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目的探讨体外建立健康人外周血B淋巴母细胞样细胞系(B-LCLs)的优化方法及其影响因素。方法用EB病毒感染健康人外周血中分离的单个核细胞(PBMC),加入CD40激发型抗体(5C11)、CpGDNA免疫调节基因序列以诱导B淋巴细胞增殖,环胞菌素A(CysA)抑制T淋巴细胞的活性。光学显微镜下观察B-LCLs的形态特征,利用流式细胞术分析B-LCLs膜表面分子CD19的表达水平。结果PBMC经EBV感染3周后转化成永生化B-LCLs。转化后的B淋巴母细胞体积增大积聚成团,可进一步分裂增殖并长期传代培养。CD40激发型抗体(5C11)及CpG免疫调节基因序列联合EBV感染人PBMC,明显地提高了转化效率,转化后的LCLs保持了成熟B淋巴细胞的生物学特征。结论CD40信号激发和CpG免疫调节基因序列联合运用能有效地促进EBV对人B淋巴细胞的转化及体外建系。 相似文献
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目的探讨间充质干细胞株C3H10T1/2对小鼠骨髓来源树突状细胞(dendritic cells,DCs)体外分化、成熟的影响。方法采用密度梯度离心法分离小鼠骨髓细胞,在mGM-CSF和mIL-4刺激下获得大量未成熟DCs。将DCs和C3H10T1/2细胞共培养2d,同时加入LPS刺激,分别通过倒置显微镜、流式细胞仪,混合淋巴反应以及ELISA检测DCs的成熟。结果经C3H10T1/2细胞体外共培养的DCs,形态观察呈散在分布,细胞边缘圆滑,流式细胞仪检测显示其低表达CD11c、MHC-Ⅱ、CD80、CD86、CD40;共培养组的DCs刺激同种异型小鼠脾细胞增殖的能力在各个浓度均明显低于对照组(P〈0.05或0.01);ELISA检测培养上清中IFN-γ和IL-10的浓度也明显低于对照组(P〈0.05或0.01)。结论间充质干细胞株C3H10T1/2可以明显抑制小鼠骨髓来源DCs的体外成熟。 相似文献
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人胎盘源间充质干细胞对脐血单个核细胞体外生长的支持作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨人胎盘源问充质干细胞(PMSCs)对脐血单个核细胞(MNCs)体外生长的支持作用。方法将人胎盘组织经胶原酶消化、贴壁培养获得人PMSCs,用流式细胞仪检测细胞表面标志。以密度梯度离心法分离脐血MNCs和传代后的PMSCs进行共培养,通过细胞计数和流式细胞仪分别检测细胞的生长情况。结果从人胎盘组织中成功分离和培养PMSCs,经流式细胞仪检测其表型为CD29^+,CD44^+,CD105^+、CD106^+、CD166^+、CD34^-,CD45^-、HLA—DR^-。人PMSCs+脐血MNCs共培养组的细胞总数和CD45^+细胞数在各培养时间点均明显高于对照组,差异有统计学意义(P〈0.05或P〈0.01)。在培养第7天,CD45^+、CD14^+及CD19^+细胞数共培养组也明显高于对照组,差异有统计学意义(P〈0.05或P〈0.01)。结论人PMSCs可以作为滋养层细胞有效支持脐血MNCs的体外生长。 相似文献
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为了借助FTOC体系探讨Flt3L对小鼠胸腺树突状细胞分化发育的影响。摘取15~16d龄胎鼠胸腺进行体外器官培养(胎鼠胸腺器官培养-FTOC),根据所使用培养基的不同实验分为两组:对照组(基础培养基)和Flt3L组(培养基中含有细胞因子Flt3L),在体外进行FTOC常规培养,12d后分别收集两实验组的胸腺细胞,流式细胞仪检测细胞表面分子CD4、CD8、CD11c、Ia等的表达,通过光学显微镜观察细胞形态。骨髓来源的c-kit+造血干细胞通过悬滴培养方法种植入2-脱氧鸟苷处理过的胸腺,随后将胸腺放置于组织器官培养皿中所使用的培养基为基础培养基或加入细胞因子Flt3L的培养基,进行为期12d的FTOC常规培养。12d后收集不同条件下FTOC培养的胸腺细胞,通过流式细胞仪对胸腺细胞的表型进行分析;将在不同条件下FTOC培养获得的胸腺细胞进行MACS分选,从而获得胸腺树突状细胞(CD11c+DC),再与异源的CD4+T细胞进行混合淋巴细胞反应,通过MTT法检测T细胞的增殖情况。结果:在正常FTOC体系中,流式细胞仪检测结果和细胞形态学结果显示:Flt3L组胸腺DC有明显的增加,且FTOC联合悬滴培养体系中Flt3L组胸腺DC的生成率明显高于对照组;MTT检测结果也显示:没有CpG2006刺激时,胸腺DC刺激T细胞增殖的能力比较弱,但添加CpG2006刺激后,胸腺DC趋向于成熟表型,刺激T细胞增殖的能力有所增强。提示,Flt3L在小鼠胸腺DC的分化发育中发挥重要的调节作用,明显促进小鼠骨髓来源的c-kit+造血干细胞向胸腺DC的分化。 相似文献
