阿米洛利抑制尿激酶受体表达及减少蛋白尿的机制

目的：观察阿米洛利在经典的5/6肾切除大鼠模型中对蛋白尿的影响,探讨其影响蛋白尿的机制。方法构建经典的5/6肾切除大鼠模型,实验分为3组：假手术对照组（Sham）、5/6肾切除组（NTX）、5/6肾切除+阿米洛利干预组（NTX+阿米洛利）。采用考马斯亮蓝法检测各组24 h尿蛋白,利用免疫荧光共聚焦、实时荧光定量PCR等技术,检测足细胞尿激酶受体（uPAR）蛋白和uPAR mRNA的表达情况。结果第2周时,与假手术对照组（Sham）相比较,5/6肾切除组（NTX）24 h尿蛋白明显升高（47.50±28.05 mg vs 14.28±3.8 mg,P=0.023）,有统计学意义;与NTX组相比,NTX+阿米洛利24 h尿蛋白无统计学意义（51.56±21.03 mg vs 47.50±28.05 mg,P=0.748）。第12周时,与NTX组（188.31±29.82）mg相比,NTX+阿米洛利组（121.37±31.14）mg、Sham组（21.32±8.59）mg 24 h尿蛋白增加量均进一步减少,具有统计学意义[P值分别为0.001,0.000]。激光共聚焦显微镜观察,与Sham组相比较,NTX组PLAUR mRNA表达明显增高（9.74±1.44 vs 1.01±0.13,P<0.01）,有统计学意义;与NTX组相比较, NTX+阿米洛利mRNA表达明显降低（9.74±1.44 vs 5.01±1.36,P<0.01）,有统计学意义。结论阿米洛利可能通过抑制受损足细胞uPAR的表达,从而起到降蛋白尿、延缓肾小球硬化的作用。     

1,25-二羟基维生素D_3通过抑制尿激酶型纤溶酶原激活剂受体表达降低足细胞活动力

目的观察1,25-二羟基维生素D_3[1,25(OH)_2D_3]对脂多糖诱导的足细胞活动力和尿激酶型纤溶酶原激活剂受体(uPAR)表达的影响。方法小鼠足细胞分化成熟后分为3组:正常对照组、脂多糖组(50 mg·L~(-1)脂多糖孵育足细胞24 h)、脂多糖+1,25(OH)2D3组[50 mg·L~(-1)脂多糖+1 nmol·L~(-1)的1,25(OH)_2D_3]共同孵育足细胞24 h。采用免疫荧光激光共聚焦、流式细胞术、实时荧光定量PCR、转板迁移测定法等技术,检测足细胞活动力改变以及足细胞uPAR蛋白和uPAR mRNA(Plaur mRNA)的表达。结果转板迁移测定法中每个视野细胞在正常对照组、脂多糖组、脂多糖+1,25(OH)2D3组分别为(8.4±3.8)、(31.3±7.9)、(19.2±6.8)个,脂多糖组膜下层迁移足细胞多于其他2组,脂多糖+1,25(OH)_2D_3组多于正常对照组(P<0.01)。脂多糖组uPAR蛋白荧光信号强于正常对照组,脂多糖+1,25(OH)_2D_3组弱于脂多糖组。脂多糖+1,25(OH)2D3组uPAR蛋白表达率和Plaur mRNA为(31.12±4.46)%和1.97±0.46,均低于脂多糖组[(54.66±8.69)%和3.06±0.93,P<0.05],高于正常对照组[(9.80±3.1 1)%和1.00±0.00,P<0.05]。结论 1,25(OH)_2D_3可能通过抑制uPAR的表达,降低足细胞活动力,起到保护足细胞的作用。     

1,25（OH）2D3对脂多糖诱导的小鼠蛋白尿的影响

目的观察1,25(OH)2D3对脂多糖诱导的小鼠蛋白尿和uPAR表达的影响。方法 24只C57BL/6雄性小鼠随机分为正常对照组(Sham组)、脂多糖(LPS)处理组(LPS组)、LPS与1,25(OH)2D3共同处理组[LPS+1,25(OH)2D3)组]。LPS组及LPS+1,25(OH)2D3组腹腔注射LPS 300μg(第1天200μg,第2天100μg),Sham组给予等量生理盐水腹腔注射,LPS+1,25(OH)2D3组提前2 d给予1,25(OH)2D32.5μg/(kg·d)灌胃,Sham组及LPS组每天给予等量橄榄油灌胃。第3天留取尿液后处死小鼠。结果 (1)Sham组、LPS组、LPS+1,25(OH)2D3组的尿蛋白分别为(72.0±35.6)、(732.9±233.2)、(412.3±82.7)μg/mg,LPS组尿蛋白比Sham组明显升高(P=0.000);LPS+1,25(OH)2D3组与LPS组相比,尿蛋白明显减少(P=0.001)。(2)LPS组足细胞uPAR蛋白及PLAUR mRNA的表达均高于Sham组和LPS+1,25(OH)2D3组(P<0.05)。结论 1,25(OH)2D3可能通过抑制uPAR的表达,减少蛋白尿。     

