.0)-乙腈(97...     

盐酸氨基葡萄糖颗粒有关物质方法的建立与验证

摘要：目的:分析盐酸氨基葡萄糖颗粒剂中辅料蔗糖、乳糖等对主药氨基葡萄糖质量控制的影响,建立高效液相色谱法测定盐酸氨基葡萄糖颗粒剂有关物质检测方法,并对其进行质量标准提高。方法:采用高效液相色谱-紫外检测法,色谱柱为CAPCELL PAK NH2柱（150mm×4.6mm, 3μm）,以磷酸盐缓溶液（取磷酸氢二钾3.5g,加水1 000ml溶解,加入0.25ml氨水,用磷酸调节pH至7.5）-乙腈（28:72）为流动相,流量1.5ml·min-1,检测波长为195nm,柱温为35℃,进样量20μl。结果:采用优化后的有关物质测定方法,能有效分离盐酸氨基葡萄糖颗粒中主药氨基葡萄糖与其辅料蔗糖、乳糖、聚维酮K30,也能与其杂质N-乙酰氨基葡萄糖、2,5-果糖嗪及2,5-脱氧果糖嗪有效分离。盐酸氨基葡萄糖在1.466 4～10.998 0mg·ml-1（r=0.999 1）,N-乙酰氨基葡萄糖在9.7～77.6μg·ml-1（r=0.999 5）,果糖嗪在7.2～72.0μg·ml-1（r=1.000 0）,2,5-脱氧果糖嗪在9.5～76.0μg·ml-1（r=0.999 5）浓度范围内,与峰面积呈良好的线性关系。N-乙酰氨基葡萄糖、2,5-果糖嗪与2,5-脱氧果糖嗪的平均回收率依次为99.2%（RSD=0.2%）,99.1%（RSD=0.5%）和98.5%（RSD=0.6%）（n=9）;盐酸氨基葡萄糖、N-乙酰氨基葡萄糖、2,5-果糖嗪与2,5-脱氧果糖嗪定量下限为1.0μg、8.1 ng、20.0 ng、6.4 ng;检测下限依次为0.4μg、3.2 ng、4.0 ng、2.0 ng。结论:该方法能准确测定盐酸氨基葡萄糖颗粒有关物质,方法简便、准确,专属性强,该研究为该制剂标准提高提供参考。     

注射用门冬酰胺酶蛋白质杂质研究

摘 要 目的：考察注射用门冬酰胺酶中蛋白质杂质情况。方法: 采用蛋白质分离纯化系统对蛋白质样品进行分离,采用蛋白质电泳及UPLC Q TOF MS法分别对2个厂家样品中杂蛋白组分进行分析。结果: 厂家A样品中共检出2种杂蛋白,杂蛋白总量为2.2%;厂家B中共检出19种杂蛋白,杂蛋白总量为7.2%。两个厂家中的杂蛋白均来源于大肠埃希菌。结论:建立的杂蛋白分析检测方法能有效检测出注射用门冬酰胺酶中蛋白质杂质的含量与来源。     

人血白蛋白中杂蛋白的生物质谱分析

目的建立基于电喷雾质谱(ESI-Q-TOF MS)技术检测人血白蛋白中杂蛋白的方法,考察国内上市的27家企业的28批白蛋白产品中的未知蛋白组分。方法按2015年版《中国药典》四部通则3121方法,采用凝胶过滤色谱柱(Hiprep16/60Sepharyl S-200HR),对人血白蛋白中的各组分进行分离,并收集其中的二聚体、多聚体组分;经除盐、浓缩和胰蛋白酶酶解后,采用BEH C18(2.1 mm×100 mm,130 )色谱柱,以水(含0.1%甲酸)-乙腈流动相梯度洗脱,采用色谱-质谱(MS)技术对多肽进行二级质谱序列测定,并利用搜库软件(PLGS3.0)分析鉴定人血白蛋白中的杂蛋白。结果利用所建立的方法对27家企业的制品进行测定,共检测出23种杂蛋白,其中载脂蛋白A-Ⅱ(apolipoprotein A-Ⅱ)、人结合珠蛋白(haptoglobin)、人血色素结合蛋白(hempoexin)、α-1B-糖蛋白(alpha-1B-glycoprotein)与α-2-HS-糖蛋白(alpha-2HS-glycoprotein)等5种蛋白为所有企业产品共有的杂蛋白;α白蛋白(VE结合蛋白)、N-乙酰-L-丙氨酸酰胺酶、触珠蛋白相关蛋白,血红蛋白(β亚基,α亚基)、转甲状腺素蛋白等蛋白大部分企业产品均存在。各企业杂蛋白数量分布在8~17种之间,27家企业产品杂蛋白种类数量差异较大。结论本方法可用于人血白蛋白中未知组分的研究,为人血白蛋白的生产工艺优化提供了指导。     