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背景:目前,分离和纯化人胎盘间充质干细胞的方法带有一定的盲目性,因为胎盘组织中其他细胞的干扰情况严重。目的:探讨酶消化和整体灌注的方法分离培养人胎盘间充质干细胞的效果,寻找一种高效的分离方法,以建立稳定的体外培养体系。方法:取完整的胎盘组织,按照不同的培养方法分离人胎盘间充质干细胞,酶消化组采用Ⅳ型胶原酶消化分离;整体灌注组采用整体灌注的方法进行分离。常规培养后对比两种方法分离培养细胞的生长特性、表面抗原表达以及多向分化潜能。结果及结论:两种分离方法培养的细胞在生长特性、多向分化潜能方面没有明显区别,流式细胞检测酶消化组细胞表达CD90明显低于整体灌注组细胞(P < 0.05)。可见酶消化和整体灌注的方法都可以分离人胎盘间充质干细胞,整体灌注的方法分离纯度更高。 相似文献
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背景:目前,分离和纯化人胎盘间充质干细胞的方法带有一定的盲目性,因为胎盘组织中其他细胞的干扰情况严重.目的:探讨酶消化和整体灌注的方法分离培养人胎盘间充质干细胞的效果,寻找一种高效的分离方法,以建立稳定的体外培养体系.方法:取完整的胎盘组织,按照不同的培养方法分离人胎盘间充质干细胞,酶消化组采用Ⅳ型胶原酶消化分离;整体灌注组采用整体灌注的方法进行分离.常规培养后对比两种方法分离培养细胞的生长特性、表面抗原表达以及多向分化潜能.结果及结论:两种分离方法培养的细胞在生长特性、多向分化潜能方面没有明显区别,流式细胞检测酶消化组细胞表达CD90明显低于整体灌注组细胞(P < 0.05).可见酶消化和整体灌注的方法都可以分离人胎盘间充质干细胞,整体灌注的方法分离纯度更高. 相似文献
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目的探讨丝素蛋白(SF)与丝素蛋白/羟基磷灰石复合材料(SF/HA)的体外细胞相容性,为组织工程提供理想的生物支架材料。方法将小鼠的骨髓间充质干细胞(C3H10T1/2)接种于上述两种生物材料上,运用四唑盐比色试验(MTT法)检测细胞的增殖能力,利用倒置显微镜和扫描电镜观察细胞在材料上的生长形态。结果 C3H10T1/2在SF与SF/HA上都能很好地黏附、生长和增殖。SF、SF/HA和C3H10T1/2都有良好的细胞相容性。结论 3%SF、6%SF、600%SF/HA3组多孔材料的体外细胞相容性最好。 相似文献
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为了探讨如何更好地培养八年长学制学生科学研究能力,文章结合近年来对八年长学制学生科学研究培养的一些实际经验,介绍了在博士导师的指导下对八年长学制学生的培养过程,如从一入校就抓起,按照培养正式科研型博士生为他们制定科研规划,逐步有计划地安排他们参加科学研究活动,目前已经初步取得了一些阶段性成果,文章给予了总结,并为后续的工作提出一些新的打算。 相似文献
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血链球菌脑膜脑炎为罕见病例,快速诊断血链球菌脑膜脑炎是临床治疗该疾病的关键。然而,目前的诊断技术并不支持对这种疾病的早期诊断。脑脊液基因组测序是一种早期诊断中枢神经系统感染的很有前途的方法。据笔者所知,在血链球菌脑膜脑炎的诊断中使用脑脊液基因组测序的报道很少。现报告1例血链球菌脑膜脑炎的45岁男性患者,患者发病前无明显诱因。常规检查,包括革兰染色和脑脊液培养,未发现细菌感染。然而,应用脑脊液基因组测序检测到了血链球菌。该病例报告表明,通过脑脊液基因组测序可以诊断出临床原因不明的脑膜脑炎。[国际神经病学神经外科学杂志, 2021, 48(2):202-206] 相似文献