人血清IA-2抗体检测方法的建立及应用

目的建立糖尿病患者血清中IA-2自身抗体的检测方法.方法以原核表达的人IA-2融合蛋白作为抗原建立人血清IA-2抗体的固相酶联免疫吸附检测方法(ELISA),该方法经优化后用于糖尿病患者血清中IA-2抗体的检测.结果该文所建立方法的平均批内和批间变异系数分别为6.8%和7.7%;回收率为99.2%～105%.所测定的1型和2型糖尿病患者血清中IA-2抗体的阳性率分别为49%和3.6%.结论应用原核表达的人IA-2蛋白为抗原所建立的ELISA方法简单且可靠,为糖尿病患者血清中IA-2抗体的检测提供了条件.     

Graves病甲状腺自身抗体检测的临床意义

Ｇｒａｖｅｓ病 (ＧＤ)属器官特异性自身免疫病。 3种甲状腺自身抗体即甲状腺球蛋白抗体 (ＴＧＡｂ)、甲状腺微粒体抗体(ＴＭＡｂ)、ＴＳＨ受体抗体 (ＴＲＡｂ)的特征已基本被阐明。其中ＴＭＡｂ已被进一步证实为甲状腺过氧化物酶抗体(ＴＰＯＡｂ)。本研究拟对ＧＤ甲状腺自身抗体的临床特点进行研究 ,以了解甲状腺自身抗体在ＧＤ中的致病作用 ,并寻找判断ＧＤ预后、能否停药、复发可能性大小的临床指标。1　对象与方法1 1　研究对象　正常对照组 39例 ,其中男性 18例 ,女性2 1例 ,年龄 (4 7± 14)岁 (11～ 74岁 ) ,临床无甲状腺肿大及甲状腺…     

原代分离的大鼠胰岛细胞对葡萄糖刺激胰岛素分泌的反应性研究

目的:研究原代分离的大鼠胰岛对葡萄糖刺激的胰岛素分泌反应性。方法:胶原酶原位灌注法分离大鼠胰岛,在含0.5%BSA、5.5或11.1mmol/L葡萄糖的培养基中培养不同时间后,用含0.2%BSA、3.3mmol/L葡萄糖的KRB缓冲液预培养胰岛30min,分别换入含不同浓度葡萄糖KRB缓冲液,培养1h,收集上清,RIA法测定胰岛素浓度。结果:大鼠胰岛过夜培养后,在基础(3.3mmol/L)和高浓度(16.7mmol/L)葡萄糖条件下胰岛素分泌量分别为(12.4±3.2)和(45.2±4.2)μU/ml/10islets/h;5.5mmol/L和11.1mmol/L葡萄糖浓度下培养12h和20h后,胰岛对葡萄糖的反应性均明显高于16.7mmol/L和22.5mmol/L葡萄糖组(P<0.05);体外培养5d后,对高糖的反应性为(4.28±0.67)倍。结论:原代分离的大鼠胰岛可在(1～5)d内保持对葡萄糖的反应性。     

Graves'病和桥本氏甲减患者外周血Th1、Th2、Th17、Treg细胞的变化

目的:探讨Graves'病和桥本氏甲减患者外周血中Th1、Th2、Th17细胞和CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞(Treg)的比例及其意义.方法:选择新诊断但未治疗的Graves'病(GD)患者25例、桥本氏甲减25例和正常对照者25例,通过流式细胞技术测定其外周血中Th1、Th2、Th17和CD4+CD25...     

人胰岛素瘤相关蛋白-2基因的克隆及原核表达研究

目的克隆1型糖尿病自身抗原人胰岛素瘤相关蛋白-2(IA-2)的编码基因,并从大肠杆菌中表达具有免疫原性的人IA-2重组蛋白.方法抽提胎脑总RNA,通过RT-PCR获得编码IA-2胞内结构域的cDNA,与Pinpoint Xa-1T质粒相连接,构建表达型重组质粒,经转化、筛选并鉴定后,从大肠杆菌诱导表达生物素酰化融合蛋白,进而用亲和层析纯化之,以dot-blot鉴定其免疫原性.结果重组质粒转化的大肠杆菌经IPTG诱导表达及亲和层析后得到了纯度较高、分子量约为59kd的融合蛋白,表达产物用dot-blot证明具有免疫原性.结论原核表达的生物素酰化人IA-2胞内段融合蛋白具有正确的免疫学构象.     