高流量CVVH治疗严重腹腔感染的疗效探究

目的 探讨高流量连续性静脉-静脉血液滤过(CVVH)治疗严重腹腔感染患者的疗效.方法 收集严重腹腔感染入住重症监护室的患者83例,在综合治疗的基础上予高流量CVVH(n=33)、低流量CVVH(n=29)治疗,对照组(n=21)仅综合治疗.分别于治疗前及治疗后12、24、48、72小时观察患者的APACHEⅡ评分、炎症因子等的动态变化.并统计患者的预后,包括住院天数、好转率和病死率.结果 高流量CVVH患者的APACHEⅡ评分于治疗后12小时开始明显降低(P＜0.05),且明显低于对照组(P＜ 0.05).治疗后高流量CVVH组和低流量CVVH组的TNF-α、IL-6和CRP值均呈下降趋势.治疗后24小时始,高流量CVVH组的三者炎症因子均明显低于对照组(P＜0.05).高流量CVVH组患者的住院天数明显少于对照组和低流量CVVH组(P＜0.05).高流量CVVH组患者的好转率明显高于对照组(P＜0.05).结论 高流量CVVH能有效缓解严重腹腔感染患者的症状,提高APACHEⅡ评分,并改善患者预后.这些效应可能与高流量CVVH迅速有效清除外周血中多种炎症因子有关.     

阿米洛利抑制脂多糖诱导的足细胞活动力

目的观察阿米洛利对脂多糖诱导的足细胞活动力的影响,并探讨其机制。方法足细胞分为3组:正常对照组,脂多糖组(50mg·L~(-1)脂多糖诱导损伤足细胞24h),脂多糖+阿米洛利组(50 mg·L~(-1)脂多糖与50 mg·L~(-1)阿米洛利共同作用于足细胞24h)。利用免疫荧光共聚焦、流式细胞术、实时荧光定量PCR、转板迁移实验、划痕实验等技术,检测足细胞uPAR蛋白和Plaur mRNA的表达情况以及足细胞活动力的改变。结果脂多糖组足细胞uPAR蛋白及PlaurmRNA的表达均高于正常对照组和脂多糖+阿米洛利组(P<0.05),正常对照组和脂多糖+阿米洛利组无显著差异(P>0.05)。转板迁移、划痕实验中脂多糖组每个视野足细胞数[(324±15),(43±7)个]高于正常对照组[(249±10),(15±5)个]和脂多糖+阿米洛利组[(274±8),(18±6)个](P<0.01),正常对照组和脂多糖+阿米洛利组无显著差异(P>0.05)。结论阿米洛利可能通过抑制uPAR的表达,降低足细胞活动力,起到稳定、保护足细胞的作用。     

环孢素对足细胞尿激酶型纤溶酶原激活剂受体表达的影响

目的观察环孢素对脂多糖诱导的足细胞尿激酶型纤溶酶原激活剂受体(uPAR)表达的影响。方法建立体内脂多糖诱导小鼠蛋白尿模型和体外脂多糖足细胞损伤模型,2种模型均分为正常对照组、脂多糖组和脂多糖+环孢素组。通过测量尿蛋白-尿肌酐比值观察各组小鼠尿蛋白的变化情况,通过免疫荧光激光共聚焦、RT-PCR及流式细胞术观察各组小鼠肾组织及足细胞uPAR基因和蛋白水平。结果脂多糖组小鼠尿蛋白-尿肌酐比值高于正常对照组(P<0.01),脂多糖+环孢素组低于脂多糖组(P<0.05)。脂多糖+环孢素组小鼠肾组织中uPAR的表达弱于脂多糖组。足细胞脂多糖组uPAR蛋白荧光信号明显强于正常对照组,给予环孢素后荧光信号减弱。足细胞脂多糖+环孢素组uPAR蛋白表达率和Plaur mRNA为(20.10±10.70)%和0.872±0.167,均低于脂多糖组[(65.17±13.04)%和1.341±0.287,P<0.05],与正常对照组无显著差异[(18.06±7.78)%和1.025±0.167,P>0.05]。结论环孢素可能通过抑制足细胞uPAR的表达,从而稳定和保护足细胞起到降蛋白尿作用。