阿昔洛韦口服固体制剂质量分析

摘要：目的:监测和评价阿昔洛韦口服固体制剂质量现状,为进一步改进提高生产工艺和质量标准提供参考。方法:采用法定检验方法,对抽样品种进行检验,分析评价其质量;并进行探索性研究:包括杂质谱研究,不同溶出介质中溶出曲线分析,胶囊制剂的塑化剂检测,综合评价其质量状况。结果:585批阿昔洛韦口服固体制剂按照法定标准检验共584批合格,1批不合格,合格率为99.8%,探索性研究显示:阿昔洛韦片剂中杂质控制水平与国际水平相当;体外溶出情况良好。结论:探索性研究为进一步修订准及有效地控制该制剂质量提供参考依据。     

静注人免疫球蛋白(pH4.0)中病原体检测方法的适用性研究

摘要：目的:探讨静注人免疫球蛋白（pH4.0）中HBsAg、HCV抗体、梅毒抗体、HIV抗体以及HBV-DNA/HCV-RNA/HIV-RNA检测方法的适用性。方法:向全国血液制品生产企业发放调查问卷,了解成品中病原体检测方法的基本情况。在静注人免疫球蛋白中加入不同浓度的HBsAg、HCV抗体、梅毒抗体、HIV抗体以及HBV-DNA/HCV-RNA/HIV-RNA阳性标准品,考察不同pH、不同稀释度条件下对上述病原体标志物的检出影响。结果:不同生产企业的HBsAg、HCV抗体、HIV抗体检测方法各不相同。经过加标考察试验,确定由于静注人免疫球蛋白的抗体中和活性,在成品中无法检测出HBsAg。测定静注人免疫球蛋白中HCV抗体时,筛选合适的试剂盒后,无需稀释即可测定出样品中的HCV抗体,或者将静注人免疫球蛋白pH调节至中性后进行测定。检测静注人免疫球蛋白产品中梅毒抗体、HIV抗体时,需将供试品的pH调节至中性（如pH7.4）;检测HBV-DNA/HCV-RNA/HIV-RNA时,无需对样品进行特殊处理。结论:本研究建立了静注人免疫球蛋白上述病原体标志物统一检测方法,为血液制品的病毒安全奠定了基础。     

慢病毒载体介导 CDK2 基因沉默对黑素瘤B16-F1细胞生物学行为的影响

目的:探讨由慢病毒载体pUL介导的pUL-CDK2-shRNA3 (CDK2-shRNA)沉默CDK2基因后对小鼠黑素瘤B16-F1细胞恶性生物学行为的影响,初步探索其作用机制.方法:利用重组慢病毒载体CDK2-shRNA转染B16-F1细胞,MTT法检测其对细胞增殖的影响,DAPI染色、AnnexinV-FITC/PI双染流式术检测细胞凋亡情况,流式术检测细胞周期变化,细胞黏附实验、transweU小室实验分别检测细胞黏附、侵袭和迁移能力变化,Western blotting检测细胞周期信号通路上RB蛋白(成视网膜细胞瘤蛋白)、pRB蛋白、细胞周期相关转录因子E2F1及侵袭迁移相关蛋白基质金属酶-2(MMP-2)、基质金属酶-9(MMP-9)的表达水平.结果:与空白对照组和阴性对照组相比,CDK2-shRNA组细胞相对增殖率、细胞黏附率、细胞侵袭和迁移能力均显著下降(均P＜0.05).细胞凋亡率显著增加(均P＜0.05);G1期细胞显著增加而S期和G2期显著降低(P＜0.05).细胞周期相关蛋白pRB、E2F1明显降低而RB显著升高(P＜0.05),细胞侵袭和迁移相关蛋白MMP-2、MMP-9明显降低(P＜0.05).结论:慢病毒载体pUL介导的shRNA沉默CDK2基因对B16-F1细胞恶性生物学行为有显著的抑制作用,其机制主要与细胞周期和细胞侵袭迁移相关蛋白表达变化有关.     