甲状腺激素反应蛋白1的原核生物表达

目的 应用基因工程技术表达甲状腺激素反应蛋白1(TRP-1)。方法 应用RT-PCR方法，从新生大鼠脑组织RNA中扩增编码TRP-1的cDNA片段，构建表达型重组质粒，经DNA序列分析确证后，在大肠杆菌中表达，以Western印迹来初步鉴定是否表达了目的融合蛋白，用亲和层析纯化融合目的蛋白，并以SDS-PAGE电泳测定其相对分子质量。结果 所获特异PCR产物正确地重组入Pinpoint Xa-1表达载体中。Western印迹表明经异丙基硫代半乳糖苷诱导的原核细胞表达产生了目的融合蛋白，亲和层析得到了纯度较高、相对分子质量约23400的融合目的蛋白。结论 应用原核细胞表达体系成功地表达了TRP-1融合蛋白，为进一步研究其在脑发育中的所起的作用以及该蛋白的其它功能提供了可能。     

TSH双位点单抗免疫放射测定法的建立及临床应用

采用本所制备及鉴定的二株不同位点的抗ｈ－ＴＳＨ单抗１３Ｂ４和８Ｅ７，建立了高灵敏度、高特异的ｈ－ＴＳＨ免放测定法。其中经饱和硫酸铵和ＰｒｏｔｅｉｎＡＳｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析柱纯化的１３Ｂ４以Ｉｏｄｏｇｅｎ固相法进行碘标，纯化的８Ｅ７（１∶１００稀释度）作塑料管固相抗体。方法学鉴定表明，本法与生理剂量的其他糖蛋白激素ｈ－ＦＳＨ、ｈ－ＬＨ、ｈＣＧ无明显交叉反应，灵敏度达０．０２６ｍＵ／Ｌ（－ｘ±２ｓ），批内ｃｖ为１．２３～７．３０％，批间ｃｖ为１２．３％。稀释度试验示平行线性关系好，ｒ＝０．９９９。初步临床应用结果表明：甲亢６４例，ＴＳＨ值为未测得（ＮＤ）～０．３１ｍＵ／Ｌ，９５％可信限为ＮＤ～０．２６３ｍＵ／Ｌ；甲减２８例，ＴＳＨ范围为６．６～１８２ｍＵ／Ｌ；甲状腺功能正常者９８例ＴＳＨ为１．４５ｍＵ／Ｌ（Ｐ＿（５０）），９５％可信限为０．３２６～６．０５９ｍＵ／Ｌ。本法与瑞士Ｓｅｒｏｎｏ酶免药盒同时测定１２８例，两种结果的相关系数ｒ＝０．８４４（Ｐ＜０．０１）。经上海华山医院等４家医院初步临床试用，结果表明本法与国内外同类型药盒相比，测定方法简便，相关性高，临床符合率好。     

Graves''病甲状腺自身抗体的免疫印迹研究

目的：研究Graves'病（Graves' disease,GD）甲状腺自身抗体的异质性。方法：以正常、GD及桥本氏甲状腺炎患者（HT）甲状腺组织作为抗原、运用Western blot检测20例GD甲亢期及20例GD缓解期患者的甲状腺自身抗体，并以正常阴性血清及标准阳性血清[甲状球蛋白（TGAb）＋、甲状腺过氧化物酶抗体（TPOA b）＋、TSH受体抗体（TRAb）＋]作为对照。结果；GD血清可与多种甲状腺抗原反应，每个患者出现的阳性条带带型均不一样。GD血清在HT及GD甲状腺组织抗原泳道出现的阳性条带数明显多于正常甲状腺组织抗原泳道出现的阳性条带数（P＜0．01）。且有的条带不出现于正常甲状腺组织抗原泳道。与标准阳性血清出现的阳性条带相比，GD血清出现更多的条带。结论：GD甲状腺自身抗体存在异质性，GD时存在除TGAb、TPOAb、TRAb以外其它的甲状腺抗体，甲状腺细胞中某些蛋白的变异可能是导致GD时产生甲状腺自身抗原的原因之一。     

Establishment of anti-thyrotropin monoclonal antibody hybridoma cell lines with extract of human pituitary gland

Theproductionofanti--humanthyroid--stimulatinghormone(anti--hTSH)monoclonalantibody(McAb)isofgreatimportanceinbothmedicalresearchandclinicaldiagnosis.Howeveritwasnoeasyjobproducinganti--hTSHMcAbswithhighspecificityasseveralglycoproteinhormones,includinghumanfollicle--stimulatinghormone(hFSH),humanluteinizinghormone(hLH),humanchorionicgonadotropin(hCG)andhTSH,containthesameasubunit.Inspiteofthis,Josephine['],RidgwayetalLZjhaveobtainedMcAbwithhighspecificityandaffinitybyusingpurehTSHa…     

Galectin-3 mRNA在甲状腺肿瘤中的表达

目的探讨galectin-3 mRNA在良性和恶性甲状腺肿瘤组织中的表达情况.方法对8例甲状腺乳头状癌、45例良性腺瘤结节和21例正常组织,采用Trizol抽提总RNA,RT-PCR扩增、凝胶电泳,检测galectin-3 mRNA的表达,并进行统计学分析.结果galectin-3 mRNA在甲状腺乳头状癌的表达为100%,在良性腺瘤结节和正常组织的表达分别为88.9%和47.6%.癌与腺瘤之间没有显著性差异(P＞0.05),癌和腺瘤与正常组织之间均有显著性差异(P＜0.05).结论galectin-3 mRNA对于甲状腺癌的分子诊断不是一个适合的靶标,可作为甲状腺乳头状癌鉴定的辅助指标.