CDK2基因沉默联合达卡巴嗪对B16-F1黑素瘤的生长抑制作用

目的 探讨CDK2基因沉默后对达卡巴嗪(DTIC)治疗B16-F1黑素瘤抑瘤效应的影响.方法 实验设对照组、CDK2-shRNA组、DTIC组、CDK2-shRNA+ DTIC组,MTT法检测各组细胞生长抑制情况,计算药物相互作用指数(CDI值),AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况.建立C57 BL/6小鼠B16-F1细胞移植瘤模型,分组实验,持续观察18d,绘制肿瘤生长曲线,计算肿瘤生长抑制率,TUNEL检测肿瘤组织细胞凋亡情况.结果 与对照组相比,CDK2-shRNA组、DTIC组、CDK2-shRNA+ DTIC组在72h的细胞相对存活率分别为(40.6±2.8)％、(45.2±3.7)％、(28.7±2.1)％,细胞凋亡率分别为(25.1±3.3)％、(15.6±2.2)％和(45.6±3.5)％,细胞相对存活率显著降低(F=458.04,P＜ 0.05)而细胞凋亡率显著升高(F=115.46,P＜0.05),其中CDK2-shRNA+ DTIC组比DTIC组的细胞相对存活率显著降低(P＜0.01),而细胞凋亡率显著升高(P＜0.01);两药相互作用指数(CDI值)＜0.7.治疗第6天,对照组、CDK2-shRNA组、DTIC组及CDK2-shRNA+ DTIC组的肿瘤体积分别为(185.44±68.97) mm3、(83.91±14.33)mm3、(123.70±20.85) mm3、(34.54±10.72) mm3.从治疗的第6天开始,与对照组相比,CDK2-shRNA组、DTIC组及CDK2-shRNA+ DTIC组的肿瘤生长速度明显降低(F=11.819,P＜0.05),而CDK2-shRNA+ DTIC组的肿瘤生长速度明显低于DTIC组(P=0.04);与对照组相比,CDK2-shRNA组、DTIC组、CDK2-shRNA+ DTIC组的肿瘤生长抑制率分别为52.2％、41.2％、86.4％,组织细胞凋亡指数分别为(32.93±3.72)％、(21.62±3.54)％、(63.29±4.74)％,组织细胞凋亡指数显著升高(F=222.25,P＜0.05),其中CDK2-shRNA+ DTIC组的组织细胞凋亡指数显著高于DTIC组(P＜0.01).结论 沉默CDK2基因的表达可以增加DTIC对黑素瘤的生长抑制作用,二者体外有协同效应,通过增加肿瘤细胞的凋亡是其机制之一.     

阿昔洛韦国际药典标准的制定

摘要：目的: 制定阿昔洛韦国际药典质量标准。方法：参照国内外阿昔洛韦质量标准和相关文献,按照国际药典标准制定要求,建立合适的方法并进行验证。结果：建立了红外光谱、薄层色谱、高效液相色谱及紫外吸收等4种可供选择的鉴别方法;有关物质项下建立了薄层色谱法与高效液相色谱法两种可供选择的方法,色谱检测条件能有效分离11种已知杂质;采用干燥失重法测定水分;采用滴定法测定含量,阿昔洛韦在0.0462~0.2490g范围内与消耗高氯酸滴定液体积呈良好的线性关系（r=0.9999）。结论：制定的标准充分考虑了全球不同发展地区的实验室水平,同一项目建立不同方法可供选择,使标准具有可行性,且能有效衡量产品的质